8-900-374-94-44
[email protected]
Slide Image
Меню

8 лада: Купить LADA (ВАЗ) 2108 с пробегом: продажа автомобилей Лада 2108 б/у в Москве

Содержание

Калькулятор ТО автомобилей LADA - Официальный сайт LADA

Калькулятор ТО автомобилей LADA - Официальный сайт LADA

Выберите город

МоскваСанкт-ПетербургТольятти, Самарская областьУфа, Республика БашкортостанКраснодар, Краснодарский КрайЕкатеринбург, Свердловская областьСамара, Самарская областьКазань, Республика ТатарстанНижний Новгород, Нижегородская областьЧелябинск, Челябинская область

Тольятти

Настоящий раздел содержит информационные сведения, позволяющие ознакомиться с ориентировочной стоимостью технического обслуживания Вашего автомобиля1

LADA Granta

Drive Active

учебная

Cross

универсал

хэтчбек

лифтбек

седан

LADA Vesta

Sport

CNG

SW Cross

SW

Cross

седан

LADA XRAY

Cross


LADA Largus

фургон

Cross

универсал

Новый LADA Largus

фургон

Cross

универсал

LADA Niva

Off-road


LADA Niva Travel


LADA Kalina

Sport версии

Cross

универсал

хэтчбек

LADA Niva Legend

5 дв.

3 дв.

LADA Granta 2011-2018

Sport версии

лифтбек

седан

LADA Priora

седан

1 - cтоимость технического обслуживания указана с учетом применения моторного масла «LADA». Для получения подробной информации об обязательных к исполнению операций по техническому обслуживанию, стоимости запасных частей и материалов Вашего автомобиля обращайтесь к официальным дилерам АО «АВТОВАЗ».
- итоговая стоимость технического обслуживания (ТО), указанная в настоящем калькуляторе, рекомендуется АО «АВТОВАЗ» как максимальная розничная цена и может отличаться от действительных цен официальных дилеров LADA. Дилеры LADA могут устанавливать стоимость предложения меньше, чем рекомендованная максимальная розничная цена. Обозначенные цены не охватывают случаи использования на ТО материалов, отличных от указанных АО «АВТОВАЗ», а равно выполнения работ дополнительно к регламентным.
- информация о максимальных рекомендованных розничных ценах ТО в настоящем разделе носит справочный характер и ни при каких обстоятельствах не является публичной офертой, определяемой положениями статьи 437 Гражданского кодекса Российской Федерации. АО «АВТОВАЗ» оставляет за собой право вносить изменения в регламент технического обслуживания, а также изменять состав запасных частей и материалов без предварительного уведомления.

- сведения настоящего раздела предназначены исключительно для некоммерческих целей (личных, ознакомительных, исследовательских и иных не связанных с предпринимательской деятельностью). Посетители сайта www.lada.ru не вправе использовать информацию в коммерческих целях, в том числе не имеют права воспроизводить, изменять, рассылать или публиковать информацию в части или полностью без получения предварительного письменного согласия АО «АВТОВАЗ».

Для улучшения работы сайта и его взаимодействия с пользователями мы используем файлы cookie. Продолжая работу с сайтом, Вы разрешаете использование cookie-файлов. Вы всегда можете отключить файлы cookie в настройках Вашего браузера.

Принять

LADA Granta седан - Официальный сайт LADA

• Подушка безопасности водителя
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Аудиоподготовка

• 14'' стальные диски
• Запасное полноразмерное стальное колесо 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)

• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Центральный замок
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Аудиоподготовка

• 14'' стальные диски
• Колпаки колес декоративные
• Запасное полноразмерное стальное колесо 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол

• Центральный замок
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Обогрев наружных зеркал
• Кондиционер
• Аудиоподготовка

• 14'' стальные диски
• Колпаки колес декоративные
• Запасное полноразмерное стальное колесо 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Центральный замок
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Подогрев передних сидений

• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Кондиционер
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 14'' стальные диски
• Колпаки колес декоративные
• Запасное полноразмерное стальное колесо 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Заднее сиденье с раскладкой в пропорции 60/40
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления

• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Центральный замок
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота черного цвета
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 15'' легкосплавные диски оригинальные
• Запасное стальное колесо временного использования 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Центральный замок
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Кондиционер
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 14'' стальные диски
• Колпаки колес декоративные
• Запасное полноразмерное стальное колесо 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни

• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Заднее сиденье с раскладкой в пропорции 60/40
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Центральный замок
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Кондиционер
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота черного цвета
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 15'' легкосплавные диски оригинальные
• Запасное стальное колесо временного использования 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира

• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Заднее сиденье с раскладкой в пропорции 60/40
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Климатическая система
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 15'' легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Заднее сиденье с раскладкой в пропорции 60/40
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Климатическая система
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 15'' легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)
• Система электронного контроля устойчивости (ESC)
• Противобуксовочная система (TCS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Заднее сиденье с раскладкой в пропорции 60/40
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Датчики парковки задние
• Датчики дождя и света
• Климатическая система
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 15'' легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Дневные ходовые огни
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Центральный замок
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Кондиционер
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 14'' стальные диски
• Колпаки колес декоративные
• Запасное полноразмерное стальное колесо 14''

• Подушка безопасности водителя
• Подушка безопасности переднего пассажира
• Подголовники задних сидений 2 шт.
• Крепления для детских сидений ISOFIX
• Блокировка задних дверей от открывания детьми
• Иммобилайзер
• Охранная сигнализация
• Дневные ходовые огни
• Противотуманные фары
• Система экстренного оповещения ЭРА-ГЛОНАСС
• Антиблокировочная система с электронным распределением тормозных сил (ABS, EBD)
• Система вспомогательного торможения (BAS)

• Бортовой компьютер
• Подсказчик переключения передач в комбинации приборов (только для МТ)
• Заднее сиденье с раскладкой в пропорции 60/40
• Противосолнечный козырек пассажира с зеркалом
• Розетка 12V

• Электроусилитель рулевого управления
• Регулируемая по высоте рулевая колонка
• Регулировка ремней безопасности передних сидений по высоте
• Сиденье водителя с регулировкой по высоте
• Воздушный фильтр салона
• Легкая тонировка стекол
• Складной ключ
• Центральный замок с дистанционным управлением
• Электростеклоподъемники передних дверей
• Электростеклоподъемники задних дверей
• Подогрев передних сидений
• Электропривод и обогрев наружных зеркал
• Обогрев ветрового стекла
• Климатическая система
• Круиз-контроль и ограничитель скорости
• Аудиосистема (FM, USB, SD-карта, Bluetooth, Hands free), 4 динамика

• Наружные зеркала с боковыми указателями поворота в цвет кузова
• Наружные ручки дверей в цвет кузова
• Молдинги боковых дверей
• 15'' легкосплавные диски
• Запасное стальное колесо временного использования 14''

снимут с производства или добавят мощности? — журнал За рулем

Нынешняя Веста теряет комплектации с мощным мотором, но в рамках рестайлинга двигатель, по предварительным данным, тоже будет обновлен.

Материалы по теме

Двигатель ВАЗ-21179 объемом 1,8 литра и мощностью 122 л.с. постепенно исчезает из списка комплектаций Весты. Сокращение вариантов модели с таким двигателем началось еще летом 2020 года; в феврале и марте 2021 года такой мотор последовательно исключили у двух комплектаций седана — сначала Exclusive, а затем Comfort. Теперь же, как пишет Лада.Онлайн, у обычных седанов и универсалов «старший» двигатель убрали вовсе (последней «жертвой» стала комплектация Luxe), и он остался только в приподнятых версиях Vesta Cross и Vesta SW Cross.

Однако в этих вариантах, если вам нужен двигатель помощнее в сочетании с МКП (ВАЗ-21179 агрегатируется только с механикой), пока есть из чего выбрать: в четырех из тринадцати комплектаций и седаны Vesta Cross, и универсалы Vesta SW Cross комплектуются таким агрегатом, включая версии с новой мультимедиа EnjoY Pro.

Двигатель 1,8 остался только у кросс-версий (на фото — Vesta Cross), но после рестайлинга семейства Vesta он станет мощнее и, возможно, совершеннее

Двигатель 1,8 остался только у кросс-версий (на фото — Vesta Cross), но после рестайлинга семейства Vesta он станет мощнее и, возможно, совершеннее

Между тем, в ленте сообщества KVIRING DRIVE VK SHOP соцсети ВКонтакте на днях появилось сообщение: автор со ссылкой на собственные источники утверждает, что для мотора 1. 8 готовится новая версия. Она, по этим данным, получит индекс ВАЗ-21178, будет оснащаться фазовращателями на впуске и выпуске (сейчас — только на впуске) и обладать отдачей в 136 л.с. и 175 Нм против 122 л.с. и 170 Нм у нынешнего ВАЗ-21179. В паре с мотором пойдет французская 6-ступенчатая МКП.

  • Источник утверждает, что этот силовой агрегат планируется к установке на фейслифтинговую версию Lada Vesta, которая ожидается в продаже в начале 2022 года.

Фото: АВТОВАЗ

Понравилась заметка? Подпишись и будешь всегда в курсе!

За рулем на Яндекс.Новости

Официальный дилер LADA в Екатеринбурге АВТОВЕК

 

АВТОВЕК — официальный дилер LADA в Екатеринбурге. Продаем все модели производителя АВТОВАЗ — Granta, Vesta, Largus, XRAY, 4X4, Niva

Предлагаем коммерческие и специальные модификации: бортовую платформу, фургон, социальное такси, автомобиль скорой помощи на базе популярных моделей бренда.

Каталог на официальном сайте Лада

Перед посещением автосалона Лада в Екатеринбурге вы можете получить подробную информацию об автомобилях онлайн. На официальном сайте мы публикуем:

  • перечень доступных вариаций кузова каждой модели;
  • комплектации и актуальные расценки;
  • подробное описание и технические характеристики;
  • фото экстерьера и интерьера.

Сервисное обслуживание и ремонт LADA в Екатеринбурге

Официальный дилер LADA в Екатеринбурге также занимается сервисным обслуживанием автомобилей. По гарантии выполняем следующие виды работ:

  • компьютерную диагностику;
  • покраску;
  • ремонт двигателя;
  • кузовной ремонт любой сложности, в том числе замену стекол;
  • устранение поломок автоэлектрики;
  • ремонт подвески, КПП, других узлов;
  • развал-схождение.

Преимущества обращения к нам

Заботимся о покупателях. Обслуживаем клиентов в просторном комфортном помещении, предлагаем воду, горячие напитки и шоколад.

Предлагаем новые авто с пробегом. Чтобы подобрать подходящую, воспользуйтесь формой на сайте: менеджер обработает запрос, уточнит наличие или возможность доставки в город и перезвонит.

Выполняем диагностику и доработку. Новые машины диагностируем бесплатно. По вашему желанию ставим уникальное оборудование, например, электропривод на заднюю дверь.

Почему покупать у нас выгодно

Официальный дилер LADA в Екатеринбурге предлагает:

Кредиты и рассрочку

Помогаем оформить автокредит в банках-партнерах, предоставляем рассрочку под 0%.

Скидки

Постоянным клиентам предоставляем скидки от 3–15% на запчасти, страхование, ремонт и техобслуживание, установку дополнительного оборудования.

Также проводим послегарантийное обслуживание и ремонт машин LADA, устанавливаем дополнительные детали — оригинальные запчасти завода-производителя и доступные аналоги.

Чтобы записаться на тест-драйв в удобное время, позвоните перейдите по ссылке в заявку, это удобно и быстро

LADA в Твери в РУМОС — официальном дилере Лада ВАЗ

LADA в Твери в РУМОС — официальном дилере Лада ВАЗ

 


«РУМОС» - официальный дилер крупнейшего производителя легковых автомобилей в России и Восточной Европе АО «АВТОВАЗ».

РУМОС является официальным дилером LADA в Твери и Тверской области. Новый автосалон ЛАДА выполнен в полном соответствии со стандартами АВТОВАЗА, что гарантирует абсолютный комфорт для наших клиентов.

Мы находимся на окружной г. Твери (автодорога М10 «Москва-Санкт-Петербург»), 165 км между Волоколамской развязкой и Тургиновским шоссе.
 

В автосалоне РУМОС  представлен весь модельный ряд автомобилей LADA:  лаконичная LADA Granta, стильная и современная LADA Vesta, солидный и агрессивный LADA XRAY, вездеходная Niva Legend, новый функциональный и вместительный LADA Largus и верная традициям LADA Niva Travel. 

Различные варианты комплектаций модельного ряда такие как: #Club #Black #Instinct #EnjoY Pro подчеркнут ваш исключительный стиль и уникальность.

У официального дилера LADA РУМОС представлен большой склад автомобилей в наличии. Большая часть с выкупленным у производителя ПТС, а это значит, что от вашего решения купить новую LADA до ее получения пройдет не более 2 часов.

Обязательно пройдите Тест-Драйв в нашем автосалоне. Это позволит вам однозначно понять, как ведет себя автомобиль на дороге, достаточно ли вам в нем пространства, удобно ли вам им управлять, а также, несомненно, подарит массу положительных эмоций.

Ждем вас ежедневно с 9.00 до 21.00 по адресу: г. Тверь, Калининский р-он, автодорога Москва-Санкт-Петербург,165 км. Тел.  +7 (4822) 73-84-52   

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований. Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований. Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований. Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

В Казани "Лада Калина" с 8 девушками врезалась в жилой дом :: Общество :: РБК

В Казани автомобиль "Лада Калина", в котором находились восемь девушек, попал в дорожно-транспортное происшествие. В результате автокатастрофы четверо человек были госпитализированы.

