8-900-374-94-44
LADA (ВАЗ)
Выпускался с 1997 года по 2013 год — 1 поколение, Одна модификация, Двигатель бензиновый 1.6 л, Привод передний. КПП: механическая, Кузов — седан.
*Фото Lada Samara седан (ВАЗ-2115)
Первое поколение (рестайлинговая версия ВАЗ-21099) — годы выпуска: 1997 — 2013. *ВАЗ-21099 выпускался с 1990 года.
| МОДИФИКАЦИЯ | РАБОЧИЙ ОБЪЕМ ДВИГАТЕЛЯ, см3 | МАКС. МОЩНОСТЬ, л. с. |
МАКС. КРУТЯЩИЙ МОМЕНТ, Нм | МАРКА ТОПЛИВА |
|---|
| Lada Samara седан 1,6 л 8-кл Стандарт | 1596 | 81 | 132 | АИ 95 |
| МОДИФИКАЦИЯ | МАКС. СКОРОСТЬ, км/час | ВРЕМЯ РАЗГОНА до 100км/ч,сек | ТИП ПРИВОДА | КПП |
|---|
| Lada Samara седан 1,6 л 8-кл Стандарт | 160 | 13 | Передний | МКП |
| МОДИФИКАЦИЯ | РАСХОД, л/100км (город) | РАСХОД, л/100км (трасса) | РАСХОД, л/100км (средний) | ОБЪЕМ ТОПЛИВНОГО БАКА, л |
|---|
| Lada Samara седан 1,6 л 8-кл Стандарт | 10. 3 | 6 | 7.6 | 43 |
| МОДИФИКАЦИЯ | ДЛИНА, мм | ШИРИНА, мм | МИН. ОБЪЕМ БАГАЖНИКА, л | МАКС. ОБЪЕМ БАГАЖНИКА, л |
|---|
| Lada Samara седан 1,6 л 8-кл Стандарт | 4330 | 1650 | 445 | 733 |
| МОДИФИКАЦИЯ | СНАРЯЖЕННАЯ МАССА, кг | ПОЛНАЯ МАССА, кг | ЦЕНА, руб |
|---|
| Lada Samara седан 1,6 л 8-кл Стандарт | 1075 | 1425 | 305000 |
*Цены 2013 года.
Цена модификации дана для базовой комплектации без дополнительных опций.
ВАЗ-2115 первая модель из линейки под условным названием «Самара-2». ВАЗ-2115 представляет собой рестайлинг модели ВАЗ-21099. От ВАЗ-21099 модель отличалась скруглённой формой капота и передних крыльев, крышкой багажника, передней и задней оптикой, бамперами, окрашенными в цвет кузова, спойлером багажника с дополнительным стоп-сигналом, обтекателями порогов, молдингами дверей, а также салоном и модернизированным электрооборудованием.
Пятидверный хэтчбек ВАЗ-2114    
© kakoeAuto.ru, 2013-2022
Двигатель: 1.6L 16V, 75.6 х 121 х 82.8 (кованые поршни МАМИ турбо), турбокомпрессор TD04L, турбо-ресивер из нержавеющей стали, дроссельный патрубок D-54 мм, равнодлинный выпускной коллектор, промежуточная труба из нержавеющей стали без резонатора D-63 мм, глушитель из нержавеющей стали MG-Race (DTM), доработанная ГБЦ (клапаны 32/29), турбо-распредвалы Стольников 10,4 (262), РДТ 380 кПа, форсунки Bosch (440cc), бензонасос Walbro (255л/ч), «холодные» свечи DENSO IRIDIUM, контроллер Январь 5.
КПП 6-ти ступ.: 7-й ряд + ГП 3.71 + самоблокирующийся дифференциал Val Racing (5.0) + короткоходная кулиса + шарнир ВАЗ 1118, сцепление 2110 PILENGA Sport (керамика).
Подвеска: опоры стоек Асоми, винтовая подвеска ABTechnic Sprint (-100), растяжка стоек ТехноМастер (TS edition), усилитель передней панели Createch, подрамник Аutoproduct с жёсткими рычагами, передний стабилизатор D-21 мм, стойки стабилизатора SS20 полиуретан, задняя балка Autoproduct, задняя распорка Autoproduct, пластины отрицательного развала задних колёс ТехноМастер.
Рулевое управление: рейка SS20, усилитель щитка передка ТехноМастер.
