8-900-374-94-44
[email protected]
Slide Image
Меню

Pantera slk 468: Архив: Автосигнализация Pantera SLK-468 — Угона.нет

Содержание

Архив: Автосигнализация Pantera SLK-468 - Угона.нет

Современная автомобильная охранная система с двусторонней связью. Радиоканал защищен от сканирования и перехвата команд управления при помощи обновленного кода BACS (Bilarm Advanced Code System) на нелицензируемой частоте 868 МГц. Использование этой частоты помогает добиться хороших показателей по помехозащищенности радиоканала и увеличению дальности управления и оповещения. Управление системой и получение оповещений о тревожных событиях осуществляется при помощи основного брелка с ЖК индикатором с двухсторонней связью.

Особенности и функционал

     Стандартные функции
  • Контроль из любой точки мира (необходим опциональный модуль Bilarm GPS/GSM)
  • Один 5-кнопочный программируемый передатчик с двусторонней связью и ЖК-дисплеем
  • Один 4-кнопочный программируемый передатчик
  • Функция звукового или вибрационного оповещения передатчиком с двусторонней связью
  • Часы, будильник, таймер обратного отсчета в передатчике с двусторонней связью
  • Отслеживание любых изменений состояния системы передатчиком с двусторонней связью
  • Усовершенствованный динамический код
  • Усовершенствованный режим Anti-HiJack
  • 1- или 2-цифровой программируемый персональный код отключения системы
  • 6-тональная сирена
  • Синий светодиодный индикатор состояния системы
  • Раздельное управление правыми/левыми указателями поворота с помощью встроенного реле
  • Дистанционное управление замками дверей с помощью встроенных реле
  • Блокировка стартера
  • Возможность подключения до 3-х дополнительных блокировок двигателя
  • 2-уровневый датчик удара с разъемным соединением
  • Разъем для дополнительного 2-уровневого датчика
  • Силовой выход 2-го канала для управления замком багажника или дополнительными устройствами
  • Выход 3-го канала для управления дополнительными устройствами
  • Встроенное реле для управления внутрисалонным освещением, модулем стеклоподъемников, дополнительным пейджером или раздельным отпиранием водительской и пассажирских дверей
  • Возможность реализации функции центрального замка
  • Постановка на охрану без помощи передатчика
  • Возможность ручного и автоматического включения режима “Турбо”
  • Функция бесшумного режима тревоги
  • Бесшумная постановка и снятие системы с охраны
  • Постановка системы в режим охраны с раздельным отключением зон датчиков
  • Усовершенствованный дистанционный режим "Паника"
  • Сервисный режим Valet / Дистанционный режим Valet / Предупреждение о включенном режиме Valet
  • Функция вызова владельца автомобиля
  • Функция поиска автомобиля
  • Память на 2 последних срабатывания системы с указанием зоны/триггера
  • 6 независимых зон охраны
  • Обход неисправной зоны при постановке на охрану с указанием зоны/триггера
  • Предупреждение о разряде батарейки брелока-передатчика
  • Восстановление заводских настроек программируемых функций системы
    Программируемые функции
  • Пассивная постановка на охрану с запиранием или без запирания дверей
  • Автоматическая повторная постановка на охрану с запиранием или без запирания дверей
  • Автоматическое запирание/отпирание дверей при включении/выключении зажигания
  • Возможность автоматического запирания дверей по датчику скорости
  • Режим пассивной блокировки двигателя
  • Возможность отключения охраны в 2 этапа
  • Функция защиты от ложных срабатываний системы FAPC™
  • Дистанционное или автоматическое включение режима Anti-HiJack
  • Активное и безопасное глушение двигателя в режиме Anti-HiJack
  • Возможность охраны автомобиля с работающим двигателем
  • Автоматическая разовая или регулярная проверка зоны действия передатчика с двусторонней связью
  • Задержка включения режима охраны 3, 15, 30 или 45 секунд
  • Режим работы выхода канала 2 системы: отпирание багажника, импульсный, постоянный, таймерный (30 c, 1 мин, 3 мин)
  • Режим работы выхода канала 3 системы: импульсный, постоянный, таймерный (30 c, 1, 3, 5 мин. )
  • Длительность импульса управления замками дверей: 1 с, 3,5 с, двойной импульс отпирания, двойной импульс запирания, режим "Комфорт" 10, 16, 23 или 30 секунд.

Технические характеристики

  • Номинальное напряжение питания     12В
  • Частота радиоканала     868 МГц
  • Радиус действия в режиме управления     до 700м
  • Радиус действия в режиме оповещения     до 1150м
  • Число независмых зон охраны     6
  • Диапазон рабочих температур     -40 ... +85°С

Комплектность

  • Основной блок
  • 5-кнопочный брелок-передатчик с 2-сторонней связью и ЖК-дисплеем
  • 4-кнопочный брелок-передатчик дистанционного управления системой
  • Внешний приемо-передающий модуль со встроенной антенной с соединительным кабелем
  • Двухуровневый датчик удара с соединительным кабелем
  • Сирена
  • Колодка с проводкой для реле блокировки двигателя
  • Реле блокировки двигателя
  • Светодиодный индикатор (СИД) с соединительным кабелем
  • Кнопочный переключатель Valet с соединительным кабелем
  • Концевой выключатель кнопочного типа
  • Комплект проводки Molex
  • 6-контактный разъём Molex
  • Руководство пользователя
  • Руководство по установке

Pantera SLK-468 Инструкция по установке онлайн [1/39]

SLK-468 "Инструкция по установке"

1

Автомобильная охранная система с дистанционным управлением

и 2-сторонней связью

PANTERA SLK-468

ИНСТРУКЦИЯ ПО УСТАНОВКЕ

Что необходимо помнить при установке автосигнализации:

Перед началом установки автосигнализации

♦ Данная охранная система (автосигнализация) представляет собой сложное электронное устройст-

во. Монтаж, подключение и настройка автосигнализации подробно изложены в “Инструкции по уста-

новке: и могут быть произведены потребителем в полном объёме самостоятельно. Однако завод-

изготовитель настоятельно рекомендует Вам поручить проведение указанного комплекса работ сер-

висному центру, сертифицированному по ГОСТ Р 51709-2001 (ОКУН

017613) - установка на легковой

автомобиль дополнительного электрооборудования, сигнализаций и др.- (далее – сертифицированный

сервисный центр).

♦ Перед установкой автосигнализации, пожалуйста, полностью прочитайте данную Инструкцию. Уста-

новка автосигнализации требует подключения ко многим штатным системам автомобиля. Многие но-

вые автомобили имеют низковольтные или мультиплексные системы, которые могут быть повреждены

при использовании низкоомных проверочных приборов,

например, проверочных ламп или логических

пробников (которые используются для тестирования компьютеров). Для проверки всех штатных цепей

автомобиля перед подключением устанавливаемой системы используйте только высококачественный

цифровой мультиметр.

♦ Автосигнализация предназначена для стационарной установки на автотранспортном средстве с пи-

танием от его бортовой сети постоянного тока напряжением +12 В, отрицательный полюс батареи со-

единен

с "массой" автомобиля.

♦ Если в автомобиле установлена автомагнитола и/или головное мультимедийное устройство с за-

программированным кодом, рекомендуется не отсоединять аккумуляторную батарею. Рекомендуем не

отсоединять аккумуляторную батарею, если автомобиль оборудован пневматической подушкой безо-

пасности. Многие системы обеспечения безопасности, использующие пневматические подушки, после

отключения питания будут показывать определенный код диагностики

с помощью предупреждающих

индикаторных лампочек, что может потребовать обращения в автосервис.

♦ Выберите вместе с пользователем место для установки светодиодного индикатора состояния сис-

темы и кнопочного переключателя Valet.

♦ Снимите предохранитель цепи питания внутрисалонного освещения автомобиля. Это позволит пре-

дотвратить случайный разряд аккумуляторной батареи.

♦ Опустите стёкла дверей автомобиля, чтобы случайно не

оказаться запертым в салоне при монтаже

автосигнализации.

♦ Перед установкой автосигнализации на автомобиль подсоедините к ней предварительно все прово-

да в пробном режиме, убедитесь, что все соединения сделаны правильно, подключите питание от ак-

кумуляторной батареи и удостоверьтесь, что автосигнализация работает нормально.

♦ Если установка автосигнализации требует сверления отверстий или любого

другого изменения за-

водских деталей автомобиля, обязательно предварительно проконсультируйтесь о корректности такого

вмешательства в конструкцию у ближайшего дилера.

♦ Никогда не устанавливайте центральный блок автосигнализации там, где он будет сильно нагревать-

ся, например, от воздействия прямых солнечных лучей или горячего воздуха, поступающего от системы

отопления автомобиля. Также избегайте мест, в которых

центральный блок автосигнализации и её ком-

понентов будут подвергаться воздействию сильной вибрации, или на них будет попадать пыль или грязь.

♦ Используйте только прилагающиеся к установочному комплекту автосигнализации крепежные изде-

лия. В этом случае установка будет надежной и безопасной. Использование деталей, не входящих в

установочный комплект автосигнализации, может привести к

нарушению ее нормальной работы.

Мануал: Автосигнализация PANTERA SLK-468

 

 SLK-468 

"Инструкция по установке" 

1

 

 

Автомобильная охранная система с дистанционным управлением 

и 2-сторонней связью  

PANTERA SLK-468 

ИНСТРУКЦИЯ ПО УСТАНОВКЕ 

Что необходимо помнить при установке автосигнализации: 

Перед началом установки автосигнализации  

♦  Данная охранная система (автосигнализация)  представляет собой сложное электронное устройст-

во.   Монтаж, подключение и настройка  автосигнализации  подробно изложены   в  “Инструкции  по  уста-
новке:  и  могут  быть  произведены  потребителем  в  полном  объёме  самостоятельно.  Однако  завод-
изготовитель  настоятельно  рекомендует  Вам  поручить  проведение    указанного  комплекса  работ  сер-
висному центру, сертифицированному по ГОСТ Р 51709-2001 (ОКУН 017613) - установка на легковой  
автомобиль дополнительного электрооборудования, сигнализаций и др.- (далее – сертифицированный 
сервисный центр). 
♦  Перед установкой автосигнализации, пожалуйста, полностью прочитайте данную Инструкцию. Уста-
новка  автосигнализации  требует  подключения  ко  многим  штатным  системам  автомобиля. Многие но-
вые автомобили имеют низковольтные или мультиплексные системы, которые могут быть повреждены 
при  использовании низкоомных проверочных  приборов, например, проверочных ламп или логических 
пробников (которые используются для тестирования компьютеров).
 Для проверки всех штатных цепей 
автомобиля перед подключением устанавливаемой системы используйте только высококачественный 
цифровой мультиметр. 
♦  Автосигнализация предназначена для стационарной установки на автотранспортном средстве с пи-
танием от его бортовой сети постоянного тока напряжением +12 В, отрицательный полюс батареи со-
единен с "массой" автомобиля. 
♦  Если  в  автомобиле  установлена  автомагнитола  и/или  головное  мультимедийное  устройство  с  за-
программированным кодом, рекомендуется не отсоединять аккумуляторную батарею. Рекомендуем не 
отсоединять  аккумуляторную  батарею,  если  автомобиль  оборудован  пневматической  подушкой  безо-
пасности. Многие системы обеспечения безопасности, использующие пневматические подушки, после 
отключения  питания  будут  показывать  определенный  код  диагностики  с  помощью  предупреждающих 
индикаторных лампочек, что может потребовать обращения в автосервис. 
♦  Выберите вместе с пользователем место для установки светодиодного индикатора состояния сис-
темы и кнопочного переключателя Valet.
 
♦  Снимите предохранитель цепи питания внутрисалонного освещения автомобиля. Это позволит пре-
дотвратить случайный разряд аккумуляторной батареи. 
♦  Опустите стёкла дверей автомобиля, чтобы случайно не оказаться запертым в салоне при монтаже 
автосигнализации. 
♦  Перед установкой автосигнализации на автомобиль подсоедините к ней предварительно все прово-
да в пробном режиме, убедитесь, что все соединения сделаны правильно, подключите питание от ак-
кумуляторной батареи и удостоверьтесь, что автосигнализация работает нормально. 
♦  Если установка автосигнализации требует сверления отверстий или любого другого изменения за-
водских деталей автомобиля, обязательно предварительно проконсультируйтесь о корректности такого 
вмешательства в конструкцию у ближайшего дилера. 
♦  Никогда не устанавливайте центральный блок автосигнализации там, где он будет сильно нагревать-
ся, например, от воздействия прямых солнечных лучей или горячего воздуха, поступающего от системы 
отопления автомобиля.  Также избегайте мест, в которых центральный блок автосигнализации и её ком-
понентов будут подвергаться воздействию сильной вибрации, или на них будет попадать пыль или грязь. 
♦  Используйте только прилагающиеся к установочному комплекту автосигнализации крепежные изде-
лия. В  этом  случае  установка будет  надежной и безопасной. Использование деталей, не входящих  в 
установочный комплект автосигнализации, может привести к нарушению ее нормальной работы. 

Сигнализация Pantera SLK-468 | Авто Hi-Fi

Стандартные функции системы:
Один 5-кнопочный программируемый брелок с двусторонней связью и ЖК-дисплеем
Дальность действия связи до 2000 метров (зависит от рельефа местности, плотности застройки и других факторов)
Часы, будильник, таймер обратного отсчета в передатчике с двусторонней связью
Один 4-кнопочный программируемый брелок-передатчик
Функция звукового или вибрационного оповещения брелока с ЖК-дисплеем
Усовершенствованный режим Anti-Hi-Jack
Усовершенствованный динамический код с защитой от сканирования и перехвата
6-тональная сирена
Программируемый 1- или 2-цифровой персональный код отключения системы
Раздельное управление правыми/левыми указателями поворота с помощью встроенного реле
Яркий синий светодиодный индикатор состояния системы
Блокировка стартера
Дистанционное управление замками дверей с помощью встроенного реле
2-уровневый датчик удара с разъемным соединением
Возможность подключения 3-х дополнительных блокировок двигателя
Выход 2-го канала для управления замком багажника или дополнительными устройствами
Разъем для подключения дополнительного 2-уровневого датчика
Выход 3-го канала для управления дополнительными устройствами
Постановка на охрану без помощи передатчика
Возможность реализации функции центрального замка
Встроенное реле для управления внутрисалонным освещением, дополнительным пейджером, модулем стеклоподъемников или раздельным отпиранием водительской двери и пассажирских дверей
Функция бесшумного режима тревоги
Возможность ручного и автоматического включения режима “Турбо”
Постановка системы в режим охраны с раздельным отключением зон датчиков
Бесшумная постановка и снятие системы с охраны
Сервисный режим Valet/дистанционный режим Valet/предупреждение о включенном режиме Valet
Усовершенствованный дистанционный режим “Паника”
Функция поиска автомобиля
Функция вызова владельца автомобиля
6 независимых зон охраны
Память на 2 последних срабатывания системы с указанием зоны/триггера
Предупреждение о разряде батарейки брелока-передатчика
Обход неисправной зоны при постановке на охрану с указанием зоны/триггера
Восстановление заводских настроек программируемых функций системы

Программируемые функции:
Пассивная постановка на охрану с запиранием или без запирания дверей
Режим пассивной блокировки двигателя
Автоматическое отпирание/запирание дверей при выключении/включении зажигания
Автоматическая повторная постановка на охрану с запиранием и без запирания дверей
Возможность автоматического запирания дверей по датчику скорости
Функция защиты от ложных срабатываний системы FAPC
Отключение охраны в 2 этапа
Дистанционное или автоматическое включение режима Anti-Hi-Jack
Активное и безопасное глушение двигателя в режиме Anti-Hi-Jack
Автоматическая разовая или регулярная проверка зоны действия брелока с двусторонней связью
Возможность охраны автомобиля с работающим двигателем
Режим работы выхода канала 2 системы: отпирание багажника, постоянный, импульсный, таймерный (30 с, 1 мин. , 3 мин.)
Задержка включения режима охраны: 3, 15, 30 или 45 секунд
Режим работы выхода канала 3 системы: постоянный, импульсный, таймерный (30 с, 1 мин., 3 мин., 5 мин.)
Выбираемая длительность импульса управления замками дверей и режимом “Комфорт”

Новое. Сигнализации, предпусковые подогреватели на интернет-аукционе Au.ru

Оригинальный брелок с ж/к экраном и двусторонней связью Pantera

Точно подходит для автосигнализаций:

Pantera SLK-868RS

Pantera SLK-468

Alligator D-1100RSG

Alligator D-1000RSG

а также к их копиям и модификациям.

Новый. Гарантия.

Возможна бесплатная доставка.

Возможна круглосуточная продажа и подключение.

Отправляем в другие регионы.

Есть любые другие брелоки, метки автосигнализаций и автоключи, оригинальные и аналоги, основные и дополнительные, новые и б/у,

а также запчасти для их ремонта,

смотрите среди моих лотов: au.ru/u-Олег2813814/

  • Производителем могут быть изменены: цена, комплект поставки, страна производства без предварительного уведомления, вследствие чего на момент продажи конкретного товара они могут отличаться от указанных.
  • Наличие товара или возможность продажи под заказ уточняйте у менеджера.
  • Не нашли интересующую вещь?
  • Пишите в сообщениях, что надо, есть очень много не выставленного товара
  • Покупаем брелоки автосигнализаций в любом состоянии, интересуют даже запчасти.