Фото: РБК

Как сообщили в пресс-службе городской ГИБДД, авария произошла в ночь на понедельник, 14 ноября, на улице Гафури. По предварительным данным водитель "Лады Калины", 21-летняя студентка, не справилась с управлением и, превысив скорость, врезалась в стену жилого пятиэтажного дома.

По словам представителя ГИБДД, три девушки сидели впереди, пятеро втиснулись на заднее сиденье. При этом никто из них не был пристегнут ремнями безопасности. В салоне машины сотрудники полиции нашли кальян и бутылку от алкогольного напитка. У водителя взяты анализы на наличие в крови алкоголя.

В результате ДТП семь девушек были доставлены в больницу. В настоящее время в больнице остаются четверо пострадавших, у них зафиксированы переломы и черепно-мозговые травмы.

По факту ДТП возбуждено дело об административном правонарушении. В случае, если у пострадавших зафиксируют тяжкий вред здоровью, будет возбуждено уголовное дело, сообщили в правоохранительных органах.

Седан Lada Vesta Sport взял на вооружение 145-сильный мотор — ДРАЙВ

Четырёхдверка в сравнении со стандартной длиннее и шире на 10 мм: 4420 и 1774 мм. Клиренс — 162 мм (-16). Передняя и задняя колеи расширены с 1510/1510 до 1545/1525 мм. Снаряжённая масса — 1211 кг (-19). Развесовка по осям — 61,5/38,5 в пользу передка.

Бензиновая «четвёрка» ВАЗ-21179 объёмом 1,8 л форсирована со 122 л.с., 170 Н•м до 145 сил, 187 Н•м. Напарницей выступает пятиступенчатая «механика». Разгон до сотни требует 9,6 с (-2,5). Максимальная скорость — 198 км/ч (+12)... От «заряженного» седана Lada Vesta Sport вообще-то ожидались 149 сил. Да и продажи изначально были запланированы на март. Задержался «спортсмен» или опоздал, решать не нам, а его премьера состоится в августе на Московском автосалоне.

В целом Vesta Sport внешне повторяет одноимённый концепт образца 2016 года. Передние арки расширены для 17-дюймовых колёс, на боковые зеркала наклеен чёрный глянец, а всё самое интересное — в бамперах: раздвоенный выхлоп, диффузор, фальшивые воздуховоды.

На передней оси подъёмная сила снижена с 33 до 7,8 кг, на задней — с 22,2 до 11,6. Это доказали тесты в аэродинамической трубе. Система стабилизации теперь срабатывает позже и отключается полностью. Противотуманки умеют подсвечивать повороты.

У подвески с новыми настройками укоротились хода. Заменены стойки и задние амортизаторы. Благодаря улучшенному охлаждению моторного отсека температура воздуха на впуске не превышает 40 градусов. Система выпуска тоже модернизирована. Заново откалибрована регулировка фаз газораспределения, повышено давление в топливопроводе. Двигатель получил распредвалы с изменённым профилем, усилены приводы колёс. Сзади остались стоковые дисковые тормоза, спереди увеличены диски, колодки и поршни. Выбор пал на шины Continental ContiSportContact 5 размерности 205/50 R17 и 205/45 R18. Со всеми вопросами АвтоВАЗ предлагает приходить на шоу ММАС.

Update

Интерьер воплотил проверенную временем концепцию «красное на чёрном». Приборка будто бы специально разработана для Спорта, хотя никаких отличий от панели обычной Весты, кроме алой подсветки и надписи Sport, обнаружить не удалось.

Сегодня АвтоВАЗ рассекретил салон, назвав ключевым элементом дизайна «красную ленту». Она не только опоясывает седан снаружи, но и рассредоточена в виде акцентов по интерьеру. Сиденья и руль отделаны «экокожей» с орнаментом «под углеволокно» и контрастной прострочкой. На красные вставки из алькантары нанесена невидимая на фото «икс-графика». Фрагменты пластика на передней панели и дверях опять же имитируют углеродное волокно, перемежаясь с чёрным глянцем. Потолок и стойки зачернены, в ноги светят красные фонари. Результат? «Энергетическая оболочка, вобравшая в себя одновременно страсть и адреналин, переданные через мощный темперамент автомобиля», — сообщают нам из Тольятти.

Гитара

- альтернатива капо на 8-м ладу

Вот еще кое-что, что может помочь.

Каподастр позволяет использовать знакомый набор аккордов в одной тональности для воспроизведения песни в другой тональности. Так, например, если вам удобнее играть аккорды, используемые в тональности G (такие аккорды, как G, C и D), но вы хотите сыграть песню в тональности A, вы можете просто поставить каподастр на 2-й лад, а затем аппликатура аккорда G позволит вам играть ноты аккорда A, а другие аккорды также будут перебираться, как аккорды из набора аккордов, используемого для тональности G, но они будут звучать как аккорды из тональности A.

Итак, если вы хотите, чтобы песня была в тональности, которая требует, чтобы вы играли аккорды, которые вы бы предпочли не играть, вы можете использовать каподастр, чтобы играть те же аккорды, используя аппликатуру для аккордов, которые вы предпочитаете. К сожалению, чтобы добраться до нужной тональности с нужным набором аккордов, в некоторых случаях вы можете оказаться на 8-м или 9-м ладу (или хуже), что сделает рабочее пространство намного более тесным и, вероятно, сыграет на октаву выше, чем если бы вы играли без него. капо.

Если есть только один набор аккордов, который вы можете сыграть, ваши возможности ограничены.Если вы настроили гитару на ступеньку выше, вы можете переместить каподастр на седьмой лад, но тогда вам придется заново настраивать гитару, чтобы играть что-нибудь без каподастра, который вы не хотели бы играть на пол-ступени резко. Кроме того, более высокое натяжение струны будет оказывать большее давление на гриф, что может потребовать регулировки анкерного стержня, и затрудняет проталкивание струн к ладам.

Если вы можете сыграть достаточно аккордов, чтобы играть более чем в одной тональности, вы можете найти другую позицию каподастра, которая позволит использовать альтернативный набор форм аккордов для воспроизведения той же тональности, что и при надевании каподастра. 8-й лад, используя тот набор аккордов, который вы используете сейчас.

Таблица ниже поможет вам найти некоторые возможные альтернативные позиции каподастра и соответствующие наборы аккордов.

Если вы возьмете один из аккордов (может быть мажор, минор или 7-я степень) из первого вертикального столбца желтого цвета в качестве формы аккорда, который вы хотите сыграть, столбцы под 1-11 дадут вам аккорд, который он будет звучать. как если бы вы поставили каподастр на лад, обозначенный цифрой в верхней части столбца, и сыграли аккорд в 1-м столбце.

Итак, если вы хотите найти альтернативы использованию каподастра на 8-м ладу, чтобы сыграть определенную песню с использованием предпочтительных аккордов, но при этом музыка звучит в тональности, в которой вы хотите петь, сначала узнайте, в какой тональности и формы аккорда вы используете сейчас происходит от.Например, если первый взятый вами аккорд - это C, а также вы играете F и G, вы, скорее всего, используете аккорд, установленный для тональности C.

Но, как вы можете видеть на диаграмме, размещение каподастра на 8-м ладу приведет к тому, что аккорды будут звучать в тональности G # (которая такая же на гитаре, что и Ab). G # / Ab не является популярной тональностью для гитары, потому что есть не так много аккордов в этой тональности, которые можно сыграть в открытой позиции. Таким образом, использование набора аккордов для тональности C с каподастром на 8-м ладу позволит вам легче играть песню.

Чтобы использовать таблицу для поиска других вариантов, как только вы узнаете, в какой тональности вы поете песню, играя аккорды C с каподастрами на 8-м ладу (в этом примере G # / Ab), затем найдите другие поля, где появляется такая же тональность (G # / Ab в примере). Затем следуйте по этой строке по горизонтали до первого столбца (желтого) и посмотрите, какой ключ находится в первом поле.

Таким образом, вы можете найти другие наборы аккордов, которые можно использовать с различными позициями каподастра для воспроизведения песни в тональности, в которой вы хотите петь, но используя набор аккордов, которые вам легче сыграть.

Некоторые возможности в нашем примере включают Key of D , набор аккордов с capo на 6-м ладу , Key of E Набор аккордов с Capo на 4-м ладу или аккордами F capo 3 или G аккордами Капо 1 . Поэтому, если вам комфортно использовать любой из упомянутых выше наборов аккордов, вы можете переместить каподастр ближе к гриву и по-прежнему играть песню в тональности G # / Ab, используя аккорды из тональности D, E, F или G.

Вы можете использовать веб-сайт, на который ссылается ответ Ли Уайта, чтобы выполнить процесс транспонирования всех аккордов из набора, используемого для 8-го лада, в соответствующие аккорды, используемые в альтернативном наборе аккордов, который вы выбрали.

Итак, в примере, приведенном выше, , если вы играете аккорды C с каподастрами на 8-м, но хотите использовать аккорды G, чтобы каподастра находилась на 1-м ладу вместо , вы можете использовать таблицу транспонирования для определения аккордов в G, которые соответствуют аккордам, используемым при воспроизведении песни с использованием набора аккордов C.Технически вы фактически не будете транспонировать песню, потому что в любом случае она будет звучать в той же тональности (G # Ab в нашем примере). Но методика определения новых аккордов для использования в наборе аккордов G такая же, как если бы вы выполняли транспонирование от C до G.

Надеюсь, это имеет смысл и поможет вам найти альтернативу, которая вам подходит. Удачи и приятного времяпровождения!

Ноты на грифе гитары | Guitar Secrets Бесплатные онлайн уроки игры на гитаре

[Sharps and flats] [Табулатура для гитары] [Упражнения на гитаре] [Настройка гитары]

Наши уроки игры на гитаре будут использовать цвета для представления гитарных нот и гамм на грифе гитары.Посмотрите ниже и обратите внимание на цвета, которые мы будем использовать для обозначения каждой ноты и конкретной гитарной гаммы.

В мажорной тональности 8 нот. В тональности до мажор у вас есть ноты C, D E F G A B и C. Есть также острые или плоские ноты, которые рассматриваются в этом конкретном уроке игры на гитаре.

Цвета ниже не только представляют каждую ноту на грифе, но они также представляют конкретную гитарную гамму. Например, мажорная шкала C будет синей, мажорная шкала B будет зеленой, мажорная шкала F будет пурпурной и так далее.Цвета также будут отображать второстепенные гаммы таким же образом.

В этом уроке игры на гитаре мы узнаем, где каждая нота расположена на грифе гитары.

Музыкальный тон или ноту можно создать несколькими способами. Например, если вы нажмете одну клавишу на пианино, вы сыграете ноту. Чтобы сыграть ноту на гитаре, вы должны взволновать или надавить на струну, чтобы создать ноту.

На изображении ниже изображен гриф гитары и показаны ноты вдоль струны Low E до 16-го лада. Струна Low E - самая толстая струна на вашей гитаре. На грифе гитары изображены ноты E F F # G G # A A # B C C # D D # E F F # G и G #.

Еще раз взгляните на изображение ниже и обратите внимание на ноты вдоль нижней струны ми. Первая нота - это нота E, то есть струна Low E в открытой позиции. Открытая позиция означает, что вы берете струну или играете на ней, не нажимая на ноту и не трогая ее.Это даст вам низкую ноту ми или тон.

8 нот на изображении ниже представляют все ноты в тональности до мажор. Тональность до мажор уникальна тем, что не содержит диезов или бемолей, которые называются случайными. Если бы вы играли на пианино, вы могли бы сыграть тональность до мажор, используя только белые клавиши.

Диезные ноты обозначены символом (#). Плоские ноты обозначены символом (b).

Черные клавиши пианино - это ноты (диез #) и (бемоль b), и они используются для создания других гамм или клавиш.Например, если вы хотите играть в тональности соль мажор, вы должны использовать ноты G A B C D E F # G. Обратите внимание на F #, это будет черная клавиша на фортепиано. Эта информация будет подкрепляться по мере продвижения по урокам игры на гитаре, и больше информации будет рассмотрено в уроке диез и бемоль.

Мы собираемся двигаться по нижней струне ми и размещать каждую ноту на грифе. Струна Low E является самой толстой струной на гитаре и создает самую низкую ноту или тон гитары.Струна High E является самой тонкой струной и создает более высокие ноты, чем струна Low E.

Будет двенадцать различных нот, которые нам нужно выучить на грифе гитары.

12 нот в строке Low E : E F F # G G # A A # B C C # D D # и E

Мы проиллюстрируем эти гитарные ноты и их расположение на струне Low E. Посмотрите на гриф ниже и обратите внимание на 6 нот слева от грифа гитары. Эти 6 нот представляют 6 струн, используемых на гитаре.Эти 6 струн, когда они настроены, будут низкой струной E, струной A, струной D, струной G, струной B и высокой струной E.

д

Посмотрите на изображение грифа гитары выше и найдите ноту E или Fat E. Эта нота E будет представлять струну Low E, когда она играется открытой. Если вы выберете струну Low E, не трогая ни одной ноты, вы сыграете ноту E. Конечно, чтобы создать эту ноту E, ваша гитара должна быть правильно настроена. Я рекомендую вам иметь какой-нибудь гитарный тюнер.