Тормоза: передние четырёхпоршневые R15 PROMA + колодки Ferodo DS2500, задние дисковые тормоза R13 ABTechnic, вакуумный усилитель тормозов TRW, кран-регулятор тормозного баланса Wilwood.
Колёса: диски R15 SLIK L187S TMS, резина 195/50 R15 Michelin Pilot Exalto PE2.
Оптика: передняя линзованная HELLA, ксенон MTF 5000K (ближний/дальний), задняя светодиодная ProSport;
Салон: комбинация приборов Flash Red Lite, руль Isotta, накладки педалей ТоргМаш, сиденья R1 Sport.
Кузов: обвес AVR, badboy, электрозеркала, евро-ручки, плёнка 3D Carbon, тонировка.
Подробнее об этом автомобиле:
http://www.drive2.ru/cars/lada/2115/2115/maxdreamer/
Etsy больше не поддерживает старые версии вашего веб-браузера, чтобы обеспечить безопасность пользовательских данных.
Пожалуйста, обновите до последней версии.
Воспользуйтесь всеми преимуществами нашего сайта, включив JavaScript.
Нажмите, чтобы увеличить
Цена: от €27,22
Загрузка
Включая НДС (где применимо), плюс стоимость доставки
Звездный продавец
Star Sellers имеют выдающийся послужной список в обеспечении отличного обслуживания клиентов — они постоянно получали 5-звездочные отзывы, вовремя отправляли заказы и быстро отвечали на любые полученные сообщения.
| 8814 продаж |
5 из 5 звездУстановить количество
Выберите вариант Набор из 2 одинаковых (27,22 €) Набор из 3 одинаковых (37,42 €) Набор из 4 одинаковых (45,36 €) Набор из 5 одинаковых (56,70 €) Набор из 6 одинаковых (68,04 €) Набор из 7 одинаковых (79 €).38) Набор из 8 одинаковых (90,72 €) Набор из 9 одинаковых (102,06 €) Набор из 10 одинаковых (113,40 €)
Выберите опцию
Добавьте свою персонализацию
Укажите:
Имя или инициалы:
Надпись (спереди):
Обратный текст:
(шрифт, как показано)
Узор и цвет:
Форма и цвет рамки:
Специальные инструкции:
Таблицы, представленные в разделе фотографий.
Пробы будут отправлены на утверждение через Etsy Message перед печатью.
1024
Вы можете сделать предложение только при покупке одного товара
Продавец звезд. Этот продавец неизменно получал 5-звездочные отзывы, отправлял вовремя и быстро отвечал на все полученные сообщения.
Внесен в список 30 октября 2020 г.
12 избранных
Сообщить об этом элементе в Etsy
Выберите причину… С моим заказом возникла проблемаОн использует мою интеллектуальную собственность без разрешенияЯ не думаю, что это соответствует политике EtsyВыберите причину…
Первое, что вы должны сделать, это связаться с продавцом напрямую.
Если вы уже это сделали, ваш товар не прибыл или не соответствует описанию, вы можете сообщить об этом Etsy, открыв кейс.
Сообщить о проблеме с заказом
Мы очень серьезно относимся к вопросам интеллектуальной собственности, но многие из этих проблем могут быть решены непосредственно заинтересованными сторонами. Мы рекомендуем связаться с продавцом напрямую, чтобы уважительно поделиться своими проблемами.
Если вы хотите подать заявление о нарушении прав, вам необходимо выполнить процедуру, описанную в нашей Политике в отношении авторских прав и интеллектуальной собственности.
Посмотрите, как мы определяем ручную работу, винтаж и расходные материалы
Посмотреть список запрещенных предметов и материалов
Ознакомьтесь с нашей политикой в отношении контента для взрослых
Товар на продажу…не ручной работы
не винтаж (20+ лет)
не ремесленные принадлежности
запрещены или используют запрещенные материалы
неправильно помечен как содержимое для взрослых
Пожалуйста, выберите причину
Расскажите нам больше о том, как этот элемент нарушает наши правила.
Расскажите нам больше о том, как этот элемент нарушает наши правила.