8-923-354-12-51 / 8-902-923-32-02 Перед звонком и покупкой ВНИМАТЕЛЬНО ЧИТАЕМ ОПИСАНИЕ ТОВАРА и УСЛОВИЯ ПЕРЕДАЧИ! ПРОШУ ЦЕНИТЬ своё и моё ВРЕМЯ! 1. ВСЁ ОБГОВАРИВАЕМ ИНДИВИДУАЛЬНО, ДО ПОКУПКИ ЛОТА: НАЛИЧИЕ / ПОД ЗАКАЗ, технические характеристики, возможность тест-драйва, подключения, сроки выкупа, резервирования, адреса самовывоза, дату, время доставки, сроки гарантии, обмена, возврата и т.д. по телефону 2. Покупка лота подразумевает, что покупатель знает, понимает, что он покупает, и для чего ему это нужно. Возможности возврата по причине "Я ДУМАЛ ПОДОЙДЁТ", - НЕТ!, если это не обговорено заранее 3. Купленный, технически сложный товар надлежащего качества входит в список исключения. Соответственно возврату и обмену не подлежит по закону "О правах потребителей" Оплата: нал, безнал, электронные деньги. Купленный лот, после подтверждения наличия, можно забрать круглосуточно, без выходных в Красноярске, в мкрн. Северный, ПО ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ДОГОВОРЕННОСТИ.. Я НЕ СИЖУ И НИКОГО НЕ ЖДУ! Собственный установочный и сервисный центр, служба доставки.

Красноярск, Северный

Увеличить карту

Поделиться этим лотом:

Как привязать брелок к сигнализации Пантера: прописать, настроить пульт

Противоугонная система Пантера пользуется большой популярностью среди владельцев автомобилей. Она обладает большими функциональными возможностями, имеет различные комплектации, различающихся по цене и количеству выполняемых задач.

Обладатель охранной системы Пантера может прописать в памяти до четырёх пультов одновременно, делая её использование ещё комфортнее, эффективнее. Как привязать брелок к сигнализации Пантера рассмотрим далее.

Содержание

  1. Как прописать брелок Pantera с обратной связью
  2. Инструкция по настройке пультов с функцией автозапуска
  3. Запись пейджеров автосигнализации с односторонней связью
  4. Прошивка и перезагрузка пульта Pantera XS-110
  5. Особенности сигнализации CLK 355 375 455
  6. Порядок для активации коммутаторов SLK-35SC
  7. Отличия адаптирования пейджеров SLK-75SC и SLK500
  8. Как выставить время на брелке Пантера
  9. Видео инструкция



Смотрите как узнать модель сигнализации Пантера по брелку.

Как прописать брелок Pantera с обратной связью

К моделям с 2-х сторонней связью относятся: SPX-1, PR-1, SLK-468, SLR-5625RC, QX-270. В память сигнализации можно записать коды четырёх пультов дистанционного управления. Выключите режим охраны и выполняйте следующие пункты.

  1. Активируйте зажигание.
  2. На шесть сек. зажмите сервисную клавишу. Прозвучат четыре ЧИРПа.
  3. Нажмите одновременно и удерживайте кнопки «Открытие багажника», «AUX» до одного срабатывания сирены. Для записи пульта без дисплея используйте клавиши «Открытие багажника», «Динамик».
  4. Повторите предыдущее действие для оставшихся коммутаторов. Запоминание соответствующего брелока сопровождается таким же количеством звуковых сигналов.
  5. Если в течение шести секунд не последует никаких действий, то блок управления выйдет из режима записи.
  6. Выключите зажигание.

Инструкция по настройке пультов с функцией автозапуска

В линейку сигнализации Пантера с автозапуском входят следующие модели: SLK-635RS, SPX-2RS, SLK-675RS, PR-2, SLK-650RS, LX-320, SLK-775RS two way, SLK-868RS, СЛК 625RS. Вы можете записать коды четырёх дистанционных устройств: два 5-ти кнопочных и столько же 4-ёх кнопочных.

При прописывании новых или дополнительных брелоков, коды старых будут удалены из памяти системы. На каждую операцию у вас есть пятнадцать сек. Если превысите время, блок управления выйдет из режима программирования. Также, выключение зажигания при записи кодов пультов приведёт к выходу из привязки. Последует один короткий и продолжительный писки сирены.

Для настройки пультов с автозапуском выполняйте инструкции.

  1. Выключите режим охраны, сядьте в машину.
  2. Если для входа в программирование требуется ввод персонального кода, то выполните следующее:
    • Включите, выключите и сразу же активируйте зажигание.
    • В течение отведённого времени (пятнадцать секунд) нажмите клавишу «Валет». Количество нажатий — первая цифра кода.
    • Таким же способом введите второе значение секретного пароля.
  3. За пятнадцать секунд нажмите «Валет» трижды. Система издаст короткий сигнал сирены, светодиод медленно замигает. Вы можете вводить данные первого брелока.
  4. Кликните кнопку главного передатчика. Прозвучит длинный сигнал сирены, подтверждающий окончание программирования первого устройства.
  5. Произведите запись оставшихся пультов.
  6. Выход из режима привязки осуществляется выключением зажигания или же по истечении пятнадцати секунд. Последует короткий и один продолжительный ЧИРП.


Узнайте, что делать если сигнализация Пантера не реагирует на брелок.

Запись пейджеров автосигнализации с односторонней связью

Охранная система Пантера представлена моделями с односторонней связью: CL-500, QX-44, CL-700, СЛ-600, XS2500, CL-550, SLK-25SC. Привязка пультов этих моделей к системе производится по алгоритму.

  1. На проведение каждой операции отводится пятнадцать секунд.
  2. Включите режим «Снято с охраны». Сядьте в машину.
  3. Активируйте, деактивируйте, вновь включите зажигание.
  4. В отведённое время (15 с) нажмите на кнопку «Валет» три раза. Система издаст один короткий сигнал сирены. Светодиод замигает медленно. Сигналка готова к записи пультов.
  5. Нажмите и удерживайте клавишу «Закрытый замок» до длинного писка сирены. Светодиод будет гореть постоянно, пока вы держите нажатой кнопку.
  6. Отпустите клавишу «Закрытый замок». Светодиод медленно замигает. Система готова к записи следующего коммутатора.
  7. Пропишите оставшиеся датчики в памяти охранного комплекса.
  8. Для выхода из записи выключите зажигание.

Прошивка и перезагрузка пульта Pantera XS-110

Вами была произведена замена неработающего пейджера Пантера ХС 110 на новый. Как его правильно подключит к системе?

  1. Снимите машину с охраны.
  2. Включите, затем сразу же выключите зажигание.
  3. Следующий шаг проделайте за пять секунд. Нажмите на клавишу «Валет» 5 раз.
  4. Прозвучит 5 ЧИРПов, световые приборы загорятся пять раз. Включился режим программирования.
  5. Это шаг выполните за десять сек. Нажмите на левую клавишу первого устройства. Последует одиночный звук сирены.
  6. Тоже действие проделайте и с остальными передатчиками. Сирена будет подавать соответствующее количество сигналов.
  7. После введения кода четвёртого пульта или выключения зажигания система выйдет из записи. Прозвучат 5 писков сирены, габариты мигнут пять раз.

Особенности сигнализации CLK 355 375 455

Это бюджетные модели сигнализации марки Pantera. Для записи брелоков выполните следующее.

  1. Снимите режим охраны.
  2. В течение пяти секунд включите и выключите зажигание.
  3. Нажмите на клавишу «валет» три раза. Сделайте это за пять секунд. Прозвучит один продолжительный сигнал сирены.
  4. Активируйте зажигание. Последует 1 короткий и длинный ЧИРПы. Светодиод медленно замигает. Система готова к программированию.
  5. За десять секунд кликните по любой клавише на первом брелоке. Система издаст один длинный сигнал. Код главного пейджера внесён в память. Светодиод загорится постоянно.
  6. Проведите такие же действия с оставшимися пультами.
  7. После введения данных четвёртого брелока блок управления выйдет из режима записи. Последует короткий и один длинный звуки сирены.

Порядок для активации коммутаторов SLK-35SC

В передатчиках охранной системы используется динамический код. В некоторых ситуациях происходит рассинхронизация кодов пульта и блока управления. Для того. Чтобы исправить обстановку.

  1. Подойдите к автомобилю.
  2. Кликните два раза клавишу на передатчике. Синхронизация восстановится. Коммутатором можно пользоваться.

Инструкция универсальна, подходит для программирования брелоков SLK-100SC, СЛК 4I, SLK-200SC, СЛК 7I, SLK-5I.

Узнайте как прописать брелок Pandora DXL 3000.

Отличия адаптирования пейджеров SLK-75 SC и SLK500

Запрограммировать 85SC, 755RS вы можете по следующей инструкции.

  1. Память блока управления хранит коды четырёх брелоков.
  2. На каждую операцию вам отводится пятнадцать сек.
  3. Снимите машину с охраны, сядьте в неё.
  4. В отведённое время (15 с) трижды нажмите кнопку «Валет». Прозвучит короткий сигнал сирены. Светодиод начнёт медленно мигать. Система готова к записи кодов пультов.
  5. Нажмите кнопку на первом брелоке. Прозвучит длинный ЧИРП. Синхронизация коммуникатора завершена.
  6. По такому же алгоритму запрограммируйте оставшиеся передатчики.
  7. Чтобы выйти из режима записи выключите зажигание или не совершайте никаких действий в течение пятнадцати секунд.

Как выставить время на брелке Пантера

Правильные показания текущего времени на экране пульта очень важны. Ведь по часам включаются и отключаются важнейшие функции: автозапуск по времени, турботаймер, др. Правильно настроить часы поможет следующая инструкция.

  1. Для входа в режим настройки зажмите клавишу F на пять сек.
  2. Брелок издаст два коротких сигнала.
  3. На экране замигают данные циферблата.
  4. Кнопкой «Открытие багажника» увеличиваем значение часов. Клавишей «Звёздочка» уменьшаем показания.
  5. Для того чтобы установить минуты коротко нажимаем клавишу F.
  6. Кликаньем «Открытие багажника» повышаем значение минут. Кнопкой «Звёздочка» понижаем.
  7. Зажмите F на пять секунд для выхода из режима настройки времени.

Видео



Смотрите, как делается программирование брелка Сенмакс.

Как брелок привязать к сигнализации пантера

В этой статье автоэлектрик Алексей Молотов отвечает на вопрос «Как брелок привязать к сигнализации пантера?».

Противоугонная система Пантера пользуется большой популярностью среди владельцев автомобилей. Она обладает большими функциональными возможностями, имеет различные комплектации, различающихся по цене и количеству выполняемых задач.

Обладатель охранной системы Пантера может прописать в памяти до четырёх пультов одновременно, делая её использование ещё комфортнее, эффективнее. Как привязать брелок к сигнализации Пантера рассмотрим далее.

Как прописать брелок Pantera с обратной связью

К моделям с 2-х сторонней связью относятся: SPX-1, PR-1, SLK-468, SLR-5625RC, QX-270. В память сигнализации можно записать коды четырёх пультов дистанционного управления. Выключите режим охраны и выполняйте следующие пункты.

Инструкция по настройке пультов с функцией автозапуска

В линейку сигнализации Пантера с автозапуском входят следующие модели: SLK-635RS, SPX-2RS, SLK-675RS, PR-2, SLK-650RS, LX-320, SLK-775RS two way, SLK-868RS, СЛК 625RS. Вы можете записать коды четырёх дистанционных устройств: два 5-ти кнопочных и столько же 4-ёх кнопочных.

При прописывании новых или дополнительных брелоков, коды старых будут удалены из памяти системы. На каждую операцию у вас есть пятнадцать сек. Если превысите время, блок управления выйдет из режима программирования. Также, выключение зажигания при записи кодов пультов приведёт к выходу из привязки. Последует один короткий и продолжительный писки сирены.

Для настройки пультов с автозапуском выполняйте инструкции.

Запись пейджеров автосигнализации с односторонней связью

Охранная система Пантера представлена моделями с односторонней связью: CL-500, QX-44, CL-700, СЛ-600, XS2500, CL-550, SLK-25SC. Привязка пультов этих моделей к системе производится по алгоритму.

Прошивка и перезагрузка пульта Pantera XS-110

Вами была произведена замена неработающего пейджера Пантера ХС 110 на новый. Как его правильно подключит к системе?

Особенности сигнализации CLK 355 375 455

Это бюджетные модели сигнализации марки Pantera. Для записи брелоков выполните следующее.

Порядок для активации коммутаторов SLK-35SC

В передатчиках охранной системы используется динамический код. В некоторых ситуациях происходит рассинхронизация кодов пульта и блока управления. Для того. Чтобы исправить обстановку.

  1. Подойдите к автомобилю.
  2. Кликните два раза клавишу на передатчике. Синхронизация восстановится. Коммутатором можно пользоваться.

Инструкция универсальна, подходит для программирования брелоков SLK-100SC, СЛК 4I, SLK-200SC, СЛК 7I, SLK-5I.

Отличия адаптирования пейджеров SLK-75 SC и SLK500

Запрограммировать 85SC, 755RS вы можете по следующей инструкции.

Как выставить время на брелке Пантера

Правильные показания текущего времени на экране пульта очень важны. Ведь по часам включаются и отключаются важнейшие функции: автозапуск по времени, турботаймер, др. Правильно настроить часы поможет следующая инструкция.

Имеется два таких брелка, тот что черный, сейчас работает, а тот что белый, нет, можно как то подключить что бы работал белый брелок?

Была такая, по наследству перешла. Глюкавая как Виндовсзсука.Выкинул эту недосигу и поставил другую (тоже бюджетную) 🙂 Но поставил как всегда по-своему, правильно, разнеся блоки по всей машине, расплетая заводские косы, пряча провода. Подключил все функции примерно на 80%. И хрен теперь определишь, куда и что и где :))) Паранойя…

Конечно можно прописать, если данный брелок совместим с данной сигой. У меня сига Томагавк, аж с покупки машины стоит, 2008 г.в. так три года назад, сдох брелок с обратной связью, естественно новых таких уже нигде не найти, но я в инете нашел таблицу совместимости моей сигналки и брелков, заказал на АлиЭкспресс нужный мне брелок( так как разница аж 1к р.если брать у нас в магазине, а то и дороже), от Томагавк новой модели, скачал инструкцию так же с инета о привязки брелка и все сделал за минут 15 возле дома сам)


Сбой в работе автосигнализации или возникновение проблем с брелком, например, его пропажа или повреждение приводят к необходимости привязать новый передатчик.

Каждая охранная система поддерживает несколько брелков, обычно не превышающее 4-5 устройств. Поэтому необходимость прошивки нового передатчика может возникнуть и по причине расширения количества подключаемых устройств. Последовательность действий при программировании автосигнализации зависит от модели охранной системы.

Особенности программирования Pantera clk 355

Для того, что бы прописать брелок Pantera clk 355 необходимо выполнить следующую последовательность:

  • Снять режим охраны.
  • На протяжении пяти секунд выключить зажигание.
  • Во время пятисекундного временного интервала трижды нажать кнопку Valet.
  • Дождаться длинного сигнала сирены.
  • Включить зажигание. Сирена должна подать короткий и длинный сигнал. СИД начнет мигать.
  • В течении 10 секунд нажать любую кнопку на брелке. Длительный сигнал сирены сообщит об успешной привязке передатчика.
  • Подобным образом привязать остальные устройства, количество которых не должно превышать четырех.

Аналогичное подключение брелков имеют охранные системы Pantera clk 375 и clk 455.

Привязка Pantera SLK-625RS

Для программирования брелков сигнализации Pantera SLK-625RS необходимо соблюдать следующую последовательность:

  • Отключить охрану железного коня.
  • В течении 15 секунд нажать трижды Valet.
  • После того как СИД начнет медленно мигать требуется нажать любую клавишу на брелке.
  • После сигнала сирены аналогично запрограммировать остальные устройства.

Особенности прошивки Pantera SLK-35SC

Для того, что бы привязать брелки в охранной системе Pantera SLK-35SC необходимо выполнить следующие действия:

  • Снять систему с охраны.
  • Повернуть ключ в замке зажигания для его включения.
  • Трижды нажать кнопку Valet. Дождаться двух сигналов сирены и мигания СИД.
  • Выбрать на свое усмотрение клавишу управления каналом 1. Значения по умолчанию находятся в нижеприведенной таблице.

  • Зажать выбранную кнопку.
  • Длинный сигнал сирены подтвердит привязку канала 1. Дальнейшее определение соотношения клавиш и каналов произойдет в автоматическом режиме.
  • По завершению прошивки нажать кнопку Valet или выключить зажигание. Автоматический выход из режима привязки произойдет по истечении 15 секунд.

Программирование Pantera SLK-75SC

Для того, что бы запрограммировать Pantera SLK-75SC необходимо выполнить инструкцию:

  • Снять систему с охраны.
  • Включить зажигание.
  • Нажать кнопку Valet количество раз соответствующее выбору желаемого режима в нижеприведенной таблице.

Особенности привязки Pantera SLK500

Отличие есть только в выборе режима, доступных для активации автовладельцем. Охранная система дает выбор из четырех возможных вариантов, приведенных в таблице ниже.