Если бы вы ладили или нажимали на струну Low E на первом ладу, вы играли бы ноту F , посмотрите выше и найдите эту ноту F на первом ладу. Следующая нота на второй струне Low E - это нота F # . Это (острый символ #). Чтобы получить резкую ноту, мы переместим на 1/2 шага выше предыдущей ноты, 1/2 шага на гитаре будет на 1 лад. Нота E никогда не будет резкой. Посмотрите ниже и обратите внимание, что нет E # примечания. 1/2 шага от ноты F будет нотой F #.Посмотрите на 2-й лад ниже на струне Low E. Это примечание F #.

Двигаясь по струне Low E, мы достигаем ноты G. Посмотрите выше и найдите ноту G на 3-м ладу. По мере того, как мы поднимаемся на 1/2 шага или 1 лад на нижней струне E, мы дойдем до ноты G #, 4-го лада. Найдите эту заметку G #.

Двигаясь по струне Low E, мы достигаем ноты A на 5-м ладу. Переходя к следующему ладу, у нас есть нота A #.

На 7-м ладу мы встречаем ноту си. Найдите эту ноту B и обратите внимание, что нота B # отсутствует.У вас никогда не будет банкноты B #. Мы узнаем об этом больше, когда построим основные шкалы в этой главе.

Следующей нотой на 8-м ладу будет нота C. Затем у нас были бы C #, D, D # и, наконец, снова нота E. Я повторяю еще раз, потому что на гитаре каждая нота повторяется после 12 ладов. Чтобы доказать это, посмотрите на ноту G на 3-м ладу, вы обнаружите, что нота G повторяется на 15-м ладу, на расстоянии 12 ладов от 1-й ноты G. Сравните это с оставшимися примечаниями.

Вы можете вычислить каждую ноту на каждой из шести струн, используя тот же процесс, что и выше.Изображение ниже покажет вам, как найти ноты вдоль строки A. Посмотрите на изображение ниже. Первая нота начинается с открытой строки A, найдите эту ноту. Следующей нотой на струне A, 1-м ладом, будет нота A #; найди эту записку. Следующая нота - нота B. Вы можете видеть, что он продолжается, как и струна Low E.

Каждая нота оформлена так же, как и на струне Low E. Обратите внимание, что нет B # или E #. У этих двух нот никогда не будет диеза.Обратите внимание, нота A повторяется после 12 ладов. Все ноты будут повторяться через 12 ладов, это касается каждой ноты, гаммы и аккорда.

На изображении ниже показаны все восходящие и нисходящие ноты грифа гитары. Подъем на грифе означает подъем по грифу или переход к более высоким нотам. Выше будет двигаться слева направо. Например, фа выше, чем нота ми. От E до F, от F до G, от A до B по возрастанию. От B к A, от A к G ..... спускается или опускается.

Очень важно выучить все ноты грифа гитары и их расположение. Используйте эти пустые иллюстрации, чтобы заполнить все примечания на грифе. Вы можете использовать приведенную ниже иллюстрацию со всеми нотами грифа в качестве руководства.

Посмотрите на изображение ниже. На этом изображении есть все ноты гитары, но ноты ля обведены кружком. Обратите внимание, что некоторые ноты A имеют разные цвета. Воспроизведение каждой ноты A и ее определенного цвета будет звучать одинаково.Ноты A желтого и зеленого цветов находятся на более низкой октаве, чем желтые и синие A.

Желтая и синяя А находятся на более низкой октаве, чем желтые и оранжевые А. Сыграйте каждую ноту A на грифе и сравните друг с другом. Эта иллюстрация со временем станет второй натурой.

Задание на урок игры на гитаре:

  • Используйте распечатанные иллюстрации, чтобы заполнить все примечания на грифе по возрастанию. Используйте изображение выше, чтобы помочь.
  • Когда все ноты будут заполнены, обведите все ноты A, C, D, E и G. Это ноты пентатоники ля минор, мы изучим эту гамму позже.
  • Попробуйте заполнить все записи на грифе по памяти. Делайте это до тех пор, пока не сможете сделать это без ошибок.
  • Затем используйте пустую иллюстрацию и заполните все примечания вдоль обеих струн ми ми. Попробуйте заполнить эти записи по памяти. Сделайте несколько копий иллюстраций на чистом грифе. Это отличное упражнение для мозга, которое поможет вам визуализировать размещение заметок.
  • Начните запоминать позиции нот A и C на грифе гитары.
  • Для следующего урока изучите урок Sharps and Flats.
  • Если у вас есть вопросы, напишите нам.

Удачи,

Guitar Secrets

Подтверждение FRET в отдельных живых клетках отсутствия значительной амилоидной β-опосредованной активации каспазы 8

Реферат

Когда клетки подвергаются воздействию молекул, вызывающих гибель, таких как фактор некроза опухоли-α или Fas, каспаза 8 активируется и расщепляет посредник апоптоза, Bid, который является членом семейства Bcl-2.После дополнительной модификации C-концевой фрагмент Bid перемещается в митохондрии и индуцирует высвобождение цитохрома c в цитоплазму. В попытке непосредственно наблюдать расщепление Bid и следующие события в живых клетках мы сконструировали вектор, кодирующий Bid, слитый с желтым флуоресцентным белком (YFP) и голубым флуоресцентным белком (CFP) (YFP-Bid-CFP). При экспрессии YFP-Bid-CFP в клетках млекопитающих мы смогли наблюдать эффективную передачу энергии от возбужденного CFP к YFP в молекуле YFP-Bid-CFP и, что важно, гибридный белок YFP-Bid-CFP был полностью функциональным. в камерах.Когда YFP-Bid-CFP расщеплялся каспазой 8 при активации анти-Fas Abs, но не Aβ или туникамицином, такой передачи энергии не обнаруживалось. Насколько нам известно, это первый отчет () о визуализации активации Bid протеолитическим расщеплением с прямым наблюдением за расщеплением YFP-Bid-CFP в цитоплазме и последующей транслокацией расщепленного Bid в митохондрии и ( ii ) отсутствие значительной активации каспазы 8, опосредованной Aβ или туникамицином, в отдельных живых клетках.

Апоптоз играет важную роль в развитии и гомеостазе, и было показано, что каспазы играют важную роль в апоптозе. Сложные фенотипы мышей с «нокаутом каспаз» предполагают, что несколько механизмов активации каспаз действуют параллельно и что пути передачи сигнала к апоптозу являются специфичными для стимула и специфичными для отдельных типов клеток (1).

Повреждение митохондрий является основным этапом усиления сигнала в апоптотическом пути, и митохондрии также являются основным местом действия белков семейства Bcl-2 (2).Многие члены этого семейства содержат четыре консервативных домена (2), обозначенных Bh2, Bh3, Bh4 и Bh5 (BH, B cl-2 h омологический домен), и хотя многие из этих белков являются проапоптотическими [Bax, Bak и др. (3, 4)], другие - антиапоптотические [Bcl-2, Bcl-x L и др. (5, 6)]. Независимо от их про- или антиапоптотических эффекторов, многие из этих белков имеют склонность к образованию гомо- и гетеродимеров.

Bid - проапоптотический член семейства Bcl-2, который содержит только домен Bh4.Впервые он был отмечен за его способность связываться с Bcl-2 и Bax (3). Мутационный анализ показал, что интактный домен Bh4 необходим для связывания с Bcl-2 и Bax, и эта связывающая активность коррелирует со способностью Bid вызывать гибель клеток. Эти наблюдения предложили модель, в которой Bid служит лигандом, вызывающим смерть, который перемещается из цитозоля на митохондриальную мембрану, чтобы инактивировать Bcl-2 или активировать Bax (3, 7). В пролиферирующих клетках неактивный Bid (белок 22 кДа; p22) локализуется в цитоплазме.При воздействии на клетки фактора некроза опухоли-α или Fas, которые индуцируют апоптоз, каспаза 8 активируется сигнальным комплексом, индуцирующим смерть. Расщепление Bid каспазой 8 дает два фрагмента (p15 и p7) (8). Открытый остаток глицина на С-конце Bid (p15) подвергается миристоилированию N- (9), и полученный C-концевой фрагмент Bid (p15) перемещается на внешнюю мембрану митохондрий, где он связывается с Bax или с Бак (4, 10). Эти взаимодействия вызывают высвобождение цитохрома c из митохондрий, а высвобождение цитохрома c приводит к образованию комплекса, который содержит цитохром c , Apaf1 и каспазу 9 в цитоплазме.Этот комплекс активирует каспазу 9, а активная каспаза 9 расщепляет нижестоящие эффекторы каспазу 3 и каспазу 7 (11).

В предыдущем исследовании (9) GFP был слит с C-концом Bid и выявил транслокацию Bid-GFP в митохондрии из цитозоля. Однако эта система не могла непосредственно наблюдать расщепление Bid и, таким образом, предоставляла ограниченную информацию для мониторинга активации каспазы 8 в дополнение к транслокации Bid в отдельных живых клетках.

Недавно было продемонстрировано, что можно объединить два белка, которые флуоресцируют на разных длинах волн, и контролировать резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET) (12–14) и обнаруживать протеолитическую активность (15), точно так же, как обнаружение внутриклеточное расщепление нуклеиновых кислот с помощью FRET (16).Первым успешным примером этой стратегии было генетическое конструирование тандемных молекул синего флуоресцентного белка и GFP, связанных линкерной последовательностью, которая могла быть расщеплена определенной протеазой (17). FRET возникает, когда два белка, которые флуоресцируют на разных длинах волн (донор и акцептор), были связаны вместе, и энергия могла передаваться напрямую от донора к акцептору. Когда акцептор и донор были разделены протеолитическим расщеплением линкера, FRET не регистрировался.Таким образом, FRET - мощный инструмент для исследования молекулярных событий в живых клетках (12–19).

В нашей недавней работе Bid был идентифицирован как один из проапоптотических генов с помощью нашей системы обнаружения функциональных генов, основанной на рандомизированных гибридно-рибозимных библиотеках (20–22). Чтобы непосредственно наблюдать активацию идентифицированного Bid различными индукторами апоптоза и обнаруживать активность каспазы 8 в апоптотических клетках, мы сконструировали гибридный белок, соединив желтый флуоресцентный белок (YFP) и голубой флуоресцентный белок (CFP) с N-концом и C конец торгов соответственно.Используя нашу систему, мы получили in vivo изображений активации каспазы 8 в отдельной клетке, что позволило нам продемонстрировать отсутствие значительной активации каспазы 8, опосредованной амилоидом-β (Aβ) или туникамицином (Tm), у индивидуума. живые клетки.

Материалы и методы

Клонирование кДНК для Bid и конструирование вектора экспрессии для YFP-Bid-CFP.

Ген усиленного YFP (CLONTECH) амплифицировали с помощью ПЦР и вставляли в сайты Bam HI и Hin dIII pcDNA 3 (Invitrogen) для генерации pYFP.Ген усиленного CFP (CLONTECH) также был амплифицирован с помощью ПЦР и вставлен в сайт Xho I pYFP для генерации pFRET. Вектор pFRET-линкер (кодирующий YFP-линкер-CFP) кодировал три дополнительных остатка глицина в сайте Bam HI / Eco RI pFRET.

Полноразмерный ген для Bid амплифицировали из библиотеки кДНК печени человека в плазмиде (Takara, Kyoto) с использованием cBid up (5'-CAGGCCATGGACTGTGAGGTCAACA-3 ') и cBid down (5'-TCAGTCCATCCCATTTCTGGCTAAG-3') в качестве праймеров.Продукт ПЦР был клонирован в pGEM-T (Promega), и целостность клонированной кДНК была подтверждена секвенированием. Укороченную форму Bid амплифицировали с BidFRET-F (5'-CGGGATCCGAGTGCATCACAAA-3 ') и BidFRET-R (5'-GCGAATTCATTTCTGGCTAAGC-3') в качестве праймеров из клонированного Bid в pGEM-T. Продукт ПЦР расщепляли Bam HI и Eco RI и субклонировали по сайту Bam HI / Eco RI pFRET для создания pFRET-Bid. Укороченную форму Bid вставляли в вектор pYFP с использованием тех же рестрикционных ферментов.Короткую форму Bid с добавлением метионина амплифицировали с помощью Hind-Met-fBid-5 '(5'-AAGCTTATGGAGTGCATCACAAACCTACT-3'), поскольку усеченная форма Bid не имела стартового кодона, а BidFRET-r в качестве праймеров из клонированного Сделайте ставку в pGEM-T. Продукт ПЦР Bid вставляли в сайт Hin, dIII / Eco RI pFRET для генерации pBid-CFP.

Культура и трансфекция клеток.

Клетки

COS7 и клетки NIH 3T3 выращивали в среде DMEM (Sigma) с добавлением 10% FCS (GIBCO / BRL).Перед трансфекцией клетки делили на аликвоты по 1 × 10 6 клеток на 10-сантиметровую чашку или 1 × 10 5 клеток на 2-сантиметровую стеклянную чашку. Через 16–24 ч клетки трансфицировали pFRET-Bid с использованием реагента для трансфекции PolyFect (Qiagen, Chatsworth, CA) в соответствии с протоколом производителя. Клетки SK-N-SH выращивали в MEM-α (GIBCO / BRL) с добавлением 10% FCS (GIBCO / BRL). Клетки SK-N-SH стабильно трансфицировали плазмидами с использованием липофектамина 2000 (GIBCO / BRL) в соответствии с протоколом производителя.После трансфекций клетки отбирали воздействием Генетицина (Sigma) и клонировали стабильные клеточные линии.