Посмотреть корзину и проверить
реклама от BettyBigDay
Реклама магазина BettyBigDay
БеттиБигДэй Из магазина BettyBigDay
€36,00
Бесплатная доставка
реклама IdealGiftCompany
Объявление магазина IdealGiftCompany
IdealGiftCompany Из магазина IdealGiftCompany
€9,85
реклама от LorraCreations
Реклама магазина LorraCreations
LorraCreations Из магазина LorraCreations
€19,02
реклама от RainiesImpressions
Реклама магазина RainiesImpressions
RainiesВпечатления Из магазина RainiesImpressions
€22,68
Только 2 в наличии и в тележках 7 человек
реклама IdealGiftCompany
Объявление магазина IdealGiftCompany
IdealGiftCompany Из магазина IdealGiftCompany
€9,85
реклама от MegsCraftDesignsCo
Реклама магазина MegsCraftDesignsCo
MegsCraftDesignsCo Из магазина MegsCraftDesignsCo
Цена продажи от €28,91 от €28,91
от €34,40 Первоначальная цена от €34,40 (15% скидка)
Бесплатная доставка
Биотехнология BMC том 9 , номер статьи: 24 (2009) Процитировать эту статью
13 тыс. обращений
79 цитирований
7 Альтметрический
Сведения о показателях
Несмотря на большое количество мономерных флуоресцентных белков, разработанных в последние годы, описанные пары FRET на основе флуоресцентных белков по-прежнему характеризуются рядом недостатков, затрудняющих их использование в качестве репортеров в клеточной биологии и для высокопроизводительного клеточного скрининга.
Здесь мы провели скрининг некоторых из недавно разработанных пар мономерных белков, чтобы найти оптимальную комбинацию, которая обеспечила бы изменения FRET в широком динамическом диапазоне наряду с высокой рН- и фотостабильностью, быстрым созреванием и яркой флуоресценцией, а также надежным обнаружением. в любой флуоресцентной системе визуализации. Среди сгенерированных пар FRET мы выбрали TagGFP-TagRFP, сочетающие в себе все упомянутые желаемые характеристики. На основе этой высокоэффективной пары FRET мы создали яркий, высококонтрастный, рН- и фотостабильный репортер апоптоза, названный CaspeR3 (Caspase 3 Reporter).
Совокупность преимуществ позволяет предположить, что TagGFP-TagRFP является одной из наиболее эффективных пар «зеленый/красный», доступных на сегодняшний день для анализов FRET/FLIM для мониторинга взаимодействия представляющих интерес белков в живых клетках и для создания сенсоров на основе FRET для различные приложения.
CaspeR3 обеспечивает надежное обнаружение апоптоза и должен стать популярным инструментом как для исследований клеточной биологии, так и для скрининговых анализов с высокой пропускной способностью.
В последнее десятилетие генетически кодируемые сенсоры на основе FRET (Förster Resonance Energy Transfer) между флуоресцентными белками стали популярными инструментами для изучения кинетики и локализации различных путей внутри живых клеток [1, 2]. Однако их применение ограничено относительно низким динамическим диапазоном (изменение отношения эмиссии донор/акцептор), который, в свою очередь, ограничивается эффективностью FRET. Кроме того, спектральное разделение может быть проблематичным из-за ярко выраженных перекрестных помех, характерных для традиционных голубых и желтых FRET-партнеров.
Недавняя разработка оранжевых, красных и дальнекрасных мономерных флуоресцентных белков резко обогатила палитру доступных генетически кодируемых пар FRET [3–8]. Некоторые из доступных новых комбинаций могут обеспечить более высокую эффективность FRET и более надежное спектральное разделение флуоресценции донора и акцептора.
Сдвиг длин волн пар FRET в сторону красной части спектра снижает вклад клеточной аутофлуоресценции и в целом повышает эффективность FRET из-за увеличения R 0 значений [2, 9].
Однако выбор наиболее подходящей пары не очевиден как из-за недостатков, обнаруженных у некоторых недавно разработанных оранжевых и красных флуоресцентных белков, так и из-за непредсказуемых слабых взаимодействий между донором и акцептором, которые могут привести к усилению или нарушению ЛАД, в зависимости от полученной ориентации хромофоров. Технические ограничения доступного программного и аппаратного обеспечения для микроскопии еще больше усложняют выбор. Недостаток сравнительной информации препятствует развитию приложений на основе FRET и разработке высококонтрастных (т. е. надежно сообщающих) флуоресцентных датчиков, необходимых для чувствительных исследований молекулярной биологии клеток и для надежных скрининговых анализов с высокой пропускной способностью и высоким содержанием [1]. .