Активация рецептора клетки

B преимущественно регулирует субстраты AKT-mTORC1 / 2, функционально связанные с процессингом РНК

Abstract

Протеинкиназа B (AKT) фосфорилирует многочисленные субстраты на консенсусном мотиве RXRXXpS / T, стыковочном сайте для взаимодействий 14-3-3. Чтобы идентифицировать новые события фосфорилирования, вызванные AKT, после активации B-клеточного рецептора (BCR), мы провели протеомный, биохимический и биоинформатический анализы. Обогащение антител, специфичных к фосфорилированному консенсусному мотиву, с последующей тандемной масс-спектрометрией идентифицировало 446 белков, содержащих 186 новых событий фосфорилирования.Более того, мы обнаружили 85 белков с повышенным уровнем фосфорилирования, тогда как у 277 белков уровень фосфорилирования снижался после стимуляции. Повышающая регуляция в основном связана с белками, участвующими в рибосомной и трансляционной регуляции, связывании ДНК и регуляции транскрипции. Напротив, отрицательная регуляция была предпочтительно в связывании РНК, сплайсинге мРНК и экспортных белках мРНП. Иммуноблоттинг двух идентифицированных регуляторных белков РНК, RBM25 и MEF-2D, подтвердил данные протеомики. В соответствии с этими данными, ингибитор AKT (MK-2206) резко снижается, в то время как ингибитор mTORC PP242 полностью блокирует фосфорилирование мотива RXRXXpS / T.Это демонстрирует, что этот мотив, ранее предполагавшийся как последовательность-мишень AKT, также является субстратом для mTORC1 / 2. Белки с доменами PDZ, PH и / или Sh4 содержали консенсусный мотив, тогда как в белках с HMG-боксом, доменами h25 и / или NF-X1-цинковыми пальцами мотив отсутствовал. Белки, несущие консенсусный мотив, были обнаружены во всех кладах эукариот, что указывает на то, что они регулируют филогенетически консервативный набор белков.

Образец цитирования: Mohammad DK, Ali RH, Turunen JJ, Nore BF, Smith CIE (2016) Активация рецептора B-клеток преимущественно регулирует субстраты AKT-mTORC1 / 2, функционально связанные с процессингом РНК. PLoS ONE 11 (8): e0160255. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255

Редактор: Конг Цао, Университет Сучжоу, КИТАЙ

Поступила: 27 мая 2016 г .; Дата принятия: 16 июля 2016 г .; Опубликовано: 3 августа 2016 г.

Авторские права: © 2016 Mohammad et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: D.K.M. благодарит Министерство высшего образования и научных исследований в Региональном правительстве Курдистана (ERBIL-Ирак) за финансовую поддержку. J. J.T. был поддержан постдокторскими грантами Фонда Сигрид Джуселиус и Оск. Фонд Хуттунена. Шведское онкологическое общество, Шведский исследовательский совет, Совет графства Стокгольм (исследовательский грант ALF) и грант Европейского совета FP7 EURO-PADnet также поддержали эту работу.B.F.N. благодарит Erik Edith Fernström Stiftelse за финансирование поездки и сотрудничество с больницей Mount Sinai, Торонто, Канада. Дополнительная поддержка B.F.N. был от CRDF Global (США).

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Протеинкиназа B (PKB), также известная как (AKT), представляет собой серин / треониновые киназы, принадлежащие к семейству протеинкиназ AGC. AKT важен для многих путей передачи сигналов, регулируя множественные клеточные процессы, такие как гомеостаз глюкозы, транскрипцию, апоптоз, пролиферацию клеток, ангиогенез и подвижность клеток [1–3].Образование фосфатидилинозитол (3,4,5) -трифосфата (PIP3) после активации PI3-киназы (PI3K) приводит к привлечению AKT к плазматической мембране и, следовательно, к его активации [4]. AKT фосфорилирует белки, содержащие консенсусный мотив RXRXXS / T, который при фосфорилировании служит стыковочным сайтом 14-3-3 [5]. Среди белков, содержащих мотив RXRXXS / T, присутствуют ADAM2 млекопитающих (дезинтегрин и металлопротеиназа 2), Mdm2 (двойная мышь, минута 2), TBC1D4, FOXO1-3, BAD и BTK, которые фосфорилируются до 14-3-3. взаимодействия [6,7].Следовательно, существует тесное сотрудничество между AKT и белками 14-3-3 в регуляции передачи сигнала.

Хотя известно, что множество белков фосфорилируется по консенсусной последовательности RXRXXS / T [8], идентификация более полного протеома, нацеленного на AKT, является предпосылкой для понимания того, как клетки контролируют сложную и согласованную биологическую активность посредством активации AKT. Фосфорилирование AKT по обоим остаткам Thr 308 и Ser 473 с помощью PDK1 и mTORC2, соответственно, необходимо для полной каталитической активности [9].Фосфорилирование AKT имеет различные последствия для белков-мишеней, такие как блокирование или индукция ферментативной активности, изменение субклеточной локализации или изменение стабильности (обмен белков), включая взаимодействия с белками 14-3-3 [10,11]. С другой стороны, было показано, что определенные протеинфосфатазы действуют как негативные регуляторы AKT, такие как фосфатазы PTEN, SHIP и PHLPP [12–14]. Кроме того, AKT выполняет переходную роль между двумя комплексами, mTORC1 и mTORC2. Действительно, AKT может действовать прямо или косвенно, чтобы включить mTORC1, что приводит к последующей активации рибосомной S6-киназы-1 (S6K-1) и 4E-связывающего белка-1 (4EBP-1) [15].Напротив, известно, что mTORC2 является вышестоящим регулятором активации киназы AKT [16]. Фактически, AKT играет центральную роль во взаимодействии между многими клеточными сигнальными процессами, а также действует как протоонкоген, который может способствовать развитию или прогрессированию различных форм рака человека [17,18]. Таким образом, передача сигналов PI3K / AKT / mTOR играет центральную роль в онкогенезе. Следовательно, эти белки являются привлекательными мишенями для разработки лекарств против рака. Примечательно, что ингибиторы AKT и mTORC 2 в настоящее время проходят клинические испытания, такие как недавно идентифицированный ингибитор MK-2206 [19,20] и ингибитор PP242 [21].

Настоящее исследование направлено на определение новых белков-мишеней AKT, которые содержат консенсусные мотивы AKT, и на то, регулирует ли фосфорилирование AKT-mTORC1 / 2 их клеточную функцию. Для исследования идентичности комплексов взаимодействия белок-белок использовали крупномасштабное иммуноаффинное обогащение с последующим масс-спектрометрическим анализом. Для проверки нашей методологии два целевых консенсусных белка AKT (MEF-2D и RBM25) были положительно проверены на фосфорилирование с помощью иммуноблоттинга.Неожиданно мы обнаружили, что хотя фосфорилирование целевого мотива AKT действительно зависело от AKT в некоторых случаях, это не всегда было правдой. Кроме того, это подчеркивает важность проверки отдельных киназ, ответственных за фосфорилирование конкретных целевых последовательностей в различных белках.

В этой работе мы идентифицировали ряд нижестоящих сигнальных белков в различных биологических путях. Интересно, что мы идентифицировали множество белков, проявляющих родственную функциональную активность. Наши результаты служат отправной точкой для скрининга и определения диапазона целевых белков AKT-mTORC1 / 2, которые контролируют определенные внутриклеточные функции. Такие подходы необходимы для расшифровки молекулярных механизмов, управляющих всем спектром заболеваний человека, в которых передача сигналов AKT-mTORC1 / 2 играет решающую роль.

Материалы и методы

Клеточные линии, реагенты и трансфекция

Линия В-клеток человека Namalwa, линия В-клеток мыши А20 и клетки Cos-7, полученные из фибробластов, были получены из Американской коллекции типовых культур (АТСС).Клетки Cos-7 культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS) от (Life technologies). Гемопоэтические клетки культивировали в среде RPMI1640 с добавками. Все клетки культивировали при 37 ° C с увлажненным 5% CO 2 . Для анализа белка используются полные мини-таблетки без ЭДТА (Roche), коктейль ингибиторов фосфатаз (Sigma-Aldrich), протеин-G-сефароза 4Fast Flow и протеин-A-сефароза CL-B4 (GE Health -care), Dynabeads (Life technologies) были использованы. Все остальные химические вещества / реагенты были получены от (Sigma-Aldrich). SDS-PAGE (4–12% гели Bis-Tris) и нитроцеллюлозные мембраны системы сухого блоттинга iBlott были приобретены у (Life technologies). BV02 был приобретен у (Millipore). MK-2206, PP242 и рапамицин были получены от (Selleckchem Chemicals), Bay-61, LY294002 и GF10-9203X были приобретены от (Sigma-Aldrich). Временные трансфекции выполняли в 6-луночных планшетах с использованием полиэтиленимина (PEI) от (Polysciences Inc.) в соответствии с протоколом производителя.

Антитела

В данной работе использовались следующие антитела: Anti-14-3-3 ζ (1: 2000), анти-Pan 14-3-3 (1: 2000), анти-MEF-2D (1: 1000), анти-RBM25 (1: 1000), анти-Bcl-x (1: 1000), анти-pERK (44/42) (1: 1000) и анти-ERK (1: 1000) были приобретены в Санта-Крус. Биотехнология; антиактин (1: 100 000) от Sigma Aldrich; анти-RXRXXpS / T (1: 1000) и анти-pS660 PKC β II (1: 1000) из клеточной передачи сигналов; анти-pS473-AKT (1: 5000) от R&D, анти-Pan-AKT (1: 4000) был приобретен у Invitrogen, а козий F (ab ’) 2 против человеческого IgM от Southern Biotech. Поликлональные кроличьи антитела против домена BTK-Sh4 описаны ранее [22].

Иммунопреципитация и иммуноблоттинг

Анализ иммунопреципитации проводили с использованием белка G Dynabeads (Life Technologies) в соответствии с протоколом производителя. Лизаты клеток получали после двукратной промывки клеток в PBS путем инкубации с буфером для лизиса (50 мМ Hepes, pH 7,0, 120 мМ NaCl, 10% глицерин, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолат натрия) с добавлением ингибиторов протеаз (Полная Mini, Roche) в течение 30 мин с повторным встряхиванием и лизаты очищали центрифугированием.Белки разделяли на градиентных 4–12% гелях SDS Bis-Tris NuPAGE (Life technologies) и переносили на нитроцеллюлозные мембраны с помощью системы Iblot (Life technologies). Затем мембраны блокировали блокирующим буфером LI-COR (LI-COR Biosciences GmbH) и зондировали специфическими первичными антителами. Мембраны сканировали с помощью инфракрасной системы визуализации Odyssey (LI-COR Biosciences GmbH). Плотность целевых полос была количественно определена с использованием прикладного программного обеспечения системы инфракрасной визуализации Odyssey. Следующие вторичные антитела: козьи антимышиные-800CW, козьи против кроличьих-800CW, козьи против мышиных-680LT или козьи против кроличьих-680 (LI-COR Biosciences GmbH) использовали в разведениях 1:20 000 в течение 1 часа. при комнатной температуре.

Масштабная иммуноаффинная очистка предполагаемых субстратов AKT, несущих фосфорилированный консенсусный мотив, для протеомного анализа

Для идентификации новых комплексов субстратов AKT мы использовали антитело с мотивом RXRXXpS / T для иммуноаффинной очистки белков из клеток Namalwa.Белки улавливали на Dynabeads, покрытых анти-RXRXXpS / T, элюировали, лиофилизировали и готовили для анализа МС / МС без геля. Детали подготовки к масс-спектрометрическому анализу описаны ранее [7]. Данные протеомики состояли из 446 белков в общей сложности, и для каждого белка мы вычислили соотношение активированных и (голодных + 1) как для эксперимента 1, так и для эксперимента 2, где 1 добавляли к голодным в качестве псевдосчета, чтобы избежать бесконечности в случае 0. Затем мы вычислили среднее значение этого отношения из обоих экспериментов.Если среднее значение меньше 1, уровень белков снижается; если больше 1, регулируется вверх, а если равно 1, то не меняется.

Биоинформатический анализ

Протеомическая идентификация белков, содержащих мотив RXRXXpS / T.

446 идентификаторов белков, полученных с помощью MS / MS, были предоставлены инструменту BioMart в Ensembl v. 71 [23], и были получены последовательности белков для этих идентификаторов. Анализ белков, содержащих мотивы RXRXXS / T с функциональной корреляцией с их соответствующими генами, был выполнен с использованием специального сценария, написанного на Java.Чтобы уменьшить избыточность количества мотивов в одном и том же положении, мы оставили только один из тех мотивов-мишеней, которые находились на расстоянии 6 аминокислот от наиболее N-концевой области.

Классификация доменов для идентифицированных белков по данным протеомики.

Белковые последовательности, извлеченные на предыдущем этапе, были отправлены в базу данных консервативных доменов (CDD) [24], а группировка доменов суперсемейства была получена для всех белков с помощью инструмента поиска архитектуры консервативных доменов (CDART) [25]. Впоследствии белки были разделены на белки, содержащие мотив RXRXXpS / T, и белки, лишенные этого мотива, и профиль суперсемейства доменов был создан для обеих групп. Суперсемейство доменов допускает большее разнообразие внутри семейства доменов, облегчая поиск согласованных последовательностей в базах данных. Отображение белка в домен сохранялось для расчета статистики.

Анализ функционального и белок-белкового взаимодействия.

Функциональный анализ белков, содержащих мотивы, был выполнен с использованием системы классификации Protein Analysis Through Evolutionary Relationships (PANTHER) [26], чтобы классифицировать белки на основе их внутриклеточных функций.Данные белок-белкового взаимодействия и графики были созданы с использованием инструмента базы данных STRING (Инструмент поиска для поиска взаимодействующих генов / белков) [27]. Высокая и строгая достоверность взаимодействия 0,7 балла была применена для обеспечения большей вероятности положительных совпадений на основе прогнозируемого анализа базы данных [28].

Анализ гомологии белков, содержащих целевой мотив AKT.

База данных таксономии NCBI [29] использовалась для определения полного происхождения каждого вида. Выявлены эволюционно важные клады и подклады у эукариот: e.грамм. приматы, грызуны и четвероногие ходячие млекопитающие были определены как важные субклады в кладе Mammalia. Затем были отобраны первые модельные организмы с хорошо секвенированными геномами, представляющие кладу / субкладу. Если протеом модельного организма недоступен, в качестве представителя был выбран вид, известный своими хорошо секвенированными геномами, принадлежащими кладе / субкладе. В результате получено 68 видов, представляющих различные клады и субклады. Инструмент Biomart был использован для извлечения полного протеома каждого вида, представляющего различные клады, из разных баз данных Ensembl [30] (клады Fungi из Ensembl Fungi Release 21, клады Protists из Ensembl Protists Release 21, беспозвоночные из Ensembl Metazoa Release 21, клады Viridiplantae из Ensembl Plants Release 21 и позвоночные из Ensembl версии 78). Самая длинная изоформа была использована для представления гена с более чем одним белковым продуктом. Все против All Blast (для белков), доступный в GenFamClust [31], был использован для вывода гомологов у других видов с использованием белков 186 Homo sapiens в качестве исходных последовательностей, а значение е 10 −10 было использовано в качестве порогового сделать вывод о гомологии. Все повторяющиеся попадания для определенного вида и белка были удалены (т. Е. Если белок Homo sapiens имеет два взрыва в одном и том же виде, мы удалили попадание с более низким значением е, но (точно) одно попадание, если оно существует, на вид для белка сохраняется).Затем количество белков, содержащих мотив, подсчитывали в каждом виде, создавая таблицу из 186 значений, например, Homo sapiens содержит все 186 белков, содержащих мотив AKT, а другие виды имеют равное или меньшее количество белков, содержащих гомологичный мотив. TimeTree [32] (время расхождения, предложенное «Экспертом») использовалось для получения расстояний между видами и топологии дерева видов. Археоптерикс в Forester [33] версии 1038 использовался для построения дерева видов и для анализа гомологии наряду с важными эволюционными кладами и субкладами.База данных NCBI Taxonomy и база данных TimeTree использовались для вывода топологии этого дерева видов. Выбор клад был основан на важных событиях в истории эукариот, например, между Mammalia и Sauropsida или между Ascomycota и Basidiomycota и т. Д.

Статистический анализ

SPSS 20 (SPSS Inc.) использовали для анализа данных. Среднее значение и стандартное отклонение регистрировали для каждой группы после 72 часов обработки PP242 как в клетках Namalwa, так и в клетках A20. Односторонний дисперсионный анализ был использован для сравнения результатов между группами, а тест Дункана был проведен для сравнения наборов средних значений в разных группах.Р ≤ 0,01 считали достоверным.

Результаты

Идентификация новых партнеров, взаимодействующих с консенсусным мотивом AKT (RXRXXS / T) в клетках Намалва

В настоящем исследовании использовалась иммуноаффинная очистка для обогащения посттрансляционно модифицированных (RXRXXpS / T) мишеней для идентификации всего спектра известных и новых взаимодействующих белков, чтобы найти новые нижестоящие пути передачи сигналов, которые отвечают на активацию AKT. Образцы выделяли из клеток Namalwa в двух условиях: i.е. либо при голодании, либо после активации F (ab ’) 2 анти-IgM из независимых экспериментов. Протеомный анализ этих очищенных фракций проводили с использованием тандемной масс-спектрометрии (МС / МС). Результаты были рассчитаны на основе баллов Mascot как индикативные совпадения для новых субстратных белков AKT, обнаруженных в протеомных данных, полученных с помощью протеомного анализа (таблица S1). Чтобы подтвердить данные MS / MS, эндогенные белки, содержащие фосфорилированный консенсусный мотив AKT, были разделены на SDS-PAGE и иммуноблотированы с помощью антитела RXRXXpS / T-motif (фиг. 1A).Хотя отдельные белки могут демонстрировать повышенное или пониженное фосфорилирование, ясно, что обработка анти-IgM индуцировала сильное общее увеличение фосфорилирования.