Получение флуоресцентных изображений каждой клеточной линии.

Перед обработкой клеток лекарствами клетки, временно или стабильно экспрессирующие слитые белки, культивировали в чашке со стеклянным дном (IWAKI, Tokyo) в течение 40 или 24 часов соответственно. Клетки наблюдали с помощью стандартной флуоресцентной микроскопии Olympus IX-50. Чтобы наблюдать эффект in vivo FRET , клетки возбуждали с помощью фильтра возбуждения (440 ± 10 нм) плюс дихроичное зеркало 455 нм.Эмиссионные изображения YFP (545 ± 17,5 нм) и CFP (480 ± 15 нм) регистрировали с помощью охлаждаемой камеры устройства с зарядовой связью с компьютерным управлением (ARGAS-20, Hamamatsu Photonics). Затем цифровые флуоресцентные изображения обрабатывали с использованием программного обеспечения nih image. Контраст был изменен в изображении шкалы серого в том же диапазоне. Затем эти изображения были раскрашены программным обеспечением для фотошопа (Adobe Systems, Mountain View, CA). Изображения были вычтены из фона. Когда изображения сравнивались, растяжение контраста и цветовая шкала были идентичными, так что сопоставимая яркость в каждом изображении соответствовала сопоставимому сигналу над фоном.

Расщепление YFP-Bid-CFP рекомбинантной каспазой 8

in vitro .

клеток COS7, трансфицированных pFRET-Bid, собирали и ресуспендировали в буфере для обработки ультразвуком, который содержал 20 мМ Hepes (pH 7,5), 10 мМ KCl, 2,5 мМ MgCl 2 , 1 мМ EDTA, 1 мМ EGTA и 1 мМ DTT при 4 мМ. ° C. После обработки ультразвуком гомогенат центрифугировали при 10000 × g в течение 10 минут, и супернатант использовали для анализа расщепления рекомбинантной человеческой каспазой 8 (Oncogen Science) при 25 ° C.

Оптические измерения.

После инкубации с каспазой 8 реакционные смеси (общий объем 600 мкл) переносили в кювету спектрофлуориметра (FP-750, Jasco, Tokyo). Спектры испускания флуоресценции регистрировали после возбуждения при 433 нм. Экстракты родительских клеток использовали в качестве контроля.

Иммуноблоттинг.

Экстракты клеток, которые были инкубированы с каспазой 8, разделяли с помощью SDS / PAGE (10% полиакриламид), а затем белки переносили на Clear Blot Membrane-P (ATTO, Tokyo) с помощью электропереноса.Блоты зондировали поликлональными антителами против GFP, а затем вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой (Amersham Pharmacia). Иммунореакции выявляли с помощью системы вестерн-блоттинга ECL Plus (Amersham Pharmacia).

Индукция апоптоза и визуализация живых клеток.

Клетки

NIH 3T3, трансфицированные pFRET-Bid, выращивали в 35-мм чашках со стеклянным дном в течение 24 часов. Затем клетки обрабатывали фактором некроза опухоли-α (0.5 нг / мл; Sigma) и циклогексимид (1 мкг / мл; Sigma) (23) и исследовали через 3 часа с помощью флуоресцентной микроскопии. Митохондрии идентифицировали с помощью 100 нМ MitoTracker (Molecular Probes).

линий клеток SK-N-SH, которые были стабильно трансфицированы pFRET-линкером или pFRET-Bid, обрабатывали антителами против Fas (1 мкг / мл; Medical and Biological Laboratories, Нагоя, Япония) и циклогексимидом (1 мкг / мл). мл; Sigma; ссылка 24), Tm (2 мкг / мл; Sigma; ссылки 25 и 26) или Aβ (25–35 аминокислот; 40 мкМ; Biochem; ссылки.27–29). Клетки, обработанные антителом против Fas, исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии через 6 часов, а другие обработанные клетки исследовали после 12-часовой инкубации.

Результаты и обсуждение

Разработка идентифицированной заявки с помощью системы обнаружения генов для обеспечения сенсорных функций.

Чтобы непосредственно наблюдать активацию Bid, который ранее был идентифицирован как один из проапоптотических генов, с помощью наших рандомизированных гибридно-рибозимных библиотек (20–22), мы соединили YFP и CFP с N- и C-концом Bid, соответственно, через спейсер, содержащий по три остатка глицина в каждом случае (рис.1). С YFP и CFP максимальное расстояние, на котором может происходить резонансная передача энергии, ограничено 100 Å, и, кроме того, эффективность передачи энергии чрезвычайно чувствительна к расстоянию между донором (CFP) и акцептором (YFP). Чтобы подвести донора на приемлемое расстояние от акцептора, мы удалили аминокислоты с обоих концов Bid (рис. 1 A ) в соответствии с информацией из кристаллической структуры Bid (30, 31), надеясь, что полученный химерный белок будет функциональным in vivo .Полученный в результате гибридный белок YFP-Bid-CFP обеспечивает прямую передачу резонансной энергии от CFP к YFP (фиг. 1 D ). Химерный белок сохранил последовательность, расщепляемую каспазой 8 и сайтом миристоилирования (9). Мы ожидали, что когда химерный Bid расщепляется каспазой 8, FRET больше не возникает.

Рис 1.

( A ) Схематическое изображение доменной структуры CFP-Bid-YFP. YFP и CFP были связаны с Bid (остатки 16–194) гибкими спейсерами, которые состояли из трех остатков глицина каждый, для образования CFP-Bid-YFP.Стрелка между остатками 61 и 62 указывает сайт расщепления каспазой 8. ( B ) В нашей системе FRET возбуждение CFP на 433 нм должно приводить к эмиссии на 473 нм, если YFP не находится в непосредственной близости. В YFP-Bid-CFP энергия должна передаваться от возбужденного CFP к YFP с результирующим излучением на длине волны 525 нм. Когда слитый белок расщепляется каспазой 8, энергия больше не может передаваться от возбужденного CFP к YFP. ( C ) Флуоресцентные изображения клеток COS7, которые экспрессировали указанные слитые белки (ось y ).Изображения были получены с использованием фильтров FRET, CFP и YFP (ось x ). (Столбик = 20 мкм.) ( D ) Спектры флуоресценции экстрактов клеток, которые экспрессировали различные слитые белки. Количество общего белка для каждого образца доводили до 1,4 мг / мл. Возбуждали экстракты клеток, экспрессирующих YFP-Bid (розовая линия), Bid-CFP (черная линия), YFP-Bid-CFP (зеленая линия), YFP-linker-CFP (желтая линия) и родительские клетки (красная линия). при 433 нм и спектры испускания записывали и нормализовали при 450 нм.

Мы попытались визуализировать изменения FRET непосредственно с помощью стандартной флуоресцентной микроскопии. Когда клетки COS7, экспрессирующие YFP-Bid, возбуждались синим светом (460–490 нм) и эмиссия отслеживалась в зеленом диапазоне (510–550 нм), сигналы легко обнаруживались (рис. 1 C Top Center ). Эти клетки не испускали флуоресценции при возбуждении на длине волны 400–440 нм (Рис. 1 C Верхний левый и Правый ). Когда клетки COS7, экспрессирующие Bid-CFP, возбуждались на длине волны 400–440 нм, испускаемая флуоресценция могла наблюдаться в синем диапазоне (рис.1 C Слева посередине ). В этом случае не наблюдалось значительного FRET (рис. 1, , C, средний, правый, ), и 460–490 нм синего света не могли возбуждать белок Bid-CFP (рис. 1, , C, средний центр, ). Напротив, когда клетки, которые экспрессировали YFP-Bid-CFP, возбуждали при 460–490 нм или при 400–440 нм, мы детектировали флуоресценцию из-за YFP, CFP и FRET (Рис. 1 C Bottom ). Следует отметить, что во всех экспериментах по визуализации, включая те, что показаны на рис. 4 и 5, как для реальных, так и для контрольных изображений FRET использовались одинаковые экспозиции.

Фиг. 1 D показывает спектр флуоресценции экстрактов из каждой клеточной линии при возбуждении во флуорометре при 433 нм. Лизаты клеток, которые экспрессировали YFP-Bid-CFP и YFP-linker-CFP (описанные в Materials and Methods ), давали пик при 525 нм, который соответствовал FRET. Напротив, лизаты клеток, которые экспрессировали YFP-Bid, не давали подобного пика при 525 нм, а в спектрах испускания Bid-CFP наблюдали пик при 473 нм. Лизаты родительских клеток не показали пика при возбуждении на длине волны 433 нм.Эти наблюдения указывают на эффективную передачу энергии между донором (CFP) и акцептором (YFP) внутри слитого белка.

Подтверждение использования Engineered YFP-Bid-CFP в качестве субстрата для Caspase 8

in vitro .

Мы исследовали, может ли химерный белок YFP-Bid-CFP по-прежнему служить субстратом для каспазы 8 in vitro , а также быть полностью функциональным in vivo , потому что, чтобы разрешить FRET, мы усечили Bid на обоих концах.Мы записали спектры излучения экстракта клеток COS7, экспрессирующих YFP-Bid-CFP, до и после инкубации аликвот клеточного экстракта с возрастающими количествами каспазы 8 в течение 1–22 ч (рис. 2). Эффективность FRET явно зависела от количества каспазы 8 (фиг. 2 A ) и продолжительности инкубации (фиг. 2 C ). Флуоресценция из-за FRET (пик при 525 нм) неуклонно снижалась с увеличением концентрации каспазы 8 и достигла минимума при 1000 единиц (рис.2 A , голубая линия).

Рис 2.

( A ) Результаты спектрофлуориметрического анализа расщепления YFP-Bid-CFP в клеточных экстрактах каспазой 8. Экстракты инкубировали с возрастающими количествами каспазы 8 (Cas-8) в течение 22 часов при 25 ° C, а затем Спектры регистрировали после возбуждения при 433 нм. ( B ) Отношение флуоресценции YFP (525 нм) к флуоресценции CFP (473 нм) рассчитывали для каждой концентрации каспазы 8 в реакционной смеси. Относительное соотношение FRET определяли как отношение значений флуоресценции YFP / флуоресценции CFP, измеренных до и после инкубации с каспазой 8.( C ) Зависимое от времени расщепление YFP-Bid-CFP, как продемонстрировано спектрофлуориметрическим анализом.

Чтобы определить чувствительность гибридного белка к каспазе 8, мы изменили график данных, показанных на рис.2 A , как показано на рис.2 B , в котором относительное отношение флуоресценции YFP к флуоресценции CFP ( измеренные при 525 и 473 нм соответственно) нанесены на график зависимости от концентрации каспазы 8 в логарифметической шкале. Отношение (YFP / CFP) нормализовали по отношению к соотношению нерасщепленного слитого белка.Мы также подтвердили, что слитый белок расщеплялся каспазой 8 вестерн-блоттингом (рис. 3). После 13-часовой инкубации уровень YFP-Bid-CFP в контрольной дорожке (загруженной клеточным лизатом без добавления каспазы 8; дорожка 1) не изменился. Напротив, когда клеточный лизат инкубировали с 1000 единицами каспазы 8 (дорожка 2), YFP-Bid-CFP расщеплялся на два фрагмента с ожидаемой подвижностью. Эти результаты показали, что слитый белок распознается как субстрат и расщепляется каспазой 8 in vitro и что FRET очень чувствителен к активности каспазы 8.Таким образом, YFP-Bid-CFP является хорошим индикатором расщепления Bid, предположительно из-за активации каспазы 8 in vivo . Поэтому в этом отчете мы утверждаем, что индикатор является показателем активации каспазы.

Рис 3.

Вестерн-блоттинг-анализ, показывающий расщепление YFP-Bid-CFP каспазой 8. Дорожка 1, контроль (без каспазы 8) и полоса 2, экстракт клеток COS 7, инкубированных с 1000 единиц каспазы 8 в течение 22 часов при 25 ° C. . Экстракты разделяли с помощью SDS / PAGE на 10% полиакриламидном геле и подвергали вестерн-блоттингу с Ab анти-GFP.Верхняя стрелка указывает YFP-Bid-CFP. Средняя стрелка указывает на C-концевой слитый с Bid-CFP белок, а нижняя стрелка указывает на YFP-N-концевой слитый с Bid белок.

Мониторинг активности каспазы 8 с помощью YFP-Bid-CFP в отдельной клетке.

Затем мы проверили, позволит ли слитый белок контролировать активность каспазы 8 в отдельных клетках. Мы трансфицировали клетки NIH 3T3 плазмидой, кодирующей YFP-Bid-CFP, и индуцировали апоптоз, подвергая клетки воздействию фактора некроза опухоли-α и циклогексимида.Эти агенты нарушают потенциал митохондриальной мембраны в клетках NIH 3T3 (23). Как показано на фиг. 4, YFP-Bid-CFP давал диффузные флуоресцентные изображения при возбуждении CFP и YFP (фиг. 4 B и C ) в необработанных клетках. Напротив, при индуцировании гибели клеток (фиг.4 D - G ) флуоресцирует только CFP (фиг.4 E и F ), и флуоресценция локализуется в митохондриях (фиг.4 G ). ). Эти результаты показали, что, несмотря на модификации на обоих концах, YFP-Bid-CFP был полностью функциональным in vivo и действовал как датчик активированной каспазы 8.

Рис 4.