Для выявления предпочтительной пары FRET, состоящей из недавно созданных мономерных флуоресцентных белков, был проведен скрининг палитры Tag белков (ОАО «Евроген»).
При непосредственном сравнении амплитуды флуоресценции до и после разделения флуоресцентных белков (см. Дополнительный файл 1) пара TagGFP-TagRFP продемонстрировала самый высокий динамический диапазон среди протестированных пар FRET и была дополнительно охарактеризована более подробно.
TagGFP (ЗАО «Евроген») и TagRFP [7] — яркие мономерные флуоресцентные белки с пиками возбуждения/испускания при 482/505 нм и 555/584 нм соответственно. Высокий квантовый выход флуоресценции TagGFP наряду с высоким молярным коэффициентом экстинкции TagRFP и отличным перекрытием спектров эмиссии донора и возбуждения акцептора приводят к высокоэффективному FRET (рис. 1A, B). Радиус Фёрстера (рассчитанный с использованием стандартных методов, см. Дополнительный файл 1) для FRET между TagGFP и TagRFP составляет 5,74 нм, что значительно выше, чем у пары TagGFP-mCherry, равной 5,28 нм. В то же время, поскольку пики эмиссии TagGFP и TagRFP разнесены на целых 79нм сигнал эмиссии этих двух белков можно надежно разделить в любой системе визуализации.
Высокая pH-стабильность (pKa 4,7 для TagGFP и 3,8 для TagRFP) делает эту пару надежным независимым от pH репортером и позволяет использовать ее для визуализации кислых органелл.
Спектральный ответ и определение каспазы CaspeR3 . A. Спектры возбуждения (штриховые линии) и излучения (сплошные линии) для TagGFP (зеленый) и TagRFP (красный). Спектральное перекрытие заполнено серым цветом. B. Спектры эмиссии CaspeR3 до (пунктирная линия) и после расщепления каспазой 3 (сплошная линия). C. Изменение соотношения излучения CaspeR3 между зеленым и красным при индуцированном стауроспорином апоптозе. Примерно через 40–50 мин после введения стауроспорина клетки демонстрировали выраженные изменения соотношения сигналов флуоресценции. Коэффициент эмиссии показан для 5 ячеек, временная точка выровнена по медиане изменений отношения, индивидуально для каждой ячейки. Возбуждение при 488 нм, эмиссия регистрировалась при 500–530 нм и 560–600 нм.
D. Время жизни флуоресценции TagGFP τ 9Изменения 0288 φ (сплошные линии) и τ M (пунктирные линии) для CaspeR3 во время индуцированного стауроспорином апоптоза. Возбуждение осуществлялось при 488 нм, а излучение флуоресценции донора пропускалось через полосовой фильтр 500–530 нм. E. Двухканальная флуоресцентная визуализация CaspeR3 при индуцированном стауроспорином апоптозе в клетках HeLa. Время в минутах показано после инфузии стауроспорина.
Полноразмерное изображение
Длина волны возбуждения, необходимая для визуализации изменений FRET пары TagGFP/TagRFP с помощью изображения соотношения, обеспечивается обычным фильтром возбуждения FITC/GFP или широко распространенной лазерной линией 488 нм, а два сигнала излучения получаются с использованием полосовой фильтр 500–530 нм (эмиссионный фильтр FITC/GFP) и полосовой фильтр 560–600 нм (эмиссионный фильтр Cy3/DsRed) или длиннополосный фильтр 560LP и т.п. Как можно сделать вывод из рис. 1A, прямое возбуждение акцептора (TagRFP) при 488 нм является маргинальным, что приводит к почти чистому спектру излучения донора (TagGFP) в отсутствие FRET (см.
рис. 1B, сплошная линия).
На основе этой пары флуоресцентных белков мы создали яркий, высококонтрастный, рН- и фотостабильный репортер апоптоза на основе FRET, названный CaspeR3 ( Casp ase 3 R eporter), построенный из TagRFP и TagGFP, соединенных через 17 а.о. пептидный линкер, содержащий расщепляемый каспазой-3 мотив DEVD [10] (схему конструкции см. в дополнительном файле 1).