Рис. 1. Фосфорилирование мотива RXRXXS / T в белках MEF-2D и RBM25.

(А). Иммунопреципитаты белков, несущих предполагаемый мотив AKT, с использованием антитела против RXRXXpS / T в клетках Namalwa до и после стимуляции анти-IgM (20 мкг / мл). В обоих экспериментах МС / МС образцы разделяли на 4–12% SDS-PAGE и затем подвергали иммуноблоттингу с соответствующими антителами.EXP1 и EXP2 представляют собой два независимых эксперимента, проведенных перед протеомным анализом. (В). Общий MEF-2D был иммунопреципитирован в клетках Namalwa. Антитело против RXRXXpS / T использовали для идентификации фосфорилирования MEF-2D. Выведенный белок идентифицировали с использованием антитела против MEF-2D. (С). Эндогенный белок RBM25 иммунопреципитировали в клетках Namalwa и исследовали на наличие фосфорилирования консенсусного сайта путем иммуноблоттинга с помощью антитела против RXRXXpS / T.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0160255.g001

Для дальнейшей проверки протеомических данных мы исследовали фосфорилирование двух белков, идентифицированных из клеток Namalwa: специфического для миоцитов фактора-энхансера 2D (MEF-2D) и РНК-связывающего белка 25 (RBM25 ). Иммунопреципитация антителами против MEF-2D и против RBM25 была выполнена, и мембрана для вестерн-блоттинга была декорирована антителом против RXRXXpS / T (фиг. 1B и 1C). Данные продемонстрировали усиленное фосфорилирование обоих белков после стимуляции F (ab ’) 2 анти-IgM, что указывает на то, что эти белки, содержащие консенсусный мотив, являются возможными мишенями для активности киназы AKT-mTORC1 / 2 (рис. 1B и 1C).Чтобы исключить какое-либо вмешательство со стороны других киназ и гарантировать специфичность AKT, был проведен анализ ингибиторов для конкретных путей (см. Следующий раздел).

AKT регулирует фосфорилирование MEF-2D и взаимодействие с 14-3-3

Предыдущее исследование показало, что взаимодействие между MEF-2D и 14-3-3 усиливает трансактивационную активность MEF-2D [34], но ничего не известно о том, как это взаимодействие регулируется. Поэтому мы стремились определить влияние активности киназы AKT на фосфорилирование MEF-2D и динамическое взаимодействие с 14-3-3.Анализ последовательности с использованием программы Scansite (http://scansite.mit.edu/) вместе с визуальным осмотром первичной последовательности MEF-2D выявил два предполагаемых AKT-связывающих мотива с консенсусной последовательностью RXRXXT / S, возможно, служащих в качестве стыковочных сайтов. для 14-3-3 взаимодействий. Один мотив расположен в MADS-боксе ( 15- RNRQVT -20 ), а другой сайт находится в домене TAD ( 512- RMRLDT -517 ) [35]. Мы стремились определить, подвержены ли эти потенциальные сайты-мишени AKT фосфорилированию и обеспечивает ли это сайт стыковки для взаимодействия 14-3-3.После кондиционирования клеток Namalwa, либо голодных, либо активированных F (ab ’) 2 против IgM человека, лизаты цельных клеток иммунопреципитировали с использованием специфических антител против MEF-2D. Интересно, что фосфоспецифическое антитело (RXRXXpS / T) было сильно реактивным на мембране иммуноблоттинга с полосой белка MEF-2D в активированных клетках, но в гораздо меньшей степени в голодных клетках, что указывает на индуцированное фосфорилирование белка MEF-2D на сайтах треонина. 20 и / или треонин-517 при стимуляции BCR (фиг. 2A, дорожка 2).

Рис. 2. Ингибитор AKT (MK-2206) ингибирует фосфорилирование MEF-2D и RBM25 в клетках Namalwa.

(А). Клетки Namalwa активировали с использованием анти-IgM (20 мкг / мл) в отсутствие или в присутствии ингибитора AKT MK-2206 (2 мкМ) или рапамицина (150 нМ) и инкубировали в течение 3 часов. Тотальные клеточные лизаты (TCL) обрабатывали для иммунопреципитации с использованием анти-MEF-2D и вестерн-блоттинга с субстратом AKT, фосфоспецифическим антителом (RXRXXpS / T) для обнаружения фосфорилирования MEF-2D. (В). Активированные клетки Намалва обрабатывали различными фармакологическими препаратами; Ингибитор AKT MK-2206 (2 мкМ), рапамицин (150 нМ), PP242 (1 мкМ) или LY294002 (20 мкМ) в течение 3 часов.Иммунопреципитированный RBM25 подвергали вестерн-блоттингу, и влияние ингибиторов на фосфорилирование RBM25 наблюдали с использованием антитела RXRXXpS / T. Контрольные образцы инкубировали с ДМСО в обеих панелях. Эффективность ингибиторов контролировали с использованием фосфоспецифических антител против pS473-AKT.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g002

Аналогичным образом, иммуноблоттинг-анализ с антителом против 14-3-3 показал усиленное взаимодействие 14-3-3 с MEF-2D в стимулированных клетках (рис. 2А переулок 2).Поскольку путь AKT индуцирует фосфорилирование серина / треонина и последующее связывание MEF-2D с 14-3-3, мы задались вопросом, повлияет ли специфическое ингибирование AKT на фосфорилирование MEF-2D и изменит ли эндогенное взаимодействие между этими двумя белками in vivo. .

Таким образом, мы использовали ингибиторы AKT (MK-2206) или mTORC1 (рапамицин), а затем выполнили анализ коиммунопреципитации (рис. 2A). Клетки Namalwa обрабатывали лекарствами в течение 3 часов, а затем готовили лизаты целых клеток и затем анализировали с помощью иммунопреципитации и иммуноблоттинга.Фосфорилирование MEF-2D по этому мотиву и взаимодействие MEF-2D с 14-3-3 были сильно снижены после обработки MK-2206 (фиг. 2A, дорожки 3 и 4), в то время как эффективность рапамицина, что неудивительно, была ниже.

mTORC1 / 2 контролирует фосфорилирование RBM25 через AKT

Чтобы подтвердить роль AKT в другом протеомном ударе, белке RBM25, мы проанализировали аминокислотную последовательность с помощью программы Scansite, а также визуально изучили первичную структуру RBM25, выделив четыре возможных мотива-мишени AKT (RXRXXS / T), которые являются расположен в центральном домене RE / RD, ( 349- RDRDRT -354 , 369- RDRERS -374 , 383- RSREKS -388 , 467- RERKKT -472 ) [36].Чтобы подтвердить функциональность этих мотивов, клетки Namalwa были активированы анти-IgM, после чего устойчивый сигнал фосфорилирования был обнаружен с помощью фосфоспецифического антитела RXRXXpS / T на белке RBM25 (фиг. 2B, дорожка 2).

Затем мы стремились идентифицировать путь, ответственный за фосфорилирование этих серин / треониновых сайтов в RBM25. Мы протестировали различные фармакологические ингибиторы против AKT (MK-2206), рапамицина (mTORC1), PP242 (mTORC1 / 2) или PI3K (LY294002). Фосфорилирование RBM25 отменялось после обработки клеток этими ингибиторами, хотя немного меньше ингибитором AKT (фиг. 2B, дорожка 3).Эти данные предполагают, что фосфорилирование RBM25 находится под контролем сигнального пути mTORC1 / 2 и в значительной степени посредством AKT. Эффект этих ингибиторов на каталитическую активность AKT был подтвержден путем зондирования мембраны с помощью антитела pS473, специфичного для фосфорилирования AKT (фиг. 2B). В совокупности эти результаты подтверждают данные тандемной масс-спектрометрии и показывают, что стимуляция В-клеток посредством BCR вызывает сильную индукцию фосфорилирования целевых субстратов AKT-mTORC1 / 2 с последующими последующими эффектами.

Ингибитор AKT (MK-2206) снижает фосфорилирование целевых белков по мотиву RXRXXpS / T, в то время как ингибитор mTORC1 / 2 устраняет это фосфорилирование

Поскольку путь PI3K / AKT индуцирует фосфорилирование серина / треонина и впоследствии увеличивает связывание с целевым белком до 14-3-3, мы задались вопросом, повлияет ли специфическое ингибирование AKT (MK-2206) на статус фосфорилирования целевых белков. Чтобы изучить механизм, мы проанализировали общую кинетику фосфорилирования белков, содержащих мотив AKT, в клетках Namalwa в различных условиях, необработанных или предварительно обработанных MK-2206 голодных и активированных анти-IgM клеток, а затем наблюдали за картиной фосфорилирования в течение 1 часа. с разными временными интервалами (от 1 мин до 60 мин).Как показано на фиг. 3A (левая панель), фосфорилирование AKT-S473 и целевого консенсусного мотива AKT продолжалось в течение всего периода стимуляции, 1 час, тогда как фосфорилирование ERK 44/42 длилось только в течение периода около 15 минут, а затем уменьшалось. . Клетки Namalwa, предварительно обработанные MK-2206, показали пониженное фосфорилирование как AKT-S473, так и AKT-мотива-мишени (RXRXXpS / T) (фиг. 3A, правая панель), в то время как фосфорилирование pERK44 / 42 было снижено лишь незначительно.

Рис. 3. Влияние MK-2206 и PP242 на фосфорилирование RXRXXS / T.

(А). Динамика активации AKT, индуцированной BCR, и ее влияние на субстраты в присутствии или в отсутствие MK-2206 (2 мкМ) в течение 3 часов. Клетки Namalwa подвергали голоданию, а затем стимулировали анти-IgM и наблюдали в течение 1 часа (1-60 мин). Лизаты разделяли на SDS-PAGE и подвергали иммуноблоттингу с различными фосфоспецифическими антителами к AKT и AKT-субстратам. (В). Статус фосфорилирования через 3 часа после обработки клеток Namalwa либо ДМСО, либо различными фармакологическими ингибиторами, MK-2206, (2 мкМ), рапамицином (150 нМ), PP242 (1 мкМ), LY294002 (20 мкМ) или PD98059 (2 мкМ).Клетки лишали сыворотки, а затем стимулировали анти-IgM (20 мкг / мл). Лизаты разделяли на 4–12% SDS-PAGE и подвергали иммуноблоттингу с различными фосфоспецифическими антителами к pS473-AKT, RXRXXpS / T и pS660-PKC. Антитело против pErk 44/42 использовали в качестве контроля.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g003

Поскольку MK-2206 не удалял полностью фосфорилирование всех целевых белков, мы задавались вопросом, находятся ли целевые белки AKT под контролем AKT. -mTORC1 / 2 путь.Поэтому мы использовали недавно разработанный ингибитор mTORC1 / 2 PP242 для предварительной обработки клеток Namalwa в течение 3 часов с последующим коротким периодом активации анти-IgM. Затем лизаты цельных клеток анализировали вестерн-блоттингом (фиг. 3B, дорожка 5). Интересно, что фосфорилирование белков-мишеней AKT было отменено в клетках, обработанных PP242, аналогично эффектам ингибитора PI3K (LY294002) (фиг. 3B, дорожка 5). Эти результаты предполагают, что mTORC1 / 2 важен для активности AKT по фосфорилированию целевых белков.Ингибитор MAPK (PD98059) не оказывал никакого эффекта в этой экспериментальной обстановке и использовался в качестве отрицательного контроля.

Ингибитор mTORC1 / 2 (PP242) подавляет рост линий клеток Namalwa и A20, регулируя Bcl-xL

Поскольку мы обнаружили, что ингибитор mTORC1 / 2 (PP242) снижает сигнал от большинства белков, фосфорилированных по мотиву-мишени RXRXXpS / T, мы хотели изучить влияние PP242 на рост B-клеточных линий Namalwa и A20. . Клетки либо оставляли необработанными, либо обрабатывали PP242 в течение 24, 48 или 72 часов.Как показано на (Фиг. 4A), пролиферация клеток была значительно (P <0,01) снижена после обработки PP242 с сохраняющимся эффектом. Однако обработка PP242 не влияла на жизнеспособность клеток любой клеточной линии (S1 фиг.).

Рис. 4. Ингибирование пролиферации клеток и восстановление Bcl-x L с помощью PP242.

(А). Клетки Namalwa и A20 обрабатывали ДМСО или PP242 (1 мкМ) и наблюдали в течение 72 часов. Был проведен тест на пролиферацию клеток и подсчитано абсолютное количество жизнеспособных клеток.Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. P <0,01 по сравнению с носителем с использованием теста Дункана. Согласно тесту Дункана, разные буквы означают, что существует значительная разница между группами (B). Клетки Namalwa обрабатывали ДМСО или другими ингибиторами; MK-2206, (2 мкМ), рапамицин (150 нМ), PP242 (1 мкМ) или LY294002 (20 мкМ) в течение 3 часов. Образцы разделяли на 4–12% SDS-PAGE и зондировали антителами против Bcl-x L или pS473-AKT. (С). Клетки Cos-7 предварительно обрабатывали PP242 (1 мкМ), рапамицином (150 нМ) или стауроспорином (1 мкМ) в течение 3 часов.вестерн-блоттинг эндогенного Bcl-x L путем окрашивания блота антителом против Bcl-x L . В этом эксперименте в качестве положительного контроля использовали стауроспорин.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g004

Для дальнейшего изучения эффектов различных ингибиторов пути AKT, ингибитора AKT (MK-2206), ингибитора mTORC1 (рапамицин), mTORC1 / Использовали 2-ингибитор (PP242) или PI3K-ингибитор (LY294002). Как показано на фиг. 4B, PP242 значительно подавляет экспрессию Bcl-x L в клетках Namalwa, в то время как MK-2206 оказывает промежуточное действие.Недавно было сообщено, что высокие уровни Bcl-x L увеличивают сигнальную активность mTORC1, которая способствует росту клеток за счет стимуляции синтеза белка [37]. Более того, аналогичные эффекты наблюдались в клетках Cos-7, обработанных PP242, в то время как рапамицин имел промежуточные эффекты (рис. 4C). Стауроспорин (фиг. 4C, дорожка 4) использовали в качестве положительного контроля.

Распределение идентифицированных белков по данным МС / МС

Функциональная категоризация белков с мотивом-мишенью AKT может быть достигнута путем визуализации распределения повышающей и понижающей регуляции фосфорилированных белков, определенного с помощью масс-спектрометрии (таблицы S1 и S2).Наши данные демонстрируют, что 42% (186) из всех (446) белков, идентифицированных по данным протеомики, содержат один или несколько мотивов-мишеней AKT, что подчеркивает разнообразие мишеней этого мотива. Интересно, что 90 белков (из 186 белков, содержащих мотив) несут несколько мотивов-мишеней AKT (рис. 5A). Это означает, что множественные мотивы могут усиливать межбелковое взаимодействие и эффективность связывания с белками 14-3-3 после активации AKT-mTORC1 / 2. Было обнаружено, что из 22 665 генов, кодирующих белок у человека [23], 5213 белков содержат по крайней мере один мотив-мишень AKT.Большинство этих белков (3904 из 5213) содержат только один мотив, в то время как есть 1309 белков, которые несут два или более мотивов (рис. 5B). Это может означать, что преимущественно одного мотива-мишени AKT наиболее вероятно достаточно для выполнения обозначенной функции в сигнальном пути, хотя функциональность большинства этих мотивов остается неуловимой. В геноме 6% всех белков содержат несколько мотивов-мишеней AKT, а 25% белков содержат один мотив. Таким образом, хотя не все мотивы, вероятно, будут функциональными, это подчеркивает потенциальную важность этого мотива в передаче сигнала.Роль активации / деактивации по отношению к этому мотиву при конкретном заболевании сегодня неизвестна и еще предстоит изучить.

Рис. 5. Распределение белков, содержащих консенсусный мотив RXRXXS / T, в данных протеомики.

Панель (A) отображает гистограмму, показывающую распределение белков, содержащих консенсусный мотив, в данных MS. 186 из 446 белков содержат по крайней мере один мотив, тогда как почти половина белков, содержащих мотив, несут два или более мотивов. Панель (B) отображает график, суммирующий присутствие и подчеркивающий важность этого мотива в протеоме человека.Часть пончика отображает общее количество кодирующих белок генов у человека (согласно Ensembl v. 71). Другие части показывают количество мотивов в протеоме человека, количество генов, содержащих мотив, и распределение мотивов в терминах генов, содержащих один или несколько мотивов. На рисунке показано, что этот мотив является обычным в протеоме человека (присутствует по крайней мере в одной изоформе каждого гена 4 th ) и обычно обнаруживается в белках, состоящих из одиночных доменов. Обратите внимание, что мы наблюдали белок, важный в альтернативном факторе сплайсинга РНК, названный повторяющейся матрицей 2 серина / аргинина (SRRM2), который содержит 103 непересекающихся экземпляра мотива RXRXXS / T.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g005

Кроме того, мы выполнили дополнительную биоинформатику масс-спектрометрии из 446 идентифицированных белков (таблицы S1 и S2). Впоследствии мы вычислили среднее отношение в наших экспериментах; в среднем <1 после стимуляции соответствует понижающему регулированию,> 1 повышающему регулированию, тогда как соотношение 1 равно неизменному (см. Материалы и методы). На основании этих расчетов было обнаружено, что 85 белков имеют повышенную, 277 белков - пониженную регуляцию, а 84 белка остаются неизменными.Из этого набора данных (таблица S1) можно сделать вывод, что более половины белков, несущих консенсусный мотив, подавляются после стимуляции BCR. Это напоминает тот факт, что больше транскриптов подвергаются понижающей регуляции, чем повышающейся после стимуляции [38], предполагая, что активированные клетки не только более ограничены в разнообразии транскриптомов, но также и в разнообразии фосфопротеома AKT-mTORC1 / 2.