Субклеточная локализация YFP-Bid-CFP. Клетки NIH 3T3 трансфицировали pFRET-Bid и инкубировали в течение 52 часов. Клетки на D - G подвергали воздействию фактора некроза опухоли-α плюс циклогексимид в течение 3 часов. Контроли не подвергались воздействию этих агентов ( A - C ). После инкубации клетки наблюдали с помощью флуоресцентной микроскопии. Фазово-контрастные изображения ( A и D ), изображения флуоресценции CFP ( B и E ) и изображения флуоресценции YFP ( C и F ).(Полоса = 20 мкм в A - F .) Субклеточную локализацию усеченного Bid (голубая флуоресценция) и митохондрий (оранжевая флуоресценция) оценивали с помощью флуоресцентной микроскопии ( G ). (Бар = 10 мкм.)

Роль Aβ в болезни Альцгеймера.

Используя слитый белок с донорной и акцепторной составляющими, мы исследовали другие системы гибели клеток, уделяя особое внимание этиологии болезни Альцгеймера, нейродегенеративного расстройства, характеризующегося невритными бляшками и нейрофибриллярными клубками в различных областях мозга (32).Aβ, пептид, состоящий из 39–43 аминокислотных остатков, является основным компонентом сенильных бляшек. Это широко изученный токсический фрагмент интегрального мембранного белка, известного как белок-предшественник амилоида (32). Aβ вызывает гибель первично культивируемых нейронов посредством активации c-Jun и секреции лиганда Fas, при этом апоптотический каскад протекает JNK-зависимым образом (27). В частности, считается, что секретируемый лиганд Fas активирует каспазу 8 и вызывает каскад событий, которые приводят к гибели клеток.Кроме того, при болезни Альцгеймера, по-видимому, существует сильная взаимосвязь между стрессом на уровне эндоплазматического ретикулума (ER) и гибелью нейронов (25, 26, 33). Недавно сообщалось, что каспаза 12 локализована в ER и активируется стрессом ER, и что нейроны коры с дефицитом каспазы 12 дефектны в апоптозе, индуцированном Aβ (25). Следовательно, каспаза 12, по-видимому, опосредует ER-специфический путь апоптоза и может способствовать нейротоксичности Aβ.

Обнаружение в реальном времени активации предложения и его последующей транслокации в митохондрии.

Чтобы изучить апоптотическую передачу сигналов в отдельных нервных клетках с помощью флуоресцентной микроскопии, мы исследовали эффекты трех индукторов апоптоза: Aβ, Tm, который индуцирует стресс ER (25, 26), и антитела против Fas, которое работает как лиганд Fas. на клетках нейробластомы человека SK-N-SH. Мы выделили стабильные клоны, которые экспрессировали белки YFP-linker-CFP или YFP-Bid-CFP (фиг. 5 A ). Затем клетки обрабатывали индукторами апоптоза, упомянутыми выше. Как показано на рис.5 B , мы наблюдали транслокацию Bid в митохондрии только в клетках, обработанных антителами против Fas (стрелки). Клетки, обработанные Aβ, проявляли стандартные признаки апоптоза, но локализация флуоресцентных белков в большинстве клеток (> 94%) воспроизводимо была такой же, как и в необработанных клетках (см. Таблицу 1 и аналогичные изображения на Фиг.5 C для большего количества клеток которые были взяты независимо от показанных на рис. 5 ( B ). В этих клетках редко обнаруживаются флуоресцентные белки, локализованные в митохондриях.Точно так же мы не смогли обнаружить локализацию каких-либо слитых белков в митохондриях в обработанных туникамицином клетках (таблица 1, рис. 5 B и C Bottom ).

Рис 5.

Флуоресцентные изображения YFP-Bid-CFP и YFP-linker-CFP в клетках, обработанных различными индукторами апоптоза. ( A ) Клетки SK-N-SH стабильно трансфицировали pFRET-Bid или pFRET-linker, и изображения записывали в условиях фазового контраста (фаза) и с фильтрами FRET, CFP и YFP.Линкер относится к YFP-linker-CFP, а Bid относится к YFP-Bid-CFP. YFP-линкер-CFP и YFP-Bid-CFP равномерно диффундируют по клеткам. (Полоса = 20 мкм.) ( B ) Клетки индуцировали к апоптозу с помощью антител против Fas (Fas), Tm или Aβ. После обработки изображения были записаны, как указано выше. Клетки, индуцированные апоптозом, также наблюдали при более высоком ( B ) и более низком ( C ) увеличении. (Бар = 10 мкм.)

Таблица 1.

Процент апоптотических клеток, представивших митохондриальную локализацию расщепленного Bid

Когда клетки SK-N-SH обрабатывали антителом против Fas, известным индуктором каспазо-8-зависимого апоптоза, слитый белок Bid расщеплялся, и флуоресценция испускалась в основном из CFP (указано стрелками на фиг.5 B и C Top и Таблица 1) с одновременным исчезновением FRET. Более того, C-концевой участок слитого белка был перемещен в митохондрии, как мы и ожидали. Наши результаты показывают, что клетки SK-N-SH чувствительны к антителам против Fas, и что каспаза 8 может быть активирована в этих клетках через вызывающий смерть сигнальный комплекс. Отрицательные результаты, полученные с туникамицином, подтверждают более раннее сообщение о том, что активация каспазы 8 не является необходимой для индукции апоптоза этим препаратом (34).

Доказательства значительного участия Aβ в активации каспазы 8: противоречия могут возникать в результате измерений в режиме реального времени в отдельной клетке по сравнению с измерениями в больших клетках.

Существует сообщение о том, что Aβ является нейротоксическим агентом, который индуцирует секрецию лиганда Fas в первично культивируемых клетках (27). В нашей системе, хотя расщепление YFP-Bid-CFP каспазой 8 могло быть четко обнаружено при обработке клеток лигандами Fas, соответствующая активация Aβ была едва обнаружена в отдельных клетках при измерениях в реальном времени с помощью флуоресцентной микроскопии.Спорные данные относительно участия Aβ в активации каспазы 8 могут быть согласованы с помощью настоящего анализа, если мы предположим, что Aβ не играет значительной роли в расщеплении прокаспазы 8. Важно отметить, что мы наблюдали апоптоз. событий в отдельных индивидуальных клетках, тогда как обнаружение активации каспазы 8 из небольшого числа апоптотических клеток посредством индуцирующего смерть сигнального комплекса, зависимого от пути, могло быть усилено, если в прошлом использовались основные клетки.Следовательно, вероятно, что в клетках SK-N-SH какой-то другой основной путь (например, стресс ER) играет решающую роль в Aβ-зависимой гибели клеток.

Заключение

Таким образом, ( i ) мы разработали систему FRET, используя YFP-Bid-CFP, и ( ii ) результаты, полученные с этой системой in vitro и in vivo , согласуются с моделью, в которой активация митохондриального пути апоптоза приводит к апоптозу в клетках NIH 3T3.Наконец, ( iii ) мы продемонстрировали на отдельных клетках, что антитело против Fas может активировать каспазу 8, тогда как Tm и Aβ не смогли (в значительной степени) этого сделать. Текущие измерения в режиме реального времени в пределах одной клетки, в отличие от предыдущих анализов, основанных на массивных клетках, позволяют нам предположить, что Aβ не играет значительной роли в расщеплении прокаспазы 8. Следовательно, функционально активный YFP- Слитый белок Bid-CFP должен быть очень полезным инструментом для дальнейшего анализа различных путей апоптоза в различных линиях культивируемых клеток.

Благодарности

Мы благодарим профессора Юкико Гото из Токийского университета и доктора Лауру Нельсон из Национального института передовых промышленных наук и технологий за полезные комментарии к рукописи. Это исследование было поддержано грантами Министерства экономики, торговли и промышленности (METI) Японии, грантом Организации по развитию новой энергетики и промышленных технологий (NEDO) Японии, грантом Фонда содействия фундаментальным исследованиям для инновационных биологических наук. (PROBRAIN) Японии и грант на научные исследования от Министерства образования, культуры, спорта, науки и культуры (MEXT) Японии.

Сноски

  • ↵ ‡ R.O. и А. внес равный вклад в эту работу.

  • ↵¶ Кому следует направлять корреспонденцию. Электронная почта: taira {at} chembio.t.u-tokyo.ac.jp.

  • Этот документ был отправлен напрямую (Трек II) в офис PNAS.

Сокращения

  • Домен BH, домен гомологии Bcl-2

  • YFP, желтый флуоресцентный белок

  • CFP, голубой флуоресцентный белок

  • Aβ, амилоид-β пептид

  • ТМ, туникамицин

  • FRET, резонансный перенос энергии флуоресценции

  • ER, эндоплазматический ретикулум

  • Авторские права © 2002, Национальная академия наук

Визуализация живых клеток межклеточной изменчивости репортерной активности каспазы-8 FRET и моделирование траектории клеточной судьбы - Набор данных - База данных HMS LINCS

Анализ Протокол: 1.96-луночные планшеты Costar покрывали 50 мкл / лунку коллагена I из хвоста крысы при 40 мкг / мл в течение 2 часов при 37 ° C, промывали 3 раза 200 мкл PBS и давали высохнуть в вытяжном шкафу для культивирования тканей.
2. Клетки HeLa, стабильно экспрессирующие основанный на FRET репортер инициаторной каспазы (ICRP), или производные клеточные линии, экспрессирующие дополнительные трансгены, где указано, высевали (2500 клеток в 100 мкл на лунку среды DMEM с 10% FBS). Использовали только центральные лунки каждого планшета, и 200 мкл среды добавляли во все окружающие лунки.Планшеты оставляли на 20 минут в вытяжном шкафу для культивирования тканей перед перемещением в инкубатор на 24 часа.
3. Клеточные среды обновляли средой без фенолового красного при подготовке к визуализации.
4. Клетки предварительно визуализировали в течение 30 минут перед добавлением лекарственного средства (в среде без фенолового красного).
5. Пертурбагены были добавлены в среду, как указано в наборе данных.
6. Клетки визуализировали каждые 5 минут в течение 24 часов с использованием роботизированного микроскопа PerkinElmer Operetta с камерой для живых клеток (при 37 ° C с 5% CO 2 ) с использованием 10-кратного объектива (NA = 0.4) и конфигурации фильтров для CFP (возбуждение: 425-450 нм / излучение: 460-500 нм) и CFP-YFP FRET (возбуждение: 425-450 нм / излучение: 520-560 нм). Для клеток, стабильно экспрессирующих интересующие белки, помеченные mCherry, и для клеток, стабильно экспрессирующих репортер митохондриального межмембранного пространства (IMS-RP, репортер MOMP), который использовался только для валидации методов (см. Пункт 11 ниже), одна дополнительная конфигурация фильтра ( Возбуждение: 550-600 нм / Эмиссия: 610-660 нм) использовали на протяжении всего эксперимента, когда присутствовал репортер MOMP, или в начале эксперимента, когда присутствовал интересующий белок, помеченный mCherry.
7. Сегментация изображения выполнялась следующим образом. Для вычитания фона изображения I raw были разбиты на 64 блока размером 170 на 128 пикселей. Отфильтрованное по Гауссу распределение интенсивности в каждом тайле использовалось в качестве меры локального фона для реконструкции фонового изображения с полным разрешением I bg с помощью билинейной интерполяции по режимам тайла. Учитывая нулевую среднюю интенсивность фона в I CFP = I CFP, raw - I CFP, bg , нижняя половина интенсивности фона была перенесена на верхнюю половину в распределении абсолютных интенсивностей | I CFP | , такой, что 20-й процентиль p 20 из | I | может использоваться как надежная оценка изменчивости фона.При пороговом значении t = 3 p 20 ложноположительные элементы маски в M t = (I CFP > t) были достаточно редкими, чтобы их можно было надежно подавить морфологической эрозией. Перед эрозией контактирующие клетки были разделены водоразделом I CFP после применения широкого фильтра Гаусса. Фильтр Гаусса был параметризован таким образом, что чрезмерная сегментация была редкостью. Объединенная окончательная маска M для показаний одной ячейки была получена из пороговой маски M t и водоразделов W путем размывания M t ¬W.
8. Показания интенсивности в форме отношения FRET I CFP / I FRET были извлечены из каждой ячейки в каждом сегментированном кадре. Чтобы уменьшить влияние хроматической аберрации и межканального дрожания, изображение FRET с вычетом фона I FRET было выровнено с изображением CFP с вычетом фона I CFP с субпиксельным разрешением посредством билинейной интерполяции. Требуемый сдвиг определялся для каждого кадра путем квадратичной пиковой интерполяции коэффициентов взаимной корреляции между I FRET и I CFP .Маска M, определенная из I CFP , применялась на ячейку как к I CFP , так и к выровненному I FRET , так что отношение FRET можно было вычислить как медианное пиксельное отношение интенсивностей в области маски . Из-за эрозии M t ¬W тонкие выступы ячеек с большей относительной ошибкой в ​​I FRET и I CFP были исключены из медианы пиксельных соотношений. В качестве меры уровня экспрессии представляющих интерес белков, меченных mCherry (FLIP-S / FLIP-L, Bcl-2 / Bcl-XL), 80 процентиль в области маски выровненного по фону выровненного изображения mCherry был использован.
9. Отслеживание клеток выполняли следующим образом. В дополнение к показаниям интенсивности, для каждой ячейки i в каждом кадре f определяли центроид маски (x, y) i, f . Чтобы преодолеть межкадровое дрожание, были определены межкадровые сдвиги Δx и Δy путем кросс-корреляционного анализа последовательных изображений CFP, которые были подвергнуты субдискретизации в 4 раза. Эти сдвиги Δx и Δy применялись к центроидам (x, y) i, f для установления треков между кадрами f и f + 1. Ячейки i и j в двух последовательных кадрах f и f + 1 были соединены, если (x + Δx, y + Δy) i, f - ближайшая позиция к (x, y) j, f + 1 среди всех ( x + Δx, y + Δy) f и (x, y) j, f + 1 - ближайшая позиция к (x + Δx, y + Δy) i, f среди всех (x, y) ф + 1 .
10. Оценка времени гибели клеток была основана на изменениях в морфологии клеток или, когда репортер IMS-RP MOMP был коэкспрессирован, на его внутриклеточном распределении. Морфологическими переменными, показывающими округление ячеек, которые были извлечены для каждой ячейки в каждом кадре, были «площадь» маски с одной ячейкой и «краевой показатель», количественно определяющий контраст на границе ячейки: 4 линейных сканирования I CFP с поворотом на 45 ° вокруг центра тяжести маски были отфильтрованы по Гауссу, и была определена медиана соответствующих 8 максимальных наклонов интенсивности в 3-пиксельной близости от границы маски.Расширенные ячейки дали неглубокие максимальные наклоны для этого считывания, тогда как округление ячеек привело к резкому увеличению наклона интенсивности на границе маски.
11. Чтобы подтвердить использование ICRP для классификации судеб, IMS-RP коэкспрессировали с ICRP-зондом FRET инициатора каспазы. Для обнаружения MOMP положение ядра оценивалось путем нахождения внутри одноклеточной маски положения пика интенсивности флуоресценции CFP после фильтрации I CFP с широким гауссовым углом. В этом подходе использовалось наблюдение, что ICRP не исключена из ядра и что эпифлуоресценция интегрируется в самом широком z-диапазоне в этом месте.При интактных наружных мембранах митохондрий IMS-RP исключен из ядерной области. После MOMP IMS-RP повсеместно распространяется внутри клетки, включая ядерную область. Резкие вариации всех этих трех переменных свидетельствовали либо о клеточном делении, либо о апоптозе. Если клетки восстанавливали свои исходные значения в показателях границ и площади менее чем за 4 часа, событие классифицировалось как разделение; в противном случае это было классифицировано как апоптоз. Потеря отслеживания в течение этих 4 часов или неполное выздоровление рассматривались как подорванная судьба.Все клетки в полях зрения были проанализированы, и только некоторые были отброшены, если отслеживание было потеряно до конца эксперимента или до гибели клетки, или когда событие не было должным образом классифицировано как деление клетки или смерть клетки (см. Выше). . При таком строгом подходе корректировка пороговых значений для классификации судьбы не повлияла на результаты качественно.
12. Подход слежения был подтвержден двумя тестами. Во-первых, в условиях, когда IMS-RP коэкспрессировалась, соответствие между морфологической оценкой и вызовами, основанными исключительно на IMS-RP, составляло 80 ± 2%, а время MOMP имело корреляцию Пирсона r = 98.8 ± 0,4 в 4 условиях с разными дозами TRAIL. Во-вторых, среди клеток, которые были классифицированы как умирающие, мы обнаружили точку перегиба в соотношении FRET, которая указывает на внезапную активацию эффекторных каспаз. Чтобы точно определить это событие, мы отслеживали расхождение между конечной производной отношения FRET и производной отношения FRET после сглаживания более 7 кадров. Мы определили время MOMP как 4 кадра до того, как это расхождение превысило стандартное отклонение в два раза.
13.Подгонку траектории проводили следующим образом: среднюю траекторию отношения FRET всех необработанных клеток вычитали из траектории отношения FRET каждой обработанной клетки. Затем шум в траекториях был отфильтрован с использованием функции MATLAB Filtfilt с размером окна, соответствующим 55 мин (11 кадров). Для каждой траектории из траектории вычиталось минимальное значение отношения FRET. Производная отношения FRET была вычислена с использованием конечных разностей и траекторий, отфильтрованных с использованием функции MATLAB filterfilt с размером окна, соответствующим 55 мин (11 кадров).
Подгоняемая модель основана на уравнении:

Время максимального значения производной отношения FRET (τ) использовалось в качестве конечной точки для подгонки модели к соотношению FRET с использованием MATLAB fit . Параметр t 0 был ограничен диапазоном [–30 мин, τ - 30 мин] и k до [0, 0,01] . В случаях, когда аппроксимация траектории была плохой (r² (FR (t) = cste) с p = 0,05 в качестве отсечки. В случаях, когда аппроксимация была ненамного лучше, чем у плоской модели, k было установите значение 10⁻⁷ (минимальное значение, наблюдаемое для посадки).Клетки, которые умерли рано (иногда менее 70 минут) и чья траектория не могла соответствовать приведенному выше уравнению, были исключены из последующего анализа, исходя из предположения, что они представляют другие формы гибели или потери клеток.
14. Значение θ было определено путем минимизации функции ошибок:

, где Θ - функция Хевисайда:
15. В двумерном ландшафте τ и k, вычисленных из траекторий отдельных ячеек, θ соответствует линии, определяемой как τ = θ / 2 k + t 0 .Линия разделяет клетки по судьбе, при этом выжившие клетки падают слева от границы судеб (низкий k и / или короткий τ), а мертвые клетки - справа от границы (более высокий k и / или более длинный τ). Точность границы оценивалась для всех экспериментов на основе среднего значения θ T = 2,63 × 10⁻ & sup3, обученного на данных с дозами TRAIL, равными и выше 10 нг / мл.

Объяснение раздутых ладов: все, что вам нужно знать

Если вы когда-нибудь видели гитару с веерными ладами и задавались вопросом, в чем их смысл, это руководство для вас.

Существует много дезинформации о преимуществах веерных ладов, поэтому я объясню, как они работают, каковы реальные преимущества и подходят ли они вам.

Раздутые лады или многомасштабные гитары размещают лады под рассчитанным углом, чтобы каждая струна имела разную длину шкалы. Раздутые лады придают гитарам большую длину гаммы на нижних струнах и меньшую длину гаммы на более высоких струнах.

Я объясню, что это означает ниже, но если вы хотите узнать больше о длине гитарной гаммы и почему это важно, прочтите мое полное руководство по длине гитарной гаммы здесь.

Общие сведения о гитарах с веерными ладами

Прежде чем мы рассмотрим, как работают веерные лады, преимущества веерных ладов и многое другое, давайте рассмотрим некоторые ключевые факты о веерных ладах, чтобы вы могли понять, что они означают.

Измерительные гитары с веером

Обычные гитары измеряются по их длине шкалы, как описано здесь. Например, Fender Stratocaster имеет длину шкалы 25,5 дюйма, а PRS - длину шкалы 25 дюймов.

Гитары с веерными ладами также измеряются по их длине шкалы, но нам даны два числа, потому что это гитары с разной шкалой.

При поиске гитарной гитары с веерными ладами вам дается длина шкалы для самой низкой и самой высокой струн.

Например, Ibanez RGIF8 - восьмиструнная гитара с веерными ладами, как показано ниже:

Длина шкалы на самой нижней струне составляет 27,2 дюйма, , а длина шкалы на самой высокой струне составляет 25,5 дюйма, .

Давайте сравним это со струной Strandberg Boden 8:

Длина шкалы на самой нижней струне Strandberg составляет 28 ″ , а длина шкалы на самой высокой струне - 26.5 ″ .

Хотя обе гитары 8-струнные и обе имеют веерные лады, вы заметите большую разницу в их ощущениях от игры. Я расскажу об этом позже в этом руководстве.

Нейтральное положение

Угол наклона веерных ладов также различается для разных гитар.

Взгляните на гриф Ibanez RGIF8 ниже и обратите внимание, что лады начинаются наклонно в одну сторону, а затем постепенно меняются, пока не станут наклонными в другую сторону:

Точка, в которой лады прямые, как у обычной гитары, называется нейтральной точкой .

На гитаре выше нейтральной точкой является 12-й лад.

Некоторые гитары с веерными ладами устанавливают нейтральный лад выше, а некоторые - ниже. На нижнем Strandberg нейтральная точка находится на 7-м ладу:

.

Сравните Ibanez и Strandberg, и вы заметите, что это изменение нейтральной точки сильно влияет на общее ощущение грифа.

Некоторые гитары с веерным ладом помещают нейтральную точку по всей длине грифа у порожка, как это:

Все лады наклонены в одном и том же направлении, и угол постепенно становится более экстремальным по мере продвижения вверх по грифу.Вышеупомянутая гитара будет полностью отличаться от других гитар с веерными ладами, показанных ранее.

Я объясню это подробно позже, когда мы рассмотрим возможность игры.

Как работают веерные лады

Чтобы понять, как работают веерные лады, давайте сравним их с обычной гитарой с прямыми ладами.

Проблема с обычными гитарными ладами

На приведенной ниже фотографии обычной гитары с обычными ладами вы можете видеть, что длина струны от бриджа до гайки (узнайте о частях гитары и их названиях здесь) одинакова для каждой струны.

Проблема одинаковой длины для каждой струны состоит в том, что каждая струна настраивается по-разному. Струна низкой ми значительно ниже по высоте, чем струна высокой ми.

Это проблема из-за вибрации струн. Низкие ноты звучат лучше, когда они вибрируют на длинной струне. Вот почему у бас-гитары шейки длиннее, чем у обычных.

На фотографии выше видно, что длина струны у бас-гитары намного больше, чем у электрогитары.Это потому, что низкие ноты лучше всего звучат при большей длине струны.

Поскольку существует большая разница в том, на что настроены гитарные струны, это создает серьезную проблему.

Обычная гитара решает эту проблему за счет увеличения толщины струны.

Более толстые струны предохраняют нижние струны от расшатывания. Но это работает только до определенного момента. Раздутые лады помогают преодолеть это ограничение.

Как работают веерные лады

Раздутые лады позволяют удлинить нижние струны, а верхние - короткими.

Это означает, что длина нижней струны ми может быть больше, чем длина высокой струны ми, что помогает ноте звучать более отчетливо.

В случае с веерной гитарой для лада нижние струны не нуждаются в более толстых струнах, чтобы сохранять плотное натяжение. Более длинная струна помогает сохранять натяжение струны там, где вам удобнее всего играть.

Если вы посмотрите на 7- или 8-струнную гитару, станет очевидно, почему веерные лады так полезны:

Самая нижняя струна на 8-струнной гитаре имеет очень низкую высоту тона.Если вы попытаетесь настроить низкую струну ми ми на F #, вы заметите, что струна становится слабой и гибкой.

Более длинная струна на гитаре с веерными ладами сохранит эту струну красивой и плотной без необходимости использования струны сверхтяжелого калибра.

Ключевой урок: веерных ладов работают, придавая каждой струне оптимальную длину, соответствующую высоте струны. Низкие ноты лучше всего подходят для длинных струн.

Раздутые лады имеют значение

Раздутые лады действительно имеют значение по сравнению с обычными гитарами, но есть много дезинформации о том, как они имеют значение.

Суть в том, что веерные лады действительно имеют значение на гитаре. Раздутые лады имеют значение для натяжения струн, играбельности и тона. Вопреки распространенному мнению, интонация от них не зависит.

Давайте подробно рассмотрим, как веерные лады имеют значение, чтобы вы могли решить, подходят ли они вам.

Натяжение струны

Первое, что я заметил, когда впервые взял в руки веерную ладовую гитару, - это натяжение струн.

Раздутые лады влияют на натяжение струн, которое играет большую роль в игре. Большое преимущество веерных ладов состоит в том, что они увеличивают натяжение нижних струн, не влияя на верхние струны.

Давайте посмотрим на примере, чтобы увидеть, насколько сильно веерные лады влияют на натяжение струн.

На обычной гитаре с длиной шкалы 25,5 дюймов натяжение на низкой струне E с 42 струнами будет 14,37 фунта.

На гитаре с веерными ладами и 26.При длине шкалы 5 дюймов натяжение нижней струны E с тем же калибром будет 15,52 фунта.

Если бы угол раскрытых ладов был более экстремальным и длина струны увеличилась до 27 дюймов, натяжение нижней струны ми было бы 16,11 фунта.

Как видите, небольшая разница, которую вносит веерный лад, может значительно изменить натяжение струны.

Это означает, что в итоге вы получите более тугие нижние струны без увеличения натяжения верхних струн.

Чем резче звучат веерные лады, тем выше натяжение нижних струн.

Тон

Раздутые лады имеют различный тон из-за дополнительной длины струны на нижних струнах.

Более низкие струны кажутся более тугими, что явно отражается на тембре гитары. Если вы настроитесь ниже, вы услышите более резкий и плотный звук при исполнении риффов.

Общие ощущения и играбельность

Лады с веером выглядят совсем иначе, чем обычные гитары, но вы можете быть удивлены, узнав, что они не так сильно отличаются.

Общее ощущение от гитары с веерными ладами зависит от того, насколько сильно веер (разница в длине шкалы между самой низкой и самой высокой струнами).

Чем сильнее веер, тем больше вы его замечаете, когда играете аккорды или переходите от струны к струне.

Представьте, что вы играете барре-аккорд на гитарах ниже, и подумайте о положении вашей руки:

Вы можете подумать, что экстремальный фанат сделает игру барре-аккордами неудобной, но многие гитары предпочитают то, как это ощущается.В зависимости от угла наклона веера вы можете обнаружить, что барре-аккорды более удобны для всего грифа.