Конструкция была экспрессирована в E. coli и демонстрировали яркую флуоресценцию после выращивания в течение ночи при 37°C и очистки. Дальнейшая инкубация образца не приводила к существенным изменениям спектров флуоресценции или яркости, что свидетельствовало о глубоком созревании обоих белков. Расщепление сенсора активированной формой каспазы 3 приводило к разделению двух флуоресцентных белков и элиминации FRET. Прямой мониторинг отношения эмиссии донор/акцептор продемонстрировал до 5-кратного изменения соотношения при расщеплении CaspeR3 рекомбинантной каспазой 3 (BioCat GmbH) in vitro (рис.
1В и дополнительный файл 1). Увеличение интенсивности флуоресценции донора было не менее чем в 2 раза, что соответствует эффективности FRET не менее 50%. Впоследствии мы проверили чувствительность к CaspeR3 в временно трансфицированных клетках HeLa. Живые клетки контролировали при 37°C с помощью конфокального микроскопа Leica SP2 (возбуждение с помощью лазерной линии 488 нм, эмиссия регистрировалась при 500–530 нм и 560–650 нм). Флуоресценция была равномерно распределена в цитозоле и ядре без агрегации или неспецифической локализации. Важно отметить, что как зеленый, так и красный сигналы были надежно стабильны при возбуждении синим цветом в различных условиях облучения в течение нескольких часов. Не наблюдалось обратимого или необратимого флуоресцентного обесцвечивания или фотопревращения.
Апоптоз индуцировали обработкой 2 мкМ стауроспорина (Calbiochem) Приблизительно через 40–50 мин после инфузии стауроспорина (инкубация при 37°C) в клетках наблюдались быстрые (в течение 10 мин) и выраженные изменения соотношения сигналов зеленой и красной флуоресценции , что указывает на активацию каспазы 3.
Позже эти клетки продемонстрировали характерное пузырение мембраны. Средний контраст в живых клетках (рассчитанный как изменение отношения эмиссии донор/акцептор для 5 клеток, момент времени, совмещенный с медианой изменения отношения, индивидуальный для каждой клетки) достигал 3,8-кратного (рис. 1C).
Одним из наиболее мощных и количественных подходов к измерению изменений FRET является визуализация времени жизни флуоресценции (FLIM), которая измеряет влияние акцептора на время жизни возбужденного состояния донора. Если акцептор находится в непосредственной близости, время жизни сокращается. Сокращение времени жизни флуоресценции является кинетическим параметром, который можно определить независимо от концентрации зонда, оптического пути микроскопа и умеренных уровней фотообесцвечивания. Следовательно, сокращение времени жизни донора является чрезвычайно надежной и количественной оценкой эффективности FRET, которая прямо пропорциональна количеству нерасщепленного субстрата.
Мы выполнили измерения FLIM неслитых TagGFP и TagGFP в датчике CaspeR3 в живых клетках. Эти эксперименты показали существенные различия в обнаруженных временах жизни флуоресценции (табл. 1). Соответственно, при индуцированном стауроспорином апоптозе время жизни флуоресценции TagGFP в CaspeR3 резко изменилось, переключившись с 1,5 нс на 2,5 нс (рис. 1D и дополнительный файл 2).
Полноразмерная таблица
Эффективность FRET нерасщепленного CaspeR3 (38% на основе времени жизни фазы) является одной из самых высоких, измеренных FLIM, и выгодно отличается от красного Ранее сообщалось о датчике каспазы -to-green с эффективностью FRET 25% [11]. Поскольку эффективность FRET расщепленного субстрата равна нулю, динамический диапазон датчика довольно высок, что указывает на то, что пара FRET TagGFP-TagRFP будет отличным инструментом для скрининга живых клеток на основе FLIM с высоким содержанием.
Большинство сообщаемых индикаторов FRET основаны на исторически первых (BFP) парах CFP/YFP [12–15]. Однако эти пары FRET на самом деле не самые удобные и эффективные. Действительно, спектральное разделение перекрывающихся спектров голубого и желтого излучения никогда не может быть полным, а использование узкополосных фильтров приводит к резкой потере излучения. Кроме того, относительно высокие уровни аутофлуоресценции в сине-голубой области видимого спектра и фототоксичности при возбуждении в ближнем ультрафиолете еще больше усложняют их применение.
Известные пары FRET, содержащие красные флуоресцентные акцепторы, страдают от тетрамеризации и демонстрируют более низкий контраст [16, 17]. Ближайшим конкурентом CaspeR3 является высококонтрастный индикатор каспазы-3 MiCy-mKO [3]. Однако было замечено, что mKO переходит из оранжевой в зеленую флуоресцентную форму при освещении синим светом [9], что может затруднить интерпретацию изменений FRET в этот и другие методы на основе mKO.