Картирование доменов для идентифицированных белков по данным MS / MS

Общие структурные домены в белках подразумевают консервативные функциональные профили, хотя общая активность белка будет точно определена всеми существующими функциональными объектами.Поэтому мы исследовали доменную структуру белков-совпадений, чтобы увидеть, есть ли какие-либо различия между белками, несущими консенсус-мотив AKT, по сравнению с белками, лишенными этой последовательности. В таблице 1 показано распределение надсемейства доменов как в белках, содержащих мотив-мишень AKT, так и в белках без этого мотива. Мы обнаружили в общей сложности 65 доменов, распознаваемых в белках, содержащих мотив, принадлежащий 53 белковым хитам, в то время как 133 белка, несущие мотив, не несут какой-либо известной доменной структуры.

Таблица 1. Картирование доменов белков, идентифицированных МС / МС.

Таблица отображает доменную архитектуру 446 белков в данных MS. Архитектура доменов представлена ​​в виде общего количества доменов в 446 белках и также разделена на две части; Мотив AKT, содержащий белки, и белки, не содержащие мотив, для идентификации содержимого домена каждой части. В таблице показано наибольшее количество доменов в целом в белках, содержащих мотив AKT, и в белках, не содержащих мотив.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.t001

Более того, существует разница между белками, содержащими мотив AKT, и белками, не имеющими последовательности, с точки зрения общего содержания домена. Хотя большинство из них делятся пропорционально, домены PDZ, PH и Sh4 обнаруживаются исключительно в белках, несущих консенсусный мотив фосфорилирования AKT. Точно так же HMG-бокс, домен h25 и NF-X1-цинковые пальцы вообще не могли быть обнаружены среди белков, содержащих мотив AKT.Другими словами, белки, несущие эти три домена, не являются прямыми субстратами для активности AKT (Таблица 1). Согласно этому распределению, кажется, что мотив фосфорилирования мишени AKT мог развиться для выполнения различных форм передачи сигналов, которые полностью исключены в белках, несущих HMG-бокс, домен h25 или NF-X1-цинковые пальцы.

Аннотации биоинформатики и прогноз межбелкового взаимодействия

Используя исходные данные MS / MS, мы провели подробный биоинформатический анализ и идентифицировали по крайней мере 186 белков, содержащих мотив RXRXXS / T.Мы также наблюдали дополнительные обогащенные 260 белков, которые не содержали этот мотив. Их обогащение, вероятно, вызвано вторичными / третичными белок-белковыми взаимодействиями, вследствие того, что они были частью комплексов белков, содержащих мотив AKT-mTORC1 / 2. Более того, мы обнаружили только 85 белков, фосфорилирование которых повышалось, в то время как в 277 белках оно снижалось при стимуляции анти-IgM.

На рис. 6 показана классификация белков в соответствии с внутриклеточной функцией.Для белков с усиленной регуляцией была обогащена основная группа рибосомных белков и белков-регуляторов трансляции (37%). Другая группа, на которую, по-видимому, влияет избирательно, - это белки, регулирующие клеточный цикл, в том числе связывающие ДНК и белки факторов регуляции транскрипции (22%). Значительное количество белков участвует в связывании и процессинге РНК (21%), как показано на фиг. 6A. Фактически, самая большая группа белков, обогащенных мотивами, в фосфопротеоме, демонстрирующих пониженное регулируемое фосфорилирование, состоит из белков, связанных со связыванием РНК, сплайсингом и экспортом мРНП (53%).Вторая по величине группа - это белки с ДНК-связывающей активностью и активностью фактора транскрипции (19%). Выбранные рибосомные белки были обогащены фосфопротеинами с пониженной регуляцией (12%) (рис. 6В). Это демонстрирует, что существует динамический баланс статуса фосфорилирования этого мотива среди белков, связанных с рибосомной и трансляционной регуляцией.

Рис. 6. Функциональное распределение протеомных идентифицированных белков.

Категории были основаны на информации, предоставленной онлайн-системой классификации PANTHER для молекулярной функции как повышенных (A), так и недостаточно экспрессированных белков (B).Из рисунка можно сделать вывод, что более половины белков, идентифицированных в анализе MS / MS, участвуют в связывании РНК и регуляции трансляции недостаточно экспрессированных белков. С другой стороны, более одной трети белков, идентифицированных в анализе MS / MS, участвуют в рибосомной активности и активности регулятора трансляции.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g006

Таким образом, распределение этих белков в отношении клеточной функции указывает на то, что мотив-мишень AKT-mTORC1 / 2 является критическим регулятором различных активностей, включающих широко распространенные биологические процессы.Кроме того, база данных STRING, инструмент для прогнозирования биологических и физических взаимодействий [28], использовалась для прогнозирования предполагаемых межбелковых взаимодействий между вновь идентифицированными белками, как показано на (рис. 7 и 8). Биология предсказания белок-белкового взаимодействия идентифицированных белков, как с повышением, так и с понижением в отношении фосфорилирования мотивов, показала, что эти белки образуют взаимодействие друг с другом. Для обеспечения более высокой вероятности существования предсказанных связей была введена очень строгая степень достоверности взаимодействия 0,7 [28].В совокупности эти находки предполагают, что BCR-индуцированная активация пути AKT-mTORC1 / 2 вызывает переключение в составе сигнальных сетей, регулируемых консенсусным мотивом.

Рис. 7. Прогнозы биологического, физического и функционального взаимодействия субстратных (активированных) белков AKT-mTORC1 / 2.

Карта взаимодействий была предсказана для наблюдения предполагаемых взаимодействий субстрата AKT-mTORC1 / 2 с использованием веб-интерфейса, инструмента String 9 для активированных белков. Плотные кластеры, представляющие высокое взаимодействие между белками, можно увидеть для белков с повышенной регуляцией.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g007

Рис. 8. Прогнозы биологического, физического и функционального взаимодействия субстратных (подавляемых) белков AKT-mTORC1 / 2.

Была предсказана карта взаимодействий для наблюдения предполагаемых взаимодействий субстрата AKT-mTORC1 / 2 с использованием веб-интерфейса, инструмента String 9 для белков с пониженной регуляцией. Плотные кластеры, представляющие высокое взаимодействие между белками, можно увидеть для белков с пониженной регуляцией. Белки с пониженной регуляцией имеют более плотные кластеры и более крупный связанный график по сравнению с белками с повышенной регуляцией (Рис. 7).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g008

Эволюция мотива-мишени AKT в различных кладах эукариот

Присутствие ортологов генов у большой группы видов указывает на вероятную эволюционную и функциональную важность этих генов (таблица S3). Поэтому мы хотели увидеть, консервативны ли белки, содержащие мотив-мишень AKT, у эукариот, чтобы раскрыть возможные функциональные сходства и значение таких белков, присутствующих в различных субкладах эукариот.Анализ показал, что 33 белка имели ортологичные гены у всех 68 видов из 186 белков, содержащих целевой мотив AKT, что соответствует примерно 18% всех идентифицированных белков (рис. 9 и таблица S4). Эта степень сохранности чрезвычайно высока, учитывая разнообразие и сложность выбранных видов, от простых одноклеточных организмов до сложных животных, таких как приматы (S2, рис.). Опять же, сохранение мотива-мишени AKT между различными видами указывает на функциональную важность мотива-мишени AKT, особенно среди белков домашнего хозяйства, необходимых для выживания клеток.

Рис. 9. Вывод о гомологии и подсчет 186 субстратов AKT-mTORC1 / 2 в различных кладах эукариот.

На рисунке показано количество гомологов 186 субстратов AKT-mTORC1 / 2, присутствующих у различных видов эукариот, представляющих грибы, простейшие, виридипланты, беспозвоночные и позвоночные. Белки с гомологами во всех кладах также показаны на рисунке. Дерево видов и два круга окрашены в соответствии с их кладой (цвет, указанный в верхнем левом углу в качестве легенды к рисунку).Полярная дендрограмма, показывающая дерево видов, нарисованное с помощью археоптерикса. Счетчик между внутренним и внешним кругом представляет количество 186 субстратов AKT-mTORC1 / 2 с гомологичными белками у этого вида. Названия HGNC белков (33 белка) с гомологами во всех основных кладах и более чем 65 из 68 видов написаны за пределами внешнего круга. Из присутствия гомологов этих белков во всех кладах можно сделать вывод, что эти белки присутствовали у последнего общего предка эукариот и что эти белки имеют эволюционное и функциональное значение для эукариот.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0160255.g009

Обсуждение

Целью этого исследования было получить дальнейшее понимание роли пути AKT и его субстратов, используя подходы протеомики и биоинформатики. Интересно, что мы обнаружили, что, хотя AKT фосфорилировал мотив RXRXXS / T, ингибирование пути mTORC1 / 2 полностью аннулировало фосфорилирование этого мотива. Сигнальные пути опосредуются специфическими каскадами белок-белковых взаимодействий, которые имеют решающее значение для различных клеточных активностей и ответов [39].Регуляция опосредуется доменами и консенсусными мотивами, способствующими формированию сборки многих белковых комплексов, содержащих ферменты, такие как протеинкиназы, субстраты, расположенные ниже по течению, адаптерные модули и каркасные белки. Передовые технологии на основе тандемной масс-спектрометрии позволяют идентифицировать взаимодействующих партнеров в мультибелковых комплексах в одном образце без геля [40].

Многочисленные, ранее неизвестные субстраты, несущие мотив-мишень AKT (RXRXXS / T), были идентифицированы в этом исследовании с использованием протеомной идентификации вместе с анализом in silico по всему геному.В качестве доказательства принципа мы проверили два целевых белка, MEF-2D и RBM25, как прямые целевые субстраты для пути AKT-mTORC1 / 2.

Первичная консенсусная последовательность вокруг сайта фосфорилирования является важным детерминантом для нижестоящей специфичности киназы in vivo [41]. Фосфоспецифические антитела, селективные в отношении мотивов, являются идеальными инструментами для идентификации статуса активации сигнальных белков. Этот подход успешно применялся, например, для идентифицировать новый мотив-сайт PKA-мишени на цитоплазматической тирозинкиназе SRC, контролирующий каталитическую активность [42].В этой работе мы использовали специфическое антитело против RXRXXpS / T для удаления субстратов-мишеней AKT. Затем мы применили метод идентификации MS / MS без геля после иммуноаффинной очистки белково-белковых комплексов, чтобы определить глобальный протеом целевых субстратов AKT. В этом контексте также возможно идентифицировать вторичные и третичные белок-белковые взаимодействия.

Присутствие MEF-2D в качестве белка-мишени AKT было подтверждено с помощью иммуноблоттинга, что позволило дополнительно подтвердить протеомные данные.Визуальный осмотр первичной последовательности MEF-2D выявил присутствие двух потенциальных консенсусных мотивов AKT 15- RNRQVT -20 и 512- RMRLDT -517 . MEF-2D важен во время развития и взрослой жизни, контролируя транскрипцию, связанную с дифференцировкой, пролиферацией, морфогенезом, выживанием и апоптозом [43–46]. Choi et al. выявили ассоциацию MEF-2D с 14-3-3, которая впоследствии индуцирует трансактивационную активность [34]. Хотя идентичность ответственной киназы в этом исследовании не была продемонстрирована.Вестерн-блоттинг подтвердил, что AKT фосфорилирует MEF-2D в В-клетках и что это приводит к межбелковому взаимодействию in vivo с 14-3-3 зависимым от фосфорилирования образом.

С другой стороны, было показано, что RBM25 модулирует сплайсинг пре-мРНК Bcl-x [47] и играет важную роль в регуляции сплайсинга сердечных натриевых каналов [48]. Мы идентифицировали консенсусную последовательность RXRXXS / T в RBM25 и ее повышенное фосфорилирование после активации анти-IgM B-клеток в клетках Namalwa.Наше открытие предполагает, возможно, важную роль AKT-mTORC1 / 2 в регуляции сплайсинга мРНК после фосфорилирования RBM25.

Фактически, активированный путь AKT-mTORC1 приводит к фосфорилированию многих нижестоящих сигнальных молекул, таких как факторы, регулирующие трансляцию, рибосомная киназа-1 S6 (S6K-1) и фактор инициации трансляции эукариот 4E, связывающий белок-1 (4EBP- 1) [49]. Активация S6K-1 приводит к трансляции мРНК, кодирующей рибосомные белки и факторы элонгации [16].Фосфорилирование 4EBP-1 также усиливает трансляцию мРНК, кодирующих циклин D1 и c-Myc, контролируя развитие клеточного цикла и ангиогенез [50]. Известно, что mTORC2 является вышестоящим регулятором функции AKT и контролирует фосфорилирование AKT по серину 473 (S473), что вместе с фосфорилированием треонина 308 (T308) с помощью PDK1 приводит к полной активации AKT [51]. Как показано на фиг. 3A, ингибитор AKT (MK-2206) не устраняет полностью фосфорилирование всех субстратов AKT.Напротив, ингибитор mTORC1 / 2 (PP242) был замечательно эффективен в блокировании передачи сигналов (рис. 3А, дорожка 5). Следует отметить, что mTORC2 играет плейотропную роль в контроле роста клеток. Действительно, мы наблюдали ингибирование пролиферации как в клеточных линиях Namalwa, так и в A20 после обработки PP242 (рис. 4A).

В этом исследовании данные MS / MS подтвердили некоторые белки-мишени AKT, которые ранее были идентифицированы как истинные субстраты AKT, такие как CDC2-подобная киназа Clk2 [52], различные изоформы белков гетерогенного ядерного рибонуклеопротеина (hnRNP) [ 53] и белок коактиватора транскрипции (ALY / REF) [54].Однако в этом исследовании мы идентифицировали много новых белков, которые могут быть новыми субстратами AKT-mTORC1 / 2 ниже по течению. Предыдущая работа также показала, что AKT может либо напрямую модулировать функцию факторов сплайсинга семейства серин-аргинин (SR) [55-57], либо опосредованно через SR протеинкиназы (SRPKs) или Clk / Sty киназы [58]. Кроме того, фосфорилирование CLK2 с помощью AKT контролирует выживаемость клеток после ионизирующего излучения. Интересно, что в наших данных MS / MS мы наблюдали также другие изоформы CLK; CLK1 и CLK3 в качестве субстратов-мишеней AKT, которые могут играть определенную роль в передаче сигналов B-клеток.

Интересно, что мы также заметили много новых кандидатов в субстраты, содержащие целевой мотив AKT-mTORC1 / 2, которые связаны с белками факторов связывания РНК и сплайсинга, таких как RBM3, RBM15, RBM25, UTP11L, hnRNP и LUCL2, чтобы упомянуть некоторые ( Таблицы S1 и S2). Таким образом, мы наблюдали 48 белков в качестве возможных новых нижележащих субстратов AKT-mTORC1 / 2, содержащих РНК-связывающие домены (RRM-SF) (Таблица 1). Ранее было обнаружено, что некоторые белки пути AKT действуют как онкогены или супрессоры опухолей [59,60].Наши протеомные данные дополняют другие аспекты передачи сигналов рака человека, такие как регуляция сплайсинга с помощью AKT. Дальнейший анализ роли AKT в регуляции сплайсинга важен для понимания этиологии и прогрессирования рака, поскольку было показано, что нерегулярность сплайсинга РНК способствует прогрессированию различных видов опухолей человека [61,62].

Наш биоинформатический анализ данных МС / МС выявил по крайней мере 186 целевых белков AKT-mTORC1 / 2, содержащих мотив RXRXXS / T.Однако мы также обнаружили дополнительные 260 белков, в которых отсутствует этот мотив, возможно, представляющие вторичные или третичные взаимодействия с белками, несущими мотив-мишень AKT, на что указывает тот факт, что многие из этих белков попадают в те же функциональные категории, что и содержащие мотив. белки, хотя, возможно, некоторые из них могут быть просто липкими, загрязняющими белками, фигурирующими в данных протеомики.

В этой работе мы смогли показать динамическое взаимодействие с 85 белками, которые были активированы в ответ на стимуляцию анти-IgM в клетках Намалва.Чтобы изучить дальнейшие особенности сигнальной функции, представленной идентифицированными белками, мы разделили субстраты на подгруппы в соответствии с их функциональным распределением (рис. 6). Для этого анализа мы использовали систему классификации PANTHER [63], которая классифицирует белки на подгруппы в зависимости от их молекулярной функции. Мы также создали сети взаимодействий между идентифицированными белками, которые демонстрируют эффект активации BCR, созданный с помощью инструмента базы данных STRING [28]. Для белков с повышенным уровнем регуляции рибосомные интеракторы составляют наиболее заметную группу.Другая группа, которая, по-видимому, обогащена, - это белки, которые регулируют клеточный цикл с помощью различных механизмов, включая регуляцию транскрипции и сплайсинга (рис. 7). Кроме того, среди белков с пониженной регуляцией также сильно выделяется синтез рибосомальных белков. Есть также некоторые заметные взаимодействия, связанные с передачей сигналов Wnt, убиквитинизацией, апоптозом и репарацией ДНК (Рис. 8). Как уже упоминалось, этот паттерн наводит на мысль о сдвиге клеточного фенотипа от стадии более покоя к активированному фенотипу.