Ключевым моментом для играбельности является нейтральная точка . Как объяснялось ранее, это точка, в которой лад прямой, как на обычной гитаре.

Гитара ниже устанавливает нейтральную точку по направлению к гайке:

Это означает, что все лады наклонены в одном направлении. По мере того, как вы поднимаетесь вверх по грифу, угол становится более экстремальным.

Вышеупомянутая гитара будет полностью отличаться от гитары ниже, у которой есть нейтральная точка на 12-м ладу:

С этой гитарой игра на грифе выше ощущения будет совершенно другой, чем игра на грифе ниже.

Главное, что нужно запомнить, это то, что способ установки веерной ладовой гитары (где установлена ​​нейтральная точка) играет большую роль в том, как гитара чувствует себя при игре.

Низкие настройки

Как объяснялось ранее, ноты с низким тоном лучше всего подходят для длинных струн.Вот почему 8- и 9-струнные гитары часто поставляются с веерными ладами в стандартной комплектации.

Но если вы настроитесь на 6-струнную гитару, вы обнаружите, что веерные лады имеют большое значение в играбельности.

Настройка на что-то вроде Drop-C или ниже на 6-струнной гитаре обычно требует довольно толстых струн для компенсации низких частот. Вы также получаете ужасно мутный тон, который звучит безжизненно.

Но гитара с веерными ладами позволит вам использовать более легкие струны, сохраняя натяжение струн даже на всех шести струнах.

Раздутые лады не только улучшают играбельность низких строев, но и серьезно улучшают звучание.

Интонация

Многие говорят, что гитары с веерным ладом дают лучшую интонацию. Это не совсем так, давайте рассмотрим это поближе.

Интонация - это то, насколько настроен каждый лад на струне. Если ваша интонация отсутствует, ваша открытая струна будет звучать нормально, но когда вы взорвете ноту, она исчезнет.

Чем длиннее гамма гитары, тем лучше интонация гитары.

Это означает, что гитара с длиной шкалы 27 дюймов будет иметь немного лучшую интонацию, чем гитара с длиной шкалы 25 дюймов.

Тот факт, что у гитар с веерным ладом большая длина лада на нижних струнах, является причиной того, что многие гитаристы считают, что интонация улучшается благодаря веерным ладам.

Хотя технически это правда, это всего лишь незначительное изменение и только на нижних струнах. У более высоких струн будет такая же интонация, как у обычной гитары с той же длиной звукоряда.

Если вам действительно нужна гитара с отличной интонацией, узнайте об True Temperament Frets здесь. В руководстве очень подробно рассказывается об интонации и о том, почему у всех нормальных гитар плохая интонация.

Трудно играть на веянных ладах

Хотя веерные лады выглядят неудобно, играть на них несложно. Многие гитаристы на самом деле предпочитают играть на гитарных гитарах с веерными ладами из-за того, что угол ладов естественным образом повторяет угол ваших пальцев на грифе.

Давайте посмотрим, как ощущаются веерные лады, когда вы играете разные вещи:

Низкие рифы

Играете ли вы на 6-, 7- или 8-струнной гитаре, веерные лады создают звук низких рифов и улучшают самочувствие.

Более высокое натяжение струны означает, что вы получаете плотный и напористый тон, который отлично подходит для игры быстрых или плотных риффов.

Как вариант, вы можете уменьшить толщину струны на более низких струнах, чтобы вам было удобнее.

В целом, низкие риффы имеют тенденцию ощущаться более комфортно на гитаре с веерным ладом.

Аккорды

Открытые аккорды могут ощущаться лучше или хуже на веерной ладовой гитаре в зависимости от того, где находится нейтральная точка.

Взгляните на гитары ниже и представьте, что вы играете разные открытые аккорды:

Должно быть очевидно, что каждый будет чувствовать себя совершенно по-другому, и некоторым будет удобнее, чем другим.

Аккорды

Barre, как правило, более комфортны на веерных ладах, но это опять же зависит от того, где находится нейтральная точка.

На некоторых гитарах с веерным ладом ваш первый палец имеет тенденцию идеально выстраиваться в линию, где бы вы ни играли барре-аккорд.

Бенды и вибрато

Благодаря меньшей длине звукоряда на более высоких струнах, бенды и вибрато, как правило, кажутся более комфортными на гитаре с веерными ладами по сравнению с обычной гитарой.

Это зависит от используемой длины звукоряда, но большим преимуществом веерных ладов является то, что нижние струны кажутся более тугими, в то время как более высокие струны более удобны при игре на бенд.

Играть бенды на обычной 8-струнной гитаре с длиной шкалы 27 дюймов невероятно неудобно из-за сильного натяжения всех струн. Но играть бенды на 8-струнной гитаре с веерными ладами смехотворно удобно на более высоких струнах из-за меньшей длины звукоряда.

Приглушение ладони

Насколько комфортно звучит приглушение звука ладони, зависит от того, где установлена ​​нейтральная точка.

Нейтральная точка изменит угол наклона моста, что влияет на комфорт приглушения звука ладонью.

Посмотрите на нижний бридж на веерно-ладовой гитаре и подумайте, как бы вы положили ладонь на струны:

В зависимости от положения рук, на некоторых гитарах с веерными ладами играть более комфортно, а на некоторых - хуже. Угол наклона моста зависит от положения нейтральной точки.

Раздутые лады Плюсы и минусы

Вот несколько плюсов и минусов, которые помогут вам решить, подходят ли вам веерные лады.

Профи с веером

  • Серьезно улучшает 7-, 8- и 9-струнные гитары
  • Повышенный комфорт и удобство игры для некоторых гитаристов
  • Лучшее натяжение струн для низких строев при сохранении комфорта на высоких струнах

Раздутые лады против

  • Каждая веерная гитара отличается из-за разных нейтральных точек
  • Вам нужно найти гитару с правильной длиной звукоряда и нейтральной точкой в ​​соответствии с вашими предпочтениями
  • Ограниченные преимущества для 6-струнных гитар
  • Меньше вариантов звукоснимателей и мостов

Раздутые лады того стоят

Раздутые лады того стоят, если вы играете в низких строчках или хотите гитару с расширенным диапазоном.Семиструнная или восьмиструнная гитара звучит значительно лучше с веерными ладами.

Если вы играете на шестиструнной гитаре в стандартной настройке, преимущества веерных ладов незначительны, и, возможно, они того не стоят.

Хотя обычные ладовые гитары несовершенны, ограничения на шестиструнной гитаре при стандартной настройке не очень заметны. Натяжение струн довольно равномерное.

Но если бы вы попробовали сыграть на 8-струнной гитаре с длиной шкалы 25,5 дюймов, это звучало бы как мусор и было бы ужасно играть.Раздутые лады значительно улучшили бы тон и играбельность гитары.

Чем больше вы отходите от стандартного строя, тем более веерные лады того стоят.

Раздутые лады на разных гитарах

Давайте посмотрим, как выглядят веерные лады, и поработаем с разными типами гитар, чтобы понять, подходит ли вам одна из них.

Прочтите это руководство, чтобы узнать о различных типах гитар, которые вы можете купить. В руководстве объясняются различия между разными типами гитар, какие стили музыки вы можете играть на каждом типе и подходят ли они для начинающих.Как вы увидите ниже, веерные лады становятся очень распространенными для разных типов гитар.

6-струнные гитары

Преимущества веерных ладов на шестиструнных гитарах ограничены. Если вы возьмете шестиструнную гитару с веерными ладами, вы можете любить / ненавидеть разницу, или вы можете даже не заметить ее.

Когда я играл на шестиструнной гитаре с веерными ладами, я заметил разницу, но не подумал, что это явное улучшение по сравнению с обычной гитарой.

Единственный раз, когда я чувствую, что веерные лады действительно имеют значение для 6-струнных гитар, это когда вы используете дроп-строй.

7-, 8- и 9-струнные гитары

Раздутые лады могут серьезно улучшить играбельность и тон гитары с расширенным диапазоном.

Когда я впервые сыграл на семиструнной партии с веерными ладами, я был поражен тем, насколько лучше она звучит и ощущается. Низкие струны были красивыми и тугими, в то время как изгибы были до смешного удобны на высоких струнах.

Когда я попробовал 8-струнную с веерными ладами, а затем напрямую сравнил ее с обычными 8-струнными, я не мог не посмеяться над тем, насколько лучше ощущаются веерные лады.

Если вы играете на гитарах с расширенным диапазоном, я настоятельно рекомендую вам попробовать веерную ладовую гитару, чтобы понять, о чем идет речь.

Бас

Раздутые лады на басу обладают теми же преимуществами, что и на гитарах.

Необходимо учитывать те же моменты, например, насколько сильно вентилятор и где находится нейтральная точка.

Если вы играете на 5-струнной бас-гитаре, вы, вероятно, заметите большую разницу в том, как веер меняет тон и ощущения от того, что вы играете.

Акустические гитары

В то время как веерные лады довольно часто встречаются на электрогитарах, они все еще редко встречаются на акустических гитарах.

Вероятно, это связано с тем, что акустические гитаристы с меньшей вероятностью увидят преимущества веерных ладов из-за своего другого стиля игры.

Например, акустические гитаристы вряд ли будут использовать дроп-строй для металлических риффов, поэтому они не получат тех преимуществ, которые предлагают веерные лады.

Хотя веерные акустические гитары существуют, они имеют очень ограниченную привлекательность.

Если вы ищете акустическую гитару с веером, приготовьтесь заплатить за нее серьезную цену за очень ограниченные преимущества.

Раздутые лады FAQ

Вот некоторые общие вопросы, не рассмотренные выше, о веерных ладах.

Что делает Zero Fret?

На некоторых гитарах с веерным ладом вы можете заметить лад рядом с гайкой, как показано ниже. Это называется нулевым ладом.

Нулевой лад - это лад, расположенный рядом с гайкой, чтобы удерживать струны в нужном положении.Вместо того, чтобы прижимать струны к гайке, они упираются в лад.

Нулевые лады могут улучшить интонацию и действие, поскольку струны находятся в самом нижнем положении.

Как и любую другую функцию на гитаре, некоторые гитаристы любят их, а некоторые не переносят.

Узнайте, почему так важно действие, как его измерить и отрегулировать на акустической или электрической гитаре в этом полном руководстве по игре на гитаре.

Истинный темперамент и веерные лады

Лады True Temperament полностью отличаются от ладов с веером и другими целями.

Цель ладов True Temperament - исправить интонационные проблемы, возникающие при использовании прямых ладов. Цель веерных ладов - изменить длину звукоряда на каждой струне.

Чтобы понять, что такое лады True Temperament и почему они так хорошо работают, прочтите мое руководство здесь.

Сопутствующие руководства и уроки:

Лобзик Eclipse Deep - глубина 11-3 / 8 дюйма

ПОИСК в нашей БЕСПЛАТНОЙ онлайн-библиотеке по деревообработке

Выбирать ... 3 млн Абатрон Регулируемый зажим Биты и инструменты для маршрутизаторов Amana Американский Дизайн Мебели Инструменты Anant Якорь Арбортех Арти Рашпиль Auriou Плохой инструмент для топора работает Bahco Инструменты Barr Beall Tool Behlen Benchcrafted Инструменты Bessey Лучшая связь Инструментальный завод из голубой ели Инструмент Blum Bob Swerer Productions Токарные инструменты Bodger Инструменты Bora Инструменты Bosch Bostik Компания Bowl Kit Мостовой Городской Инструментальный Завод Briwax Бык лягушка Картер Продукты Чарльз Брок Clesco Клифтон Инструменты Биты и блейды для маршрутизаторов CMT Инструмент Коллинза Компания Color Wheel Горелки для дерева Colwood Кормарк Интернэшнл Ремесленник Кожа Инструменты полумесяца Critter Spray Products Корона ручные инструменты Crown Plane Company Ручные инструменты CECK Edge Дэвид Бэррон Инструменты Дельта Машиностроение DeWalt Алмазная пила Дико Принадлежности для заточки DMT Dowl-It Дремель Дрель доктор Dubuque Clamp Works Э.C. Emmerich Tools Орел америка Earlex Инструменты Easy Wood EazyPower Инструменты Eclipse Инструмент Эльбо Маски Elipse Энвиротекс Алмазные продукты EZE-LAP Famowood FastCap Fein Tools Fenner Drives Электроинструменты Festool Инструменты Fisch Компания Флетчер-Терри Инструменты для резьбы Flexcut Foredom Лезвия для пил Forrest Биты и лезвия для маршрутизаторов Freud Фуллер Общая отделка Общее оборудование Инструменты Gladstone Glen-Drake Toolworks Хорошая рука Gränsfors Bruks GreenWood Гробет США Hamburg Industries Привет Инструменты для резьбы Hirsch Скакательные инструменты Скамьи Hofmann & Hammer Держи Хит Продукция Howard Продукты HTC Гидрокот Гидросорбирующие осушители воздуха Самолеты Ibex iGaging Incra Промышленные абразивы Insty-Bit Дизайн Ironwood Файлы для резьбы Ивасаки Иёрой Японские инструменты Джаспер Инструменты JDS Джевонс Джевитт JHL JoolTool Токарные инструменты Jordan Капуста Келлер ласточкин хвост Клеммсия Известные концепции Инструмент Kreg Кумагоро Кунц Инструментальный завод озера Эри Ламелло Ланкастер Приземляться Lap-Sharp Leecraft Ли Джигс Левин LHR Либерон Lie-Nielsen Toolworks Лигномат Потерянный арт-пресс Lufkin Lumberton Лутц Магкрафт Magswitch Махони Макита MegaPro Инструмент Mercer Дизайн Меса Виста Metabo Микро Забор Микро Джиг Миллер дюбель Чудо-точка Мирка Абразивы Моракнив Швеции MSA Мюллер Фордж Mylands Нарекс Инструменты Nebo Нельсон Пейнт Николсон Nobex Никто Нортон Nupla Старый коричневый клей Old Fashioned Milk Paint Co.Олсон Пила Односторонняя токарная обработка дерева Пегас Пелтор Производительные абразивы Пику Игривые планы ПМС Портамат Портер-Кейбл Пауэлл Мфг Powerstrop Promax Proxxon Purdy Путч Р.Ножи Мерфи Рабочие места Ramia Мощность записи Ричард Келл Инструменты Рикон Роберт Лэнг Роберт Ларсон Рустолеум Покрытие Saburr Tooth Friction Coating Мешок ИБП Зауэрс SawStop Шредер ScrapeRite Инструменты Shaper Шеффилд Бронза Магазин Фокс Шелковистый Sjobergs Деревянное правило Скоухегана Токарные инструменты Sorby Винты Spax Spyderco Стэнли Инструменты Старретт Sterling Toolworks Инструменты SuperMax Система Три Таджима Текнатул Томас Флинн и Ко.Инструменты для деревянного туфа Timberline TimberMate Клей для дерева Titebond TMI Тормек Тренд Тритон Vantage Industries Vaughan Инструменты Veritas Инструменты Венеры VPS W.W. Norton Publishing Wall Lenk Co. Watco Waterlox Уэйн Бартон Веллер Уайтхолл Биты маршрутизатора Whiteside Wixey Wolfcraft Деревянные детали Инструменты дятлов Ленточная пила WoodSlicer Работа Sharp ZetSaw Zinsser