Высокий коэффициент экстинкции TagRFP делает его предпочтительным акцептором FRET для зеленых флуоресцентных белков. Следует отметить, что фактическая эффективность FRET обратно пропорциональна 6 th зависимость мощности от расстояния, что приводит к быстрому падению обнаруженной эффективности FRET при близости донор-акцептор выше R 0 . Например, в аналогичных условиях мы ожидаем, что, учитывая радиусы Ферстера 5,28 нм и 5,74 нм для TagGFP-mCherry и TagGFP-TagRFP соответственно, последний будет отображать в 1,4 раза больше FRET, чем датчик, состоящий из пары TagGFP-mCherry.
Превосходящий радиус Фёрстера вызван 1,5-кратным увеличением спектрального перекрытия для пары TagGFP-TagRFP по сравнению с парой TagGFP-mCherry. Хотя это и не способствует эффективности FRET, значительно увеличенный квантовый выход TagRFP очень полезен для ратиометрических исследований FRET на основе акцепторов.
В целом, объединенные преимущества TagGFP-TagRFP делают его предпочтительной парой FRET как для логометрического анализа FRET, так и для анализа FLIM для мониторинга взаимодействия представляющих интерес белков в живых клетках, а также для создания высококонтрастных FRET-основанных генетических закодированные сенсоры для различных аналитов и активности белков.
Для бактериальной экспрессии соответствующие гены флуоресцентных белков, амплифицированных методом ПЦР, последовательно клонировали в рамку считывания в вектор pQE30 (Qiagen) с использованием BamHI/KpnI и KpnI/HindIII сайты рестрикции. Для экспрессии в эукариотических клетках конструкцию CaspeR3 заменяли на TurboGFP в векторе pTurboGFP-N (Evrogen) с использованием предварительно введенных сайтов рестрикции AgeI/NotI .
Белки, слитые с N-концевой полигистидиновой меткой, были экспрессированы в штамме E. coli XL1 Blue (Invitrogen). Бактериальные культуры центрифугировали и клеточные осадки повторно суспендировали в буфере 20 мМ Tris-HCl, 100 мМ NaCl, pH 7,4 и лизировали ультразвуком. Рекомбинантные белки очищали с использованием металл-аффинной смолы TALON (Clontech) с последующей стадией обессоливания на колонках для гель-фильтрации (Bio-Rad).
Для измерения спектров возбуждения-испускания использовали флуоресцентный спектрофотометр Varian Cary Eclipse.
Визуализация времени жизни флуоресценции выполнялась с использованием широкопольного подхода в частотной области на самодельном приборе [18] с использованием усилителя изображения с радиочастотной модуляцией (Lambert Instruments II18MD), соединенного с ПЗС-камерой (Photometrics HQ) как детектор. Для всех измерений использовался объектив 40× (масло Plan NeoFluar NA 1.3). Частота модуляции была установлена на 75,1 МГц. Двенадцать фазовых изображений с экспозицией 100–200 мс были получены в случайном порядке записи, чтобы свести к минимуму артефакты из-за фотообесцвечивания [19].]. Для возбуждения на длине волны 488 нм использовали аргон-ионный лазер, который пропускали на образец с помощью дихроичного зеркала с длиной волны 495 нм, а испускаемый свет фильтровали эмиссионным фильтром 515/30 нм. Каждое измерение FLIM сопровождалось эталонным измерением.
Эталон был откалиброван путем усреднения трех-пяти измерений FLIM раствора эритрозина B с концентрацией 1 мг/мл (номер по каталогу 198269, Sigma-Aldrich, Zwijndrecht, Нидерланды) в H 2 O, который имеет известное короткое время жизни флуоресценции 0,08 нс [19, 20]. Из последовательности фаз было рассчитано изображение интенсивности (DC) и изображение времени жизни фазы и модуляции с использованием макросов Matlab. По этим данным время жизни отдельных клеток было определено с помощью ImageJ http://rsb.info.nih.gov/ij/. Затем рассчитывали среднее время жизни фазы и модуляции (± стандартное отклонение). Для представления карт времени жизни к данным времени жизни был применен гладкий фильтр 3 × 3. Карты времени жизни ложных цветов и гистограммы 1D и 2D были созданы с помощью макроса ImageJ.
Поршень Д.В., Кремерс Г.Дж.: Флуоресцентный белок FRET: хороший, плохой и уродливый. Тенденции биохимических наук.
2007, 32: 407-414.
Артикул КАС Google Scholar
Кремерс Г.Дж., Гоэдхарт Дж.: Видимые флуоресцентные белки для FRET» в «Лабораторных методах биохимии и молекулярной биологии». «Методы FRET и FLIM». 2008, 33: 171-224.
Артикул Google Scholar
Карасава С., Араки Т., Нагаи Т., Мидзуно Х., Мияваки А.: флуоресцентные белки, излучающие голубой и оранжевый, в качестве пары донор/акцептор для резонансной передачи энергии флуоресценции. Biochem J. 2004, 381: 307-312.
Артикул КАС Google Scholar
Shaner NC, Campbell RE, Steinbach PA, Giepmans BN, Palmer AE, Tsien RY: Улучшенные мономерные красные, оранжевые и желтые флуоресцентные белки, полученные из Discosoma sp. красный флуоресцентный белок. Нац биотехнолог. 2004, 22: 1567-1572.
Артикул КАС Google Scholar
«>Wang L, Tsien RY: Эволюция белков в клетках млекопитающих с использованием соматической гипермутации. Нат Проток. 2006, 1: 1346-1350.
Артикул КАС Google Scholar
Щербо Д., Мерзляк Е.М., Чепурных Т.В., Фрадков А.Ф., Ермакова Г.В., Соловьева Е.А., Лукьянов К.А., Богданова Е.А., Зарайский А.Г., Лукьянов С., Чудаков Д.М.: Яркий дальнекрасный флуоресцентный белок для визуализации всего тела. Нат Методы. 2007, 4: 741-746.
Артикул КАС Google Scholar
Мерзляк Э.М., Годхарт Ю., Щербо Д., Булина М.Е., Щеглов А.С., Фрадков А.Ф., Гайнцева А., Лукьянов К.А., Лукьянов С., Гаделла Т.В., Чудаков Д.М.: Яркий мономерный красный флуоресцентный белок с увеличенным временем жизни флуоресценции. Нат Методы. 2007, 4: 555-557.
Артикул КАС Google Scholar
«>Shaner NC, Lin MZ, McKeown MR, Steinbach PA, Hazelwood KL, Davidson MW, Tsien RY: Повышение фотостабильности ярких мономерных оранжевых и красных флуоресцентных белков. Нат Методы. 2008, 5: 545-551.
Артикул КАС Google Scholar
Goedhart J, Vermeer JE, Adjobo-Hermans MJ, van Weeren L, Gadella TW: Чувствительное обнаружение гомодимеров p65 с использованием красных смещенных и флуоресцентных белковых пар FRET. ПЛОС ОДИН. 2007, 2: e1011-
Статья Google Scholar
Торнберри Н.А., Розен А., Николсон Д.У.: Контроль апоптоза протеазами. Adv Pharmacol. 1997, 41: 155-177.
Артикул КАС Google Scholar
Keese M, Offterdinger M, Tischer C, Girod A, Lommerse PH, Yagublu V, Magdeburg R, Bastiaens PI: Количественная визуализация апоптоза в опухолевых клетках колоректального рака.
Дифференциация. 2007, 75: 809-818.
Артикул КАС Google Scholar
Махаджан Н.П., Харрисон-Шостак, округ Колумбия, Мишо Дж., Герман Б.: Новые субстраты протеазы мутантного зеленого флуоресцентного белка обнаруживают активацию специфических каспаз во время апоптоза. хим. биол. 1999, 6: 401-409.
Артикул КАС Google Scholar
Tawa P, Tam J, Cassady R, Nicholson DW, Xanthoudakis S: Количественный анализ расщепления субстрата флуоресцентной каспазы в интактных клетках и идентификация новых ингибиторов апоптоза. Смерть клеток 2001, 8: 30-37.
Артикул КАС Google Scholar
Такемото К., Нагаи Т., Мияваки А., Миура М.: Пространственно-временная активация каспазы, выявленная индикатором, нечувствительным к воздействию окружающей среды.
Джей Селл Биол. 2003, 160: 235-243.
Артикул КАС Google Scholar
Chiang JJ, Truong K: Компьютерное моделирование нового флуоресцентного биосенсора для определения протеолитической активности каспаз улучшает динамический диапазон. IEEE Транс-нанобиология. 2006, 5: 41-45.
Артикул Google Scholar
Каваи Х., Судзуки Т., Кобаяши Т., Сакураи Х., Охата Х., Хонда К., Момосе К., Намеката И., Танака Х., Шигенобу К. и др.: Одновременное обнаружение в реальном времени активации инициаторной и эффекторной каспаз с помощью анализа переноса энергии резонансного двойного флуоресценции. J Pharmacol Sci. 2005, 97: 361-368.
Артикул КАС Google Scholar
Элфик Л.М., Мейнандер А., Михайлов А., Ричард М., Томс Н.Дж., Эрикссон Дж.Е., Касс Г.Е.
: Обнаружение активации каспазы-3 в живых клетках с помощью конструкции переноса резонансной энергии флуоресценции на основе красного флуоресцентного белка Discosoma. Анальная биохимия. 2006, 349: 148-155.
Артикул КАС Google Scholar
Ван Мюнстер Э.Б., Гаделла Т.В.: phiFLIM: новый метод, позволяющий избежать наложения спектров в микроскопии с изображением жизни флуоресценции в частотной области. Дж Микроск. 2004, 213: 29-38.
Артикул КАС Google Scholar
van Munster EB, Gadella TW: Подавление артефактов, вызванных фотообесцвечиванием, в частотной области FLIM путем перестановки порядка записи. Цитометрия А. 2004, 58: 185-194.
Артикул Google Scholar
Bastiaens PI, van Hoek A, Wolkers WF, Brochon JC, Visser AJ: Сравнение динамических структур липоамиддегидрогеназы и глутатионредуктазы с помощью поляризованной флуоресценции флавина с временным разрешением.
Биохимия. 1992, 31: 7050-7060.
Артикул КАС Google Scholar
Скачать ссылки
Работа выполнена при поддержке грантов Медицинского института Говарда Хьюза 55005618, Программы молекулярной и клеточной биологии РАН, от 07-04-12189-офи, Роснауки, программы 02.512.11.221 Поддержка ведущих научных школ» НС-2395.2008.4. DMC поддержан Грантом Президента РФ МК-6119.2008.4.
Сведения об авторе
Институт биоорганической химии им. катерина А, Соуслова, Ирина И Шемякина, Сергей Лукьянов и Дмитрий М. Чудаков
Сваммердамский институт наук о жизни, отдел молекулярной цитологии, Центр передовой микроскопии, Амстердамский университет, Круислаан 316, NL-1098 SM, Амстердам, Нидерланды
Joachim Goedhart & Theodorus WJ Gadella
ОАО «Евроген», Миклухо-Маклая, 16/10, 117997, Москва, Россия 0019 Авторы
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Дмитрий М Чудаков.
TagGFP, TagRFP и CaspeR3 являются собственностью ОАО «Евроген», Москва, Россия.
SL и DMC имеют долю участия в АО «Евроген».
Векторная кодировка CaspeR3 будет доступна для научного сообщества через АО «Евроген».
DS и EAS создали гибридные конструкции и проанализировали пары FRET in vitro и в живых клетках. Компания TVC провела культивирование клеток. AG и IIS оказали техническую помощь. JG и TWJG провели эксперименты FLIM и участвовали в подготовке рукописи. SL и DMC написали рукопись.
Дмитрий Щербо, Екатерина А Соуслова внесли одинаковый вклад в эту работу.
Дополнительный файл 1: Дополнительные рисунки и данные. Предоставленные данные представляют собой сравнение нескольких пар FRET TagFP и детали, касающиеся расчета радиуса Фёрстера. (PDF 214 КБ)
movДополнительный файл 2: Изменение времени жизни зеленой флуоресценции CaspeR3 при индуцированном стауроспорином апоптозе. Этот фильм демонстрирует, что при индуцированном стауроспорином апоптозе время жизни флуоресценции TagGFP в составе CaspeR3 резко изменилось, переключившись с 1,5 нс на 2,5 нс. (MOV 2 МБ)
Ниже приведены ссылки на оригинальные файлы изображений, представленные авторами.
Открытый доступ Эта статья опубликована по лицензии компании BioMed Central Ltd. Эта статья находится в открытом доступе и распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (
https://creativecommons.org/licenses/by/2.0
), который разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего цитирования оригинальной работы.