В наших протеомных данных, что несколько неожиданно, самые большие белковые сборки связаны со сплайсингом, экспортом и стабильностью мРНП. Более того, эта категория белков наиболее согласуется с компонентами поздних сплайсосомных комплексов, связанных с экспортом мРНП, как описано ранее Singh et al, [64]. Многие из компонентов, наблюдаемых в данных MS / MS, были описаны как гипофосфорилированные, когда начинается экспорт ядерных мРНП, особенно белки SR и белки комплекса соединений экзонов (EJC).Тот факт, что их фосфорилирование в протеоме снижается, предполагает, что активация может приводить к усилению экспорта. Эти клеточные функции представляют собой новые пути, которые необходимо изучить в будущих исследованиях, и наши предварительные данные показывают, что такая функция прямо или косвенно контролируется активностью киназы AKT-mTORC1 / 2.

Наша новая идентификация мишеней, содержащих мотив RXRXXXS / T, в этой работе может стать ценной платформой для характеристики статуса фосфорилирования различных клеточных ответов, связанных со специфическими сигнальными путями.Аномальное или устойчивое фосфорилирование белков часто коррелирует с заболеваниями, включая рак [65]. Стоит отметить, что более 90% фосфорилирования белков млекопитающих происходит по остаткам серина или треонина [8]. Более того, потеря PTEN коррелирует с конститутивной передачей сигналов PI3K, с повышением активности киназы AKT и обнаруживается при различных типах рака [66,67].

Путем анализа деталей сигнальных путей, участвующих в фосфорилировании мотивов-мишеней AKT-mTORC1 / 2, для AKT-mTORC1 / 2 могут быть найдены новые неизвестные субстраты и кандидаты в нижестоящие пути.Наша работа - это попытка выяснить важность альтернативных путей передачи сигналов AKT-mTORC1 / 2. Дальнейшие исследования необходимы для более точного картирования последствий этих кандидатов, а также статуса взаимодействий 14-3-3 на целевых белках. Ранее мы показали для BTK, что AKT-регулируемая передача сигналов приводит к подавлению активности тирозинкиназы [7]. Наши данные помогут составить полную картину роли недавно идентифицированных субстратных белков AKT-mTORC1 / 2. Надеюсь, это может выявить новые фармацевтические мишени для рака, а также для других заболеваний человека, связанных с передачей сигналов AKT и / или mTORC1 / 2.В частности, некоторые из недавно идентифицированных белков, скорее всего, служат прямыми субстратами AKT-mTORC1 / 2, и поэтому ожидается, что ингибиторы этих сигнальных преобразователей будут значительно мешать этим процессам и могут привести к более точной настройке лечения.

Благодарности

Мы признательны Карен Колвилл и покойному доктору Энтони Поусону (RIP), Исследовательскому институту Сэмюэля Луненфельда, больнице Mount Sinai, Торонто, Онтарио, Канада, и Департаменту молекулярной и медицинской генетики, Университета Торонто, Торонто, Онтарио, Канаде за помощь в протеомном анализе.D.K.M. благодарит Министерство высшего образования и научных исследований Регионального правительства Курдистана (Эрбиль-Ирак) за поддержку. J.J.T. был поддержан постдокторскими грантами Фонда Сигрид Джуселиус и Оск. Фонд Хуттунена. Шведское онкологическое общество, Шведский исследовательский совет, Совет графства Стокгольм (исследовательский грант ALF) и грант Европейского совета FP7 EURO-PADnet также поддержали эту работу. B.F.N. благодарит Erik Edith Fernström Stiftelse за финансирование поездки и сотрудничество с больницей Mount Sinai, Торонто, Канада.Дополнительную поддержку B.F.N оказал CRDF Global (США).

Вклад авторов

Концептуализация: DKM BFN CIES. Курирование данных: DKM RHA BFN. Формальный анализ: DKM RHA. Финансирование: CIES. Исследование: DKM RHA BFN. Методология: DKM BFN CIES. Ресурсы: DKM BFN CIES. Программное обеспечение: DKM RHA. Валидация: DKM RHA. Написание - черновик: ДКМ. Написание - просмотр и редактирование: DKM RHA JJT BFN CIES.

Ссылки

  1. 1. Scheid MP, Woodgett JR (2003) Раскрытие механизмов активации протеинкиназы B / Akt.Письма FEBS 546: 108–112. pmid: 12829245
  2. 2. Бразилия Д.П., Хеммингс Б.А. (2001) Десять лет передачи сигналов протеинкиназой B: трудная задача для подражания. Тенденции Biochem Sci 26: 657–664. pmid: 11701324
  3. 3. Лоулор М.А., Алесси Д.Р. (2001) PKB / Akt: ключевой медиатор клеточной пролиферации, выживаемости и инсулиновых реакций? J Cell Sci 114: 2903–2910. pmid: 11686294
  4. 4. Hers I, Vincent EE, Tavare JM (2011) Передача сигналов Akt в здоровье и болезни. Сигнал клетки 23: 1515–1527.pmid: 21620960
  5. 5. Алесси Д. Р., Каудвелл Ф. Б., Анджелкович М., Хеммингс Б. А., Коэн П. (1996) Молекулярные основы субстратной специфичности протеинкиназы В; сравнение с киназой-1 MAPKAP и киназой p70 S6. FEBS Lett 399: 333–338. pmid: 8985174
  6. 6. Johnson C, Crowther S, Stafford MJ, Campbell DG, Toth R, MacKintosh C (2010) Биоинформатический и экспериментальный обзор сайтов связывания 14-3-3. Biochem J 427: 69–78. pmid: 20141511
  7. 7. Mohammad DK, Nore BF, Hussain A, Gustafsson MO, Mohamed AJ, Smith CI (2013) Двойное фосфорилирование Btk с помощью Akt / протеинкиназы b обеспечивает стыковку для 14-3-3zeta, регулирует перемещение и ослабляет как тоническую, так и индуцированную передачу сигналов в В-клетки.Молекулярная и клеточная биология 33: 3214–3226. pmid: 23754751
  8. 8. Galski H, De Groot N, Ilan J, Hochberg AA (1983) Фосфорилирование тирозина в культивируемой человеческой плаценте. Biochim Biophys Acta 761: 284–290. pmid: 6197096
  9. 9. Алесси Д.Р., Анджелкович М., Кодуэлл Б., Крон П., Моррис Н., Коэн П. и др. (1996) Механизм активации протеинкиназы B инсулином и IGF-1. EMBO J 15: 6541–6551. pmid: 8978681
  10. 10. Смит А.Дж., Даут Дж., Шваппах Б. (2011) Мембранные белки как клиенты 14-3-3 в функциональной регуляции и внутриклеточном транспорте.Физиология (Bethesda) 26: 181–191.
  11. 11. Васудеван К.М., Гарравей Л.А. (2010) Передача сигналов AKT в физиологии и болезнях. Curr Top Microbiol Immunol 347: 105–133. pmid: 20549472
  12. 12. Стамболик В., Сузуки А., де ла Помпа Дж. Л., Братья Г. М., Миртсос С., Сасаки Т. и др. (1998) Отрицательная регуляция PKB / Akt-зависимой выживаемости клеток опухолевым супрессором PTEN. Ячейка 95: 29–39. pmid: 9778245
  13. 13. Аман М.Дж., Ламкин Т.Д., Окада Х., Куросаки Т., Равичандран К.С. (1998) Инозитолфосфатаза SHIP ингибирует активацию Akt / PKB в B-клетках.J Biol Chem 273: 33922–33928. pmid: 9852043
  14. 14. Gao T, Furnari F, Newton AC (2005) PHLPP: фосфатаза, которая непосредственно дефосфорилирует Akt, способствует апоптозу и подавляет рост опухоли. Mol Cell 18: 13–24. pmid: 15808505
  15. 15. Wullschleger S, Loewith R, Hall MN (2006) Передача сигналов TOR в росте и метаболизме. Ячейка 124: 471–484. pmid: 16469695
  16. 16. Лапланте М., Сабатини Д.М. (2012) Передача сигналов mTOR в контроле роста и болезни. Cell 149: 274–293.pmid: 22500797
  17. 17. Scheid MP, Woodgett JR (2001) PKB / AKT: функциональное понимание генетических моделей. Nat Rev Mol Cell Biol 2: 760–768. pmid: 11584303
  18. 18. Kandel ES, Hay N (1999) Регулирование и активность многофункциональной серин / треонинкиназы Akt / PKB. Exp Cell Res 253: 210–229. pmid: 10579924
  19. 19. Cheng Y, Zhang Y, Zhang L, Ren X, Huber-Keener KJ, Liu X и ​​др. (2012) MK-2206, новый аллостерический ингибитор Akt, действует синергично с гефитинибом против злокачественной глиомы, модулируя как аутофагию, так и апоптоз.Mol Cancer Ther 11: 154–164. pmid: 22057914
  20. 20. Lindsley CW (2010) Семейство протеинкиназ Akt / PKB: обзор низкомолекулярных ингибиторов и прогресс в направлении валидации мишеней: обновление 2009 года. Curr Top Med Chem 10: 458–477. pmid: 20180757
  21. 21. Zeng Z, Shi YX, Tsao T, Qiu Y, Kornblau SM, Baggerly KA и др. (2012) Нацеливание на mTORC1 / 2 ингибитором киназы mTOR PP242 вызывает апоптоз в клетках AML в условиях, имитирующих микроокружение костного мозга.Кровь 120: 2679–2689. pmid: 22826565
  22. 22. Нор Б.Ф., Варгас Л., Мохамед А.Дж., Бранден Л.Дж., Бакешо С.М., Ислам ТК и др. (2000) Перераспределение тирозинкиназы Брутона путем активации фосфатидилинозитол-3-киназы и GTPases семейства Rho. Европейский журнал иммунологии 30: 145–154. pmid: 10602036
  23. 23. Фличек П., Ахмед И., Амод М.Р., Баррелл Д., Бил К., Брент С. и др. (2013) Ensembl 2013. Nucleic Acids Res 41: D48–55. pmid: 23203987
  24. 24. Marchler-Bauer A, Derbyshire MK, Gonzales NR, Lu S, Chitsaz F, Geer LY и др.(2015) CDD: база данных сохраненных доменов NCBI. Nucleic Acids Res 43: D222–226. pmid: 25414356
  25. 25. Geer LY, Domrachev M, Lipman DJ, Bryant SH (2002) CDART: гомология белков по архитектуре домена. Genome Res 12: 1619–1623. pmid: 12368255
  26. 26. Ми Х, Муругануджан А., Томас П.Д. (2013) ПАНТЕРА в 2013 году: моделирование эволюции функции генов и других атрибутов генов в контексте филогенетических деревьев. Нуклеиновые кислоты Res 41: D377–386. pmid: 23193289
  27. 27.Франческини А., Шкларчик Д., Франкильд С., Кун М., Симонович М., Рот А. и др. (2013) STRING v9.1: сети белок-белкового взаимодействия с расширенным охватом и интеграцией. Nucleic Acids Res 41: D808–815. pmid: 23203871
  28. 28. Шкларчик Д., Франческини А., Кун М., Симонович М., Рот А., Мингез П. и др. (2011) База данных STRING в 2011 году: сети функционального взаимодействия белков, глобально интегрированные и оцененные. Nucleic Acids Res 39: D561–568. pmid: 21045058
  29. 29.Sayers EW, Barrett T, Benson DA, Bryant SH, Canese K, Chetvernin V и др. (2009) Ресурсы базы данных Национального центра биотехнологической информации. Nucleic Acids Res 37: D5–15. pmid: 18940862
  30. 30. Фличек П., Амод М.Р., Баррелл Д., Бил К., Биллис К., Брент С. и др. (2014) Ensembl 2014. Nucleic Acids Res 42: D749–755. pmid: 24316576
  31. 31. Али Р.Х., Мухаммад С., Хан М., Арвестад Л. (2013) Количественная оценка синтении улучшает вывод гомологии и разделение семейств генов.BMC Bioinformatics 14 Приложение 15: S12.
  32. 32. Hedges SB, Dudley J, Kumar S (2006) TimeTree: общедоступная база знаний о временах расхождения между организмами. Биоинформатика 22: 2971–2972. pmid: 17021158
  33. 33. Хан М.В., Змасек С.М. (2009) phyloXML: XML для эволюционной биологии и сравнительной геномики. BMC Bioinformatics 10: 356. pmid: 19860910
  34. 34. Choi SJ, Park SY, Han TH (2001) 14-3-3tau связывает и активирует фактор транскрипции MEF2D во время дифференцировки мышечных клеток.Nucleic Acids Res 29: 2836–2842. pmid: 11433030
  35. 35. Cox DM, Quinn ZA, McDermott JC (2000) Передача сигналов клеток и регуляция экспрессии специфичных для мышц генов с помощью фактора связывания энхансера миоцитов 2. Exerc Sport Sci Rev 28: 33–38. pmid: 11131687
  36. 36. Гонг Д., Ян Ф., Ли Ф., Цянь Д., Ву М., Шао З. и др. (2013) Кристаллическая структура и функциональная характеристика домена PWI RBM25 человека и его фланкирующей основной области. Biochem J 450: 85–94. pmid: 231

  37. 37.Zou H, Lai Y, Zhao X, Yan G, Ma D, Cardenes N и др. (2013) Регулирование мишени рапамицина 1 у млекопитающих с помощью белков Bcl-2 и Bcl-XL. J Biol Chem 288: 28824–28830. pmid: 23960074
  38. 38. Бломберг К.Е., Бушерон Н., Линдвалл Дж. М., Ю. Л., Рабергер Дж., Берглоф А. и др. (2009) Транскрипционные сигнатуры Itk-дефицитных CD3 +, CD4 + и CD8 + Т-клеток. BMC Genomics 10: 233. pmid: 19450280
  39. 39. Бонетта Л. (2010) Взаимодействие белков с белками: Интеграктом в стадии разработки.Природа 468: 851–854. pmid: 21150998
  40. 40. Ламонд А.И., Манн М. (1997) Клеточная биология и геном проектируют согласованную стратегию для характеристики мультипротеиновых комплексов с помощью масс-спектрометрии. Тенденции Cell Biol 7: 139–142. pmid: 17708925
  41. 41. Songyang Z, Blechner S, Hoagland N, Hoekstra MF, Piwnica-Worms H, Cantley LC (1994) Использование ориентированной пептидной библиотеки для определения оптимальных субстратов протеинкиназ. Curr Biol 4: 973–982. pmid: 7874496
  42. 42.Schmitt JM, Stork PJ (2002) PKA-фосфорилирование Src опосредует ингибирование роста клеток цАМФ через Rap1. Mol Cell 9: 85–94. pmid: 11804588
  43. 43. Ян К., Ше Х, Геринг М., Колла Э, Ли М., Шака Дж. Дж. И др. (2009) Регулирование фактора выживания нейронов MEF2D с помощью шаперон-опосредованной аутофагии. Наука 323: 124–127. pmid: 19119233
  44. 44. McKinsey TA, Zhang CL, Olson EN (2002) MEF2: кальций-зависимый регулятор деления, дифференцировки и гибели клеток.Тенденции Biochem Sci 27: 40–47. pmid: 11796223
  45. 45. Potthoff MJ, Olson EN (2007) MEF2: центральный регулятор разнообразных программ развития. Разработка 134: 4131–4140. pmid: 17959722
  46. 46. Zhang M, Truscott J, Davie J (2013) Потеря экспрессии MEF2D ингибирует дифференцировку и способствует онкогенезу в клетках рабдомиосаркомы. Молекулярный рак 12: 150. pmid: 24279793
  47. 47. Zhou A, Ou AC, Cho A, Benz EJ Jr., Huang SC (2008) Новый фактор сплайсинга RBM25 модулирует выбор сайта сплайсинга 5 'пре-мРНК Bcl-x.Mol Cell Biol 28: 5924-5936. pmid: 18663000
  48. 48. Gao G, Dudley SC Jr. (2013) Функция RBM25 / LUC7L3 в регуляции сплайсинга сердечных натриевых каналов при сердечной недостаточности человека. Тенденции Cardiovasc Med 23: 5–8. pmid: 22939879
  49. 49. Huang S, Houghton PJ (2003) Нацеливание на передачу сигналов mTOR для лечения рака. Curr Opin Pharmacol 3: 371–377. pmid: 125
  50. 50. Ma XM, Blenis J (2009) Молекулярные механизмы mTOR-опосредованного контроля трансляции.Nat Rev Mol Cell Biol 10: 307–318. pmid: 19339977
  51. 51. Сарбасов Д.Д., Гертин Д.А., Али С.М., Сабатини Д.М. (2005) Фосфорилирование и регуляция Akt / PKB комплексом rictor-mTOR. Science 307: 1098–1101. pmid: 15718470
  52. 52. Нам С.И., Со Х. Х., Пак Х. С., Ан С., Ким Дж. Й., Ян К. Х. и др. (2010) Фосфорилирование CLK2 по серину 34 и треонину 127 с помощью AKT контролирует выживаемость клеток после ионизирующего излучения. J Biol Chem 285: 31157-31163. pmid: 20682768
  53. 53.Vu NT, Park MA, Shultz JC, Goehe RW, Hoeferlin LA, Shultz MD, et al. (2013) hnRNP U усиливает сплайсинг каспазы-9 и модулируется AKT-зависимым фосфорилированием hnRNP L. J Biol Chem 288: 8575–8584. pmid: 23396972
  54. 54. Okada M, Jang SW, Ye K (2008) Фосфорилирование Akt и ассоциация ядерных фосфоинозитидов опосредуют экспорт мРНК и активность пролиферации клеток с помощью ALY. Proc Natl Acad Sci U S A 105: 8649–8654. pmid: 18562279
  55. 55. Liu X, Mayeda A, Tao M, Zheng ZM (2003) Зависимый от экзонного усилителя сплайсинга выбор 3 'сайта сплайсинга нуклеотида 3225 вируса папилломы крупного рогатого скота типа 1 может быть спасен в клетке, в которой отсутствует фактор сплайсинга ASF / SF2, посредством активации фосфатидилинозитола 3 -kinase / Akt путь.J Virol 77: 2105–2115. pmid: 12525645
  56. 56. Shultz JC, Goehe RW, Wijesinghe DS, Murudkar C, Hawkins AJ, Shay JW и др. (2010) Альтернативный сплайсинг каспазы 9 модулируется путем фосфоинозитид-3-киназы / Akt посредством фосфорилирования SRp30a. Cancer Res 70: 9185–9196. pmid: 21045158
  57. 57. Blaustein M, Pelisch F, Tanos T., Munoz MJ, Wengier D., Quadrana L, et al. (2005) Согласованная регуляция ядерной и цитоплазматической активности белков SR посредством AKT.Nat Struct Mol Biol 12: 1037–1044. pmid: 16299516
  58. 58. Цзян К., Патель Н.А., Уотсон Дж. Э., Апостолатос Х., Клейман Э., Хэнсон О. и др. (2009) Akt2-регуляция Cdc2-подобных киназ (Clk / Sty), фосфорилирование серин / аргинин-богатых (SR) белков и индуцированный инсулином альтернативный сплайсинг рибонуклеиновой кислоты-мессенджера PKCbetaII. Эндокринология 150: 2087–2097. pmid: 144
  59. 59. Inoki K, Corradetti MN, Guan KL (2005) Нарушение регуляции пути TSC-mTOR при заболеваниях человека.Нат Генет 37: 19–24. pmid: 15624019
  60. 60. Карраседо А., Пандольфи П.П. (2008) Путь PTEN-PI3K: обратная связь и перекрестные переговоры. Онкоген 27: 5527–5541. pmid: 18794886
  61. 61. Купер Т.А., Ван Л., Дрейфус Г. (2009) РНК и болезнь. Ячейка 136: 777–793. pmid: 19239895
  62. 62. Бауман Дж., Джеаравирияпайсарн Н., Коле Р. (2009) Терапевтический потенциал олигонуклеотидов с переключением сплайсинга. Олигонуклеотиды 19: 1–13. pmid: 19125639
  63. 63.Томас П.Д., Кэмпбелл М.Дж., Кеджаривал А., Ми Х., Карлак Б., Даверман Р. и др. (2003) PANTHER: библиотека семейств и подсемейств белков, проиндексированных по функциям. Genome Res 13: 2129–2141. pmid: 12952881
  64. 64. Сингх Г., Кучукурал А., Ченик С., Лешик Дж. Д., Шаффер С.А., Вен З. и др. (2012) Клеточный интерактом EJC выявляет структуру мРНП более высокого порядка и связь с белками EJC-SR. Ячейка 151: 750–764. pmid: 23084401
  65. 65. Блюм-Дженсен П., Хантер Т. (2001) Передача сигналов онкогенной киназы.Природа 411: 355–365. pmid: 11357143
  66. 66. Хён Т., Ям А., Пес С., Се Икс, Чжан Дж., Мики Т. и др. (2000) Потеря экспрессии PTEN, приводящая к высокой активации Akt в множественных миеломах человека. Кровь 96: 3560–3568. pmid: 11071655
  67. 67. Дахия П.Л., Агиар Р.К., Альберта Дж., Кум Дж. Б., Карон С., Силл Х и др. (1999) PTEN обратно коррелирует с фактором выживаемости клеток Akt / PKB и инактивируется посредством множества механизмов при злокачественных гематологических заболеваниях. Hum Mol Genet 8: 185–193.pmid: 9931326

Поиск по идентификационному коду производителя лодки - MIC

Воспользуйтесь этим бесплатным инструментом, чтобы найти по идентификационному коду производителя (MIC) название производителя прогулочного катера, каноэ, каяка или гидроцикла. Первые 3 символа идентификационного номера корпуса судна (HIN) представляют собой код производителя. Коды MIC выдаются Береговой охраной США. Существует более 16 000 кодов MIC (так что , пожалуйста, дайте этой странице время для загрузки ).

История HIN

В 1972 году USCG начала требовать, чтобы производители и импортеры лодок наносили идентификационные номера на корпуса всех прогулочных лодок. Структура HIN со временем менялась, но всегда требовалось, чтобы первые три символа состояли из кода MIC. Вплоть до середины 1990-х годов некоторые коды MIC также могли содержать числа; однако теперь все MIC состоят только из буквенных символов.

HIN служат нескольким целям. Государства используют HIN для присвоения титула и регистрации.USCG использует его для отслеживания отзывов судов и отчетов об инспекциях. Правоохранительные органы используют его для выявления утерянного или украденного имущества.

HIN прогулочного судна обычно состоит из 12 символов. Первые 3 символа обозначают производителя лодки. Следующие 5 символов - это либо заводской номер лодки, либо серийный номер. Следующие два символа указывают, когда была построена лодка (буква означает месяц постройки, а одно число означает год постройки), а последние два числа представляют год, когда эта купленная модель поступила в продажу.

Где найти HIN?

На лодках вы можете найти HIN на транце, а также неэкспонированную область внутри лодки. На гидроциклах HIN обычно располагается на верхней части задней платформы. На каноэ и каяках HIN обычно находится на правой стороне кормы (передняя правая сторона корпуса).

HIN может быть металлической пластиной с тиснением или отливкой на корпусе лодки, а также гравировкой или резьбой.

Чем полезен код производителя лодки?

Идентификация производителя лодки может быть очень полезной, особенно если вы покупаете или ремонтируете подержанную лодку.Знание имени производителя может быть полезно при проведении исследования, например, если другой владелец заметил проблемы, общие для производителя. Вы можете просмотреть руководства пользователя, которые обычно также содержат схемы деталей, и получить правильный номер детали.

Как искать в этом списке

Поле поиска появится после загрузки полного списка. Используйте поле поиска ниже, чтобы ввести трехзначный код MIC, название производителя, город или штат.

Green Bay Press-Gazette из Грин-Бей, Висконсин, 8 июня 2013 г. · Страница D3

CLASSIFIED GREEN BAY PRESS-GAZETTE СУББОТА, 8 ИЮНЯ 2013 ГОДА Квадроциклы D-3 Aviation Boats & amp; Аксессуары Мотоциклы Дома на колесах и авто; Личный водный транспорт снегоходы Дорожные прицепы Всплывающие квадроциклы 1985 Honda 200 ATV 3 Wheeler, требуется небольшая работа, $ 275 920-362-1375 Новый молодежный квадроцикл llOcc, 4-тактный, задний багажник, дистанционный запуск и остановка.595 долларов. Звоните 920-373-4555. Лодки & amp; Принадлежности Прокат лодок, глубина 10 футов, 16–29 футов, Shore Power, Sister Bay, Wl 920-854-2113 ext. 4. 12 футов. Лодка, прицеп, мотор $ 850 Mirror Craft Алюминиевая лодка, трейлер Sea Bird, мотор US Marine Force 9.9 - New Tune Up, троллинговый мотор, новая морская батарея. 850 $, Лучшее предложение. Звоните 920-217-9146. 2008 23 фута. Hydrosport 200HP подвесной двигатель Yamaha, всего 176 часов. Отличная лодка Big Water! Головка, силовой якорь, триммеры, резиновый пол, двойная консоль, проходное лобовое стекло.Книги по цене 33 000 долларов, "Надо продавать", лучшее предложение на 25 500 долларов. (920) 378-4217 1986 Хантер 23, 4 паруса, всего 8 л.с., круиз, гонка. Веселье на солнце! $ 5500 обо. (920) 854-4550 1 Владелец лодки! 1975 16 футов лыжный катер California Sidewinder. Джонсон мощностью 70 л.с., трейлер Shoreland'r, более новый цвет, индивидуальный чехол и amp; лыжи. Тщательно ухаживает первоначальный владелец. Внешний вид & amp; работает как новый, гарантированно! 2950 $ фирма. (920) 406-1523 или (920) 619-6903 2009 PROLINE 20 Express cuddy cabin, мощностью 150 л.с. Evinrude E-tech, Mercury 9.4-тактный кикер мощностью 9 л.с. с беспроводным рулевым управлением Panther T4. Тандемный алюминиевый прицеп. 74 часа. 26 900 $ Лучшее предложение. (920) 499-5376 Rinker 18Ft Open Bow w3.0L Mercruiser IO, Low Hours! Превосходное условие! См. На 674 Sunset Cr (Allouez Off Riverside), сб. 8 июня. 8000 долларов (920) 336-4569 1989 Моторная лодка Thompson IO Cuddy Cabin, в очень хорошем состоянии, включает прицеп EZ Loader с новыми шинами. 22 фута, плюс платформа для плавания, очень ухоженный двигатель Mercury мощностью 350 л.с., морское радио, эхолот, компас, розетка и крепление для портативного GPS (не входит в комплект).В комплект входит двухсекционная крышка бимини с окнами и крышка для швартовки. Краска дна, накладки на послепродажное обслуживание, Cuddy с надставкой и сухой раковиной, спальные места, верхний иллюминатор с солнечной панелью Снижено 5900 долларов США. Звоните 920-559-7530 ZODIAC Typhoon 12 'Новое, неиспользованное, дополнительные! BOAT TRAILER, 14 ', Ralph, (920) 743-8304 MopedScooter 2006 Самокат Suzuki Bergman 400CC, 8500 миль, 3750 долларов. Скутер Linhai 300cc 2006 года, 3800 миль, 2700 долларов. Оба в отличном состоянии. Ист-Грин Бэй, (920) 469-2996 Мотоциклы 2007 Blue Harley Davidson Low Rider, 1584CC, 6813 миль, отсоединяемое лобовое стекло, седельные сумки, 10900 долларов.920-255-0018 2012 Can-Am Spyder RT. Менее 700 миль.! 4 года гарантии, вкл. 21000 долларов. (920) 562-3330 2011 CAN-AM Spyder RT, серебристый & amp; черный, 3100 км, как новый! В комплект входят 2 подходящие куртки Can-Am & amp; шлемы. Лучшее предложение 17 900 $. (920) 468-5964 2013 Harley Davidson Fat Boy BRAND Новинка! 140 миль Экстра $ 16 900 (920) 445-6273 2006 Harley Davidson Sportster. 1200 куб. Кастом жемчужно-белый, много хрома. Состояние монетного двора! ! Обложка, обслуживающая. $ 6500обо. Звоните или пишите, фото доступны (920) 217-1645 2005 Harley Davidson 1200 Sportster, состояние отличное.7800 миль, съемное лобовое стекло, трубы Screaming Eagle, красный цвет с большим количеством хрома. Запрашивая 6 800 долларов 920-373-8250 2005 Harley Davidson Ultra Classic Electra Glide. Новые шины & amp; аккумулятор, только что сданный дилером, много хрома, состояние отличное. 27,000 миль. Лучшее предложение $ 12 500. (715) 923-9292 Harley Davidson: 2003 Ultra Classic - 12 500 долларов в год; Отличный конд. (920) 434-7090 2006 Honda Goldwing. 21,000 миль. Множество дополнений! Превосходное условие. 14 900 долларов США. (920) 839-6100 Мотоциклы 2005 HD, Electra Glide Classic, с пониженным двигателем, масляным радиатором, спинкой, новыми задними тормозами, новой задней шиной, новой батареей, Color Sun Glo Red, 18 600 миль., 13 500 $ S (920) 662-1733 2008 HONDA Goldwing GL 1800. 33 400 км, состояние отличное. Новые шины, 6-дисковый проигрыватель компакт-дисков, много дополнительного хрома, шлемы с наушниками, чехол, сумка в багажник, кожаные куртки hishers. Платиновый цвет. Лучшее предложение за 17000 долларов. (920) 406-8273 или: madtdgyahoo.com 1998 HONDA 750 Magna. 9 475 миль, состояние автосалона, ездил старший. Лобовое стекло, спинка & amp; седельные сумки; серебро & amp; черная, резина новая. 3800 долларов. (920) 469-0761 1984 Honda VF700C Magna Цвет черный, работает отлично, ветрозащитный экран, доп.875 долларов Торг. Звоните 920-837-7161, вечером. ТВ 2004 Ямаха ТВ Roadstar Warrior Отличное состояние! Вторичные трубки плюс аксессуары. Запрашивая 4 995 долларов Оставьте сообщение 920-539-0206 2000 Yamaha 1100 V- Star Classic, спинка багажника, ветровое стекло и подножки пассажира - всего 5100 миль - дилерская настройка и новый аккумулятор в прошлом году - отличное состояние - 5000 долларов США. Звоните 920-338-0512. Дома на колесах и дома на колесах 2011 Bighorn, модель 3185RL, 35 футов, пакет King of the Mountain, все новые шины, 3 горки с навесами, электрический навес для патио, надувной матрас, скрытая кровать, два кресла, телевизор с 40-дюймовым экраном, кровать размера «queen-size» , вход без ключа $ 36 900 obo (920) 499-0543 FSBO: 1995 35 ft.Дорожный трейлер Rockwood Lumina с большим выдвижным ящиком на затененном кемпинге Кевауни. 6 спальных мест, свободная планировка. Вкл. кухонная техника, кладовая, комбинированная душевая кабина с потолочным окном, сарай 6 футов x 8 футов & amp; вертикальный морозильник. Очень хорошая конд., Идеальное расположение! $ 7995, включая сезонную аренду участка. S (920) 388-6068 Дом на колесах 1987 Дом на колесах Honey Class C. Хорошее состояние. Спит 6. 84000 км. $ 5,000o.b.o. Звоните 920-487-3382. КРЕДИТ. Требуется БЕЗ ВЫПЛАТЫ mFINANPFI ГАРАНТИРОВАННОЕ СООБЩЕНИЕ. УТВЕРЖДЕНИЕ КРЕДИТА Выкупа права выкупа? Банкротство? Коллекции? Расторжение брака? Суждения? Предыдущее возвращение во владение? 2011 Chev Aveo LS 4120 2004 Kia ​​Sedona 4143 Mil PER, 2010 Chev Impala 4131 72 мес., V r 1673 Main St., Грин Бэй Подать заявку онлайн 247 koehnecredit.com Дома на колесах и дома на колесах 2000 Geoby Cruisemas-ter, 35 футов, класс A, дом на колесах. 1 горка, 2 воздуха, 2 печи, 2 телевизора, резервная камера, выравнивающие домкраты, навесы по периметру, 28 107 миль, всегда хранятся внутри. Это нужно увидеть! Состояние Al. 29 900 долл. США без НДС S (920) 754-4119 Тормоза Patriot от Blue Ox, никогда не использовались. Спрашивая сумку за 800 долларов, (920) 468-5320 Не кладите ее на чердак, позвоните в Центр объявлений СЕГОДНЯ! СНИЖЕННАЯ ЦЕНА Низкие мили, как у нового A MUST SEE 2006 NEWMAR VEN-TANA M3631 36 ft.Котло-эпиллярный мотор с трансмиссией Allison, дизель 330 л.с. 6-7 спальных мест, 3 выдвижных, 4 электрические навесы, вся бытовая техника из нержавеющей стали, светлое вишневое дерево, ванна с душевым туалетом, спутниковое телевидение и т. Д. еще много вариантов! 24000 миль. Просьба 79 995 долларов за (920) 378-4217 Передвижной дом 14 X 58 в парке сезонных передвижных домов. Расположен в красивом округе Саутерн-Дор, напротив залива. Частично меблирована. Свяжитесь с Нэнси по телефону 920-434-5478. Вы визуальный человек? Создайте свою собственную рекламу на Wisinfo.com 2001 Coleman Pop Up Camper Sleeps six, $ 2500 920-362-1375 30 Ft Jayco 1997 Trailer, двуспальная кровать спереди, 2 спальных места сзади, 8 спальных мест, отопление, горячая вода и кондиционер.$ 5 200 S (920) 503-0006 ДЛЯ ПРОДАЖИ ВЛАДЕЛЬЦЕМ 2005 г. Ларедо (от Keystone) 5-е колесо 27 футов - Один владелец, мало миль, хорошее состояние, некурящий. Двойная горка (гостиная и столовая). План задней гостиной. Кондиционирование воздуха. Двуспальная кровать в хозяине, двуспальная кровать в диване. Колпаки на колеса, полный тент, фаркоп в комплекте. 16000 долларов. (920) 469-2057 2008 Chevy 2010 Chev LT 4130 В НЕДЕЛЮ '3,9 АПРЕЛЯ; 60 мес., 9,9 апреля; m I Туристические трейлеры Всплывающие окна I. A 'M4 в час 1 НЕДЕЛЯ ft oenne AntiquesCollector Автоаксессуары для грузовиков Легковые автомобили ImportSport Semi TrucksHeavy Duty Sport Utility Trucks4x4 Vans Whppk WsnpH 1990 Cadillac Sedan De Ville, Beautiful cond! Черный wgold в тонкую полоску, гараж в хорошем состоянии, много новых запчастей! Все чеки, пробеги и диски отличные.169000 ориг. Миль, что на 1400 долларов ниже среднего значения BB при 2450 долларов США. Надо продать! Называется. (920) 621-1236 1964'2 Ford Mustang 289 Four Barrel, Auto, 83 824 миль., Хороший интерьер! Нет ржавчины! Победитель автосалона !! $ 12 000 S (920) 819-8736 Аксессуары для грузовиков CA $ H для КРАНКЕРОВ! До 1500 долларов. 884-5042 Grandpa John's Продается: Black Ton-neau, подходит Chev Silverado 2003 года выпуска, $ 150. Позвоните по телефону 920-829-6153 Тонно-чехол для пикапа с 8-футовой кроватью или меньше. Запрос на 200 долларов. Позвоните по телефону 920-255-6330. Автомобили 2004 Acura TL, 99 101 миль на складе M6224, 10 995 долларов США.305–2000 долларов НАЛИЧНЫМИ. (920) 712-4617 ВСЕ AUTOS хотели работать или нет! Минимум $ 300 наличными для среднего и среднего размера; крупнее, подобрал. Также покупаю кемперы, самосвалы, сельхозтехнику. Бесплатная доставка 7 дней в неделю. $$$ 920-470-9413 $$$ Коллекционер антиквариата ПРОБЛЕМЫ? Автомобиль или грузовик? 5dr '06 Nissan Sentra 4133 Aveo '10 Chev HHR LT 415 A1 PERS H Если НЕДЕЛЮ Malibu '10 Mazda 3 2.5L 4148 72 мес., 6.9 АПРЕЛЯ; Налог, DMV & amp; cWOOWEEKi ВСЕ ПРИВОДЫ. No Cars 2006 Audi A6 3.2 quat-tro, 86 517 миль запаса 28239B, 14 995 долларов Le Mieux & amp; Сын Toyota 888-424-7578 2006 Buick LaCrosse CXL, 133 662 мили на складе MMM4580, 6 295 долларов США, продажи 888-212-9180 Buick Lucerne CXL 2008 года выпуска., V6. 40,000 миль. 100000 миль BtoB Warr, 17000 долларов. 920-609-0820 2007 Buick Lucerne CXL, 43 725 миль, запас 2586, 13 977 долларов De Pere Auto Center 877-790-5320 2011 Buick Regal CXL, 28 113 миль Stock 2579, 18 477 долларов De Pere Auto Center 877-790-5320 2006 Chevrolet Cobalt LS, 144 000 миль запаса 513968, 5 495 долларов США. 888-234-0478 2005 Chevrolet Cobalt Base, 118 868 миль Stock M2848, 5695 долларов США. 790-5320 2006 Chevrolet HHR LT, 58 000 миль на складе 513978, 9 495 долларов Village Auto Inc.888-234-0478 2012 Chevrolet Impala LTZ, 32 722 мили, запас 2637, 18 477 долларов De Pere Auto Center 877-790-5320 2008 Chevrolet Impala LS, 152 000 миль Stock 413803, 7 495 долларов Village Auto Inc. 888-234-0478 2001 Chevrolet Impala, 136 866 Miles Stock M9738, 4 295 долларов США по продажам 888-212-9180 Chevrolet Malibu LS 2008 года, 113 560 миль M4422, 9 495 долларов США по продажам 888-212-9180 Chevrolet Malibu Maxx LT 2007 г., 82 000 миль 313781, 8 995 долларов Village Auto Inc. 888-234- 0478 2006 Chevrolet Malibu LT, 137 213 миль на складе M1766, 5695 долларов США в запасе 888-212-9180 Chevrolet Malibu LT 2006 года, 102 836 миль на складе MM9438, 7 295 долларов США в запасе 888-212-9180 Chrysler 200 Touring 2012 года, 36 106 миль на складе 2617, 15 477 долларов De Pere Автоцентр 877-790-5320 1993 Chrysler LeBaron 4-дверный, чистый, без ржавчины, холодный воздух, 115 000 $ 995 (фирма), 920-365-6452 2007 Chrysler Sebring Base, 102 491 миль на складе 241 мл, 6 995 долларов США. '07 '10 доплата за документ.Условия могут отличаться на 1-866-2384203. Автомобили Chrysler 300 2007 Signature Series КАКАЯ КРАСОТА! Это Limited 300 поставляется в комплекте. Опции включают в себя: передние сиденья с подогревом, аудиосистему Boston Acoustics Premium, легкосплавные диски премиум-класса, дистанционный запуск, Bentley Grill и все колокольчики и усилители; свистки. Ill, 847 mi За этим драгоценным камнем тщательно ухаживали, и он никогда не доставлял никаких проблем. Также в комплект входит полный комплект из 4 зимних шин Blizzak для легкого бега зимой. $ 10 200, договорная. Звоните 920-360-6843. Chrysler Sebring LX 2004 года выпуска, 121000 миль, 413896, $ 4995, Village Auto Inc.888-234-0478 2012 Dodge Avenger SE, 34 620 миль Stock 2628, 15 477 $ Автоцентр De Pere 877-790-5320 2009 Dodge Caliber SXT, новые тормоза, отличное состояние 74 000 миль. 8195 $ (920) 822-3058 2003 Dodge Intrepid, очень хороший конд. 123000 миль, 2 699 долларов (920) 606-5506 2012 Ford Fiesta SEL, 34 214 миль запаса 2629, 13 677 долларов США Автоцентр Де Пере 877-790-5320 2011 Ford Focus SE, 25037 миль запас 641, 13 990 долларов США Продажи автомобилей представительского класса в Green Bay 888- 842-6264 2006 Ford Focus ZX5, 121 199 миль на складе MM0695, 6495 долларов США в запасе 888-212-9180 2010 Ford Fusion SE, 104 876 миль на складе M0270, 8 995 долларов на MR продаж 888-212-9180 2010 Ford Taurus SEL, 68 600 миль на складе 27876B, 16 995 долларов Le Mieux & amp; Сын Тойота 888-424-7578 2004 Ford Taurus SE, 109 431 миля на складе M6592, 4 995 долларов США по продажам 888-212-9180 2003 Ford Taurus SES, 118 320 миль по запасам M8957, 3695 долларов США по продажам 888-212-9180 2003 Ford Taurus SE, 183 000 миль Акции 413892, $ 3995 Village Auto Inc.888-234-0478 1999 Ford Taurus SE Wagon, 121 K, 3-е сиденье, кондиционер, буксир. Упаковка, всегда хранится в сарае, хорошее техобслуживание. (квитанции), восстановленный транс, пара очень мелких проблем, пробеги & amp; Ездит очень красиво, чисто, бабушка получила новую машину. Kelley BB в розницу - 4175 долларов. Хорошая машина за 1875 долларов. Кассовая фирма !!! 680-1328 2007 Honda Civic EX, 121 356 миль запаса M8669, 8 295 долларов США в продаже 888-212-9180 Chev Malibu LT Chev Equinox AWD PER, заявитель на НЕДЕЛЮ. драмы 4141 SAD PERt Автомобили 2005 Honda Accord EX-L, запасы 88 570 миль 3401, 10 480 долларов США Продажи автомобилей представительского класса в Грин-Бей 888-842-6264 Honda Civic LX 2002 года, запасы 112 050 миль M0075, 5 995 долларов США 888-212-9180 2008 Hyundai Sonata GLS, 95 770 миль в запасе M9256, 8 295 долларов в продаже MR 888-212-918C 2011 Infiniti G25 x, 34 390 миль в запасе 3389, 23 990 долларов в продаже автомобилей Green Bay 888-842-6264 2009 Infiniti G37 x, 39 003 миль в запасе 3358, 25 840 долларов в представительских автомобилях Продажи Green Bay 888-842-6264 2009 Jaguar XF Luxury, 35 821 миль запаса 3297, 26 990 долларов США Продажи автомобилей представительского класса в Green Bay 888-842-6264 2012 Kia Optima LX, 13 279 миль запаса 1156, 16 900 долларов США Перепродажа автомобилей Дэйва 888-545-7408 Kia Optima LX 2010 года выпуска, 54 415 миль запаса 27384C, 12 995 долларов США Le Mieux & amp; Сын Тойота 888-424-7578 2008 KIA OPTIMA 63K, $ 8500, фирменный отличный кондуктор, новые шины, 920-362-1375: Bergstrom Buick-Green Bay 31 0 N.Taylor St., Green Bay, Wl 54303920-494-1800 www.bergstromcadillacgmc.com Koehne - Marinette 3415 Gallagher Rd., Marinette, Wl 54143 715-735-7483 S Koehne - Oconto Hwy 41 South, Oconto, Wl 920- 834-4343 www.koehnegm.com Bergstrom Cadillac-Green Bay 31 0 N. Taylor St., Green Bay, Wl 54303 920-494-1800 www.bergstromcadillacgmc.com Broadway Automotive-Green Bay 2700 S. Ashland Ave., Green Bay , Wl 54304 888-783-8785 498-6666 www.broadwayautomotive.com Gandrud Chevrolet 91 9 Auto Plaza Dr., Грин-Бэй, Wl 54302 (920) 468-6800 www.gandrud.com Koehne - Marinette 3415 Gallagher Rd., Marinette, Wl 54143715-735-7483 www.koehnegm.com SSS? ' Koehne - Oconto Hwy. 41 South, Oconto, Wl 920-834-4343 www.koehnegm.com Chrysler World Hwy. 41 в г. D выезд, Абрамс, Зл 1 2 мин. к северу от Грин-Бэй 1-866-826-41 41 www.chryslerworld.com GBfr Gandrud Chrysler 2300 Auto Plaza Dr., Green Bay, Wl 54302 (920)468-1212 www.gandrudchrysler.com sSSfc S & amp; L Motors Intersection of Hwy . 29 & amp; 32 в Пуласки 7 минут от Грин-Бей 800-865-2655 865-8000 www.slmotors.com! - Chrysler World Hwy. 41 в г. D выезд, Абрамс, Зл 1 2 мин. к северу от Грин-Бей 1 -866-826-41 41 www.chryslerworld.com 3S Gandrud Dodge 2300 Auto Plaza Way, Green Bay, WI 54302 (920)468-1212 www.gandruddodge.com S&L Motors Intersection of Hwy. 29 & amp; 32 в Пуласки, 7 минут от Грин-Бей 800-865-2655 865-8000 www.slmotors.com Broadway Ford 1010 S. Military Ave., Green Bay, Wl 54304 888-512-6023 499-3131 www.broadwayautomotive.com SSt Dorsch Ford 2641 Eaton Rd., Green Bay, WI 54311 866-980-0562 www.dorschfordkia.com Bergstrom GMC - Green Bay 301 N. Taylor St., Green Bay, Wl 54303 (920)494-1800 www.bergstromcadillacgmc.com Koehne - Marinette 3415 Gallagher Rd., Marinette, Wl 54143 715-735-7483 "3B & amp ; Koehne - Oconto Hwy.41 South, Oconto, Wl 920-834-4343 www.koehnegm.com m Van's Honda 2821 S. Oneida St., Green Bay, Wl 54304920-499-5483 www.vanshonda.com Broadway Hyundai 1 1 06 S. Military Ave., Green Bay, Wl 54304 888-512-6023 499-3131 www.broadwayautomotive.com Chrysler World Hwy, 41 в Cty.D выезд, Абрамс, Зл 1 2 мин. к северу от Грин-Бэй 1 -866-826-41 41 www.chryslerworld.com SS & amp; Gandrud Jeep 2300 Auto Plaza Dr., Грин-Бэй, Wl 54302 (920)468-1212 www.gandrudchrysler.com S&L Motors Intersection of Hwy. 29 & amp; 32 в Пуласки, 7 минут от Грин-Бей 800-865-2655 865-8000 www.slmotors.com Автомобили 2009 Kia Rondo EX, 91 609 миль на складе MM1007, 8 295 долларов США. Продажи 888-212-9180 Kia Soul 2011 года, 22 450 миль на складе 1168, 12 500 долларов Перепродажа авто Дэйва 888-545-7408 Kia Soul 2010 года, 39 166 миль запаса 27680B, 13 995 долларов Le Mieux & amp; Сын Toyota 888-424-7578 2008 Kia Spectra5 SX, 83 456 миль на складе 3351 B, 8 990 долларов США по продажам автомобилей в Грин-Бей 888-842-6264 2004 Lexus ES 330, 129 169 миль на складе M6983, 8 995 долларов на MR Продажи 888-212-9180 2003 Lexus ES 300, 114 978 миль, запас M8466, 9 295 долларов в продажах MR 888-212-9180 2002 Lexus ES 300, 115 965 миль M8266, 8 995 долларов в продаже на MR 888-212-9180 2002 Lexus GS 300, 110 540 миль M1402, 7 495 долларов в MR продаж 888-212 -9180 2000 Lexus GS 300, 112000 миль, запас 413883, $ 8 295 Village Auto Inc.888-234-0478 2000 Mercury Mountaineer 123K с грузом, 3500 долларов OBO (920) 562-1628 Автомобили 2001 Lincoln Continental, 132 717 миль запас 1200T, 3900 долларов Перепродажа авто Дэйва 888-545-7408 Mazda Mazda3 i Sport 2011 года, 34 702 мили на складе 2562, 13 477 долларов Автоцентр Де Пере 877-790-5320 Mazda Mazda3 s Sport 2010 года, запасы 27 772 миль 3415, 16 990 долларов США. 888-842-6264 Mazda RX7 1993 года. 1 собственник! 5 скоростей Twin Turbo, красный цвет, кожа коричневого цвета, внутр.Стереосистема Bose, люк с электроприводом, магнитола CB, оригинальные запчасти! 65,000 миль. 14 900 долларов США. 920-731-9354 2004 Mercedes Benz CLK 500A, Cabriolet 2DR, кабриолет. Блестящее серебро с черным мягким верхом, 302 л.с., V8 Automatic, 38 000 миль. Как новый, 20 000 долларов 920-655-3925 2010 Mercedes-Benz C-Class C300 4MATIC Sport, 26 773 мили, запас 3363, 26 480 долларов США по продажам автомобилей представительского класса в Грин-Бей 888-842-6264 Dorsch KIA 2641 Eaton Rd., Green Bay, Wl 5431 1 866-980-0562 www.dorschfordkia.com SB Dorsch Lincoln 2641 Eaton Rd., Green Bay, Wl 5431 1 866-980-0562 www.dorschfordkia.com Cliff Wall Mazda 1988 East Mason St., Green Bay, Wl 54302 866-586-8390 www.cliffwallcars.com 3? e Gandrud Nissan 1001 Auto Plaza Drive, Green Bay, WI 54302 (920) 468-6800 www. gandrud.com 8 Broadway Automotive-Green Bay 2700 S. Ashland Ave., Green Bay, Wl 54304 888-783-8785 (920) 498-6666 www.broadwayautomotive.com Cliff Wall-Subaru 1988 E. Mason St., Green Bay , Wl 54301 866-586-8390 www.cliffwallcars.com LeMieux and Son Toyota 2550 S. Oneida St., Green Bay, Wl 54304 (888) 424-7578 www.lemieuxtoyota.com 3 Auto Haus на Велп 1 280 Velp Avenue Green Bay, Wl 54303 888-411-3608 www.autohausonvelp.com m Лучшая цена Auto 3094 Mid Valley Dr .. - De Pere, Wl 541 1 5 (877) 857- 2081 www.bestpriceautos.com. .. 'Dan Goben Cars 1592 East Mason Street Green Bay, Wl 54302 888-585-9678 920-469-2277 www.dangobencars.com & amp; & amp; Dave's Auto Resale 1748 Paulson Rd Green Bay, Wl 54313 888-545-7408 www.davesautoresale.biz Автоцентр De Pere 705 George St. De Pere Wl, 541 1 5 (877) 790-5320 www.depreauto.com Продажи автомобилей для руководителей в Грин-Бей 840 Vander Perren Way, Грин-Бей, Wl 54304 (920)429-1111 www.exec auto.com SB "Продажа автомобилей для руководителей в Шавано 1204 E. Грин-Бей-стрит - Шавано, Wl 54166 (888)864-1445 MR Sales 2688 Packerland Drive, Green Bay, WI 54313 (888)212-9180 www.m-rsalesinc.com FC Rabideau's Auto Mart 1461 W. Mason St., Green Bay (877)466-5174 www .rabideausautomart.com SS & amp; ' Надежные продажи автомобилей 456 Jefferson St., Sturgeon Bay, Wl 54235 (866)424-1150 www.thinkreliableauto.com Unique Auto Sales 3744 Dutchman Rd., Green Bay, WI 54311 (877) 767-9263 8St- Village Auto Inc. 1 650 Velp Ave., Green Bay, Wl 54303 (888) 234-0478 www.villageautoonline.com Sfe Village Авто Оконто 5660 Hwy. 41, Oconto, Wl 541 53 (888) 328-2249 www.villageautoonline.com Village Auto на шоссе. 29 4637 Milltown Rd., Green Bay, WI 54313 (888) 229-0792 www.villageautoonline.com Broadway Automotive-Green Bay 2700 S. Ashland Ave., Green Bay, Wl 54304 888-783-8785 498-6666 www.broadwayautomotive .com Cars 2005 Mercury Grand Marquis GS, 136 102 мили на складе M5225, 4695 долларов США в продаже