Глубокая лобзиковая пила Eclipse - глубина 11-3 / 8 дюйма

Highland Item # 451903.

Подробное описание

Глубокая лобзиковая пила Eclipse - глубина 11-3 / 8 дюйма

Горловина 11-3 / 8-дюймовой пилы для глубокого разрезания обеспечивает отличный доступ для сложных резьбовых работ, в то время как ее балочная рама обеспечивает надежное натяжение.В пиле используются лобовые лезвия без штифтов длиной 5 дюймов. Идеально подходит для маркетри, лепки и других сложных завитков. Поставляется с лезвием 16 tpi.

Предупреждения о продукте

ВНИМАНИЕ ДЛЯ ЖИТЕЛЕЙ КАЛИФОРНИИ!

Этот продукт может подвергать вас воздействию химикатов, которые, как известно в штате Калифорния, вызывают рак и врожденные дефекты или другие нарушения репродуктивной системы. Пожалуйста, прочтите наше предупреждение Предложения 65.
Для получения дополнительной информации см. Www.P65Warnings.ca.gov.




FLIP через наш последний каталог деревообрабатывающих инструментов

Посмотреть телешоу Highland Woodworker



Введите имя для поиска в списке желаний

Обучение игре на грифе | Мир уроков игры на гитаре


Выучить гриф - это задача, которую этот урок поможет вам эффективно решить.Знаете ли вы, что гитара с 22 ладами содержит 138 нот? Это огромная задача, которая бросает вызов как начинающим, так и опытным гитаристам. Этот урок расскажет вам, почему некоторые люди учат его неправильно (неэффективно и скучно).

Почему вы должны учиться игре на грифе

Вы должны изучить гриф по одной простой причине. Вы хотите играть быстрее!

Обычно, когда люди говорят о скорости, они говорят о физических аспектах обучения игре на гитаре. Обычно я думаю о шредерах, прокладывающих путь к безумным потокам нот.Измельчение требует много практики, но это другой тип скорости.

Когда вы учитесь играть на грифе, вы играете быстрее, потому что можете мгновенно вспомнить ноту. Мгновенный вызов позволяет как можно быстрее найти и сыграть любую ноту. Это ментальная скорость , которая позволяет вам решать, находить и играть быстрее.

Почему создание грифа не работает

Большинство гитаристов утверждают, что знают гриф, потому что могут найти любую ноту. Многие песни имеют темп 120 ударов в минуту, что составляет 2 секунды на такт.

  • Вся нота = 2 секунды
  • Половинная нота = 1 секунда
  • Четвертная нота = 1/2 секунды
  • Восьмая нота = 1/4 секунды
  • Шестнадцатая нота = 1/8 секунды

Вам нужно вспоминать заметки за доли секунды! Вот почему умение найти любую заметку не работает. Без мгновенного вспоминания вы не сможете успевать!

Как научиться играть на грифе

Научиться играть на грифе несложно, но требует практики. Большинство гитаристов находят эту задачу скучной, потому что они выучивают ее неправильно.Вдобавок они пытаются использовать ярлыки, которые не работают! Лучший способ научиться играть на грифе - использовать несколько способов запоминания ноты. Это не только интереснее, но и эффективнее.

Ассоциации пользователей

Человеческий мозг запоминает с помощью ассоциаций. Когда вы играете ноту, вы думаете о ноте, которую хотите. Вы находите это на грифе. Вы слышите записку. Вы видите гриф. Все эти предметы можно связать друг с другом, чтобы сформировать многомерные упражнения.Позже я дам вам упражнения, которые объединят то, что вы видите, слышите и чувствуете, чтобы максимально повысить вашу эффективность.

Практика запоминания

Вы когда-нибудь готовились к экзамену и забыли то, что вы узнали? Когда вы попытаетесь выучить гриф, вы забудете об этом. Ваш мозг переводит вашу кратковременную память в долговременную, когда вы спите. Я рекомендую практиковаться на грифе по 10-20 минут в день, пока вы не осознаете это.

Избегайте этих методов

Вот список неэффективных или скучных способов обучения игре на грифе.Это мой список антирекомендаций.

  • Не пытайтесь визуально запомнить изображение нот на грифе. Это, наверное, самый скучный метод, и вы не связываете звук
  • Не пытайтесь сократить путь, изучая только лады 1–12. Лады 13+ расположены ближе друг к другу, поэтому ощущается по-другому, и они имеют более высокую высоту звука. Мгновенный отзыв требует отзыва умственных и физических!
  • Не ограничивайте себя 5 и 6 Многие гитаристы разучивают эти две струны и извлекают остальные ноты.Это просто недостаточно быстро.
  • Не выполняйте слишком много нот за одно занятие. Большинство людей могут запомнить около 7 пунктов за один присест без особых дополнительных усилий. Как ни странно, существует семь естественных названий нот (A, B, C, D, E, F, G). Я рекомендую сначала заняться ими.

Что нужно знать перед началом практики

В этом разделе я дам вам необходимую информацию.

Нумерация строк и стандартная настройка

Струны пронумерованы от самой тонкой струны (1-я струна) до самой толстой (6-я струна).Настройка дается от 6-й до 1-й струны: E-A-D-G-B-E. Эта настройка (E-A-D-G-B-E) называется стандартной настройкой.

Ноты названы с использованием первых семи букв алфавита, однако на гитаре воспроизводится более семи высот или нот. Названия нот или буквы повторяются. Например: название банкноты
после G - A:… E-F-G-A-B-C-D-E-F-G-A-B-C…

Нумерация ладов

Лады нумеруются от передней бабки к корпусу, начиная с 1.Иногда цифра 0 или буква O используется для обозначения открытой струны или струны, на которой не слышно ни одной ноты.

Фреттинг ноты выполняется нажатием на струну за ладом (со стороны грифа лада).

Движение грифа

Гитаристы могут перемещаться по грифу горизонтально вверх или вниз или вертикально поперек грифа. Это общие термины, используемые для обозначения того, как перемещать руки при игре на гитаре.

Расположение нот на грифе

В этом разделе показано, где можно сыграть каждую ноту на гитаре.Обозначения даны для полноты картины. У меня есть урок по чтению стандартных обозначений и табулатур, если вам нужна дополнительная информация.

Ноты для первой струны (High E String)

Ноты второй струны (струна B)

Ноты третьей струны (G String)


Ноты четвертой струны (D струна)

5-я струна (струна)

Шестая струна (E струна)

Обозначение всех нот

Следующие обозначения и табулатура показывают полный диапазон гитары в стандартной настройке.

Некоторые ноты можно воспроизводить только в одном месте, в то время как другие можно играть не более чем в 5 местах.

Восходящие нисходящие упражнения

Это простые упражнения, но вы хотите попробовать несколько вещей во время их выполнения.

  • Скрывайте табулатуру во время игры. Показывать только обозначения (чтобы не обмануть).
  • Не используйте один палец для всех заметок. Найдите как можно меньше сдвигов рук.
  • Вы заметите, что я использовал четвертные ноты для B-C и E-F.Это полутона друг от друга. Я использовал половинные ноты, когда интервал составляет целый шаг (2 полутона). Это должно усилить различные интервалы.
  • Произнесите ноты во время игры, чтобы связать имя с нотой.
  • Наблюдайте за своей беспокойной рукой, когда вы говорите, и играйте по нотам.
  • Слушайте заметки. Постарайтесь запомнить их звук вместе с чувством беспокойства в этой позе.
  • Попробуйте слушать с закрытыми глазами и не отрывая глаз от ладов.
  • Обратите внимание, как точки на грифе соответствуют каждой ноте.
  • Используйте метроном со скоростью 60 ударов в минуту (1 секунда на долю). Каждый раз увеличивайте скорость на 20 ударов в минуту. Посмотрите, как быстро вы сможете играть чисто. Если вы становитесь небрежным, действуйте медленнее, чтобы не сформировать вредных привычек.

Ноты шестой струны по возрастанию

Я рекомендую переместить руку из открытого / первого положения в 5-ю, 10-ю, 15-ю и 19-ю позиции. Не стесняйтесь пробовать другие смены рук, чтобы изменить это.

Ноты шестой струны по убыванию

Еще раз попробуйте разные положения ручного переключения передач.

Мажорные аккорды, укорененные в 6-й струне

Ноты пятой строки по возрастанию

Ноты пятой струны по убыванию

5-я струна мажорные аккорды по возрастанию

Сыграйте эти аккорды по возрастанию, а затем по убыванию.

Другие упражнения для подъема и спуска

Я оставлю их на ваше усмотрение, что само по себе является отличным умственным упражнением.

  • Вы заметите, что я использовал мажорные аккорды в форме ми и ля.Попробуйте сыграть последовательность диатонических аккордов в тональности C: CMaj, Dm, Em, FMaj, GMaj, Am, Bdim. Например, замените EMaj на Em. Хотя диатоническая гармония - это отдельная тема, я определяю ее для этих упражнений как аккорды, в которых используются ноты мажорной гаммы. В данном случае до мажор.
  • Измените аккорды на диатонические септаккорды в тональности C из форм E и A: CM7, Dm7, Em7, FM7, G7, Am7, Bm7b5.
  • Поскольку аккорды состоят из третей (мажорная и малая третьи интервалы), попробуйте сыграть третями (каждую другую ноту на струне), чтобы вы знали ноты аккорда вдоль струны.Это работает для всех диатонических аккордов в тональности. Для примера возьмем ми минор 7: E- (пропустить F) -G- (пропустить A) -B- (пропустить C) -D. Ноты Em7 - это E G B D. Если вы хотите Em, пропустите последнюю ноту. Обожаю это упражнение. Он учит сразу многим нюансам музыки.

Еще упражнения

Вот лишь несколько дополнительных упражнений, которые вы можете использовать.

  • Сыграйте ноту, затем сыграйте ее октаву на той же струне (на 12 ладов вверх). Повторите это для всех нот.
  • Сыграйте ноту, затем сыграйте ту же ноту на соседней строке.Пример. A на 5-й струне, открытая; А на 6-й струне, 5-м ладу.
  • Сыграйте ноту, затем сыграйте ее октаву на соседней струне. Пример E на 6-й струне, открытая; E на 5-й струне, 7-м ладу.
  • Сыграйте ноту, затем сыграйте ее октаву на расстоянии двух струн. Пример: ми на 6-й струне, открытая; E на 4-й струне, 2-м ладу. Обратите внимание, как эти октавы используются в известных вам аккордах.
  • Сыграйте аккорд и определите основные ноты в этом аккорде.

Есть еще много упражнений, поэтому я предлагаю книгу, чтобы все это организовать, чтобы вы могли сосредоточиться на быстром обучении игре на грифе! Он содержит 159 упражнений, чтобы ваши практические занятия были свежими.Он включает в себя теорию музыки, аккорды и многое другое, поэтому вы изучаете сразу несколько концепций. Я до сих пор использую эти упражнения, чтобы оставаться свежей. Они работают от новичков до профи. Подумайте о покупке моей книги The Secrets of Learning the Fretboard !

Последние мысли

Надеюсь, вам понравился этот урок по обучению игре на грифе. Требуется много практики, но оставаться мотивированным - проблема №1. Есть много интересных способов попрактиковаться в игре на гитаре. Разнообразные упражнения - это лучший способ сохранить свою практику свежей.Как только вы это сделаете, вы вырветесь из колеи и получите гораздо больше удовольствия от игры на гитаре!

Если этот урок вам помог, пожалуйста, поставьте лайк на моей новой странице на Facebook и подумайте о том, чтобы рассказать о том, как это помогло вам.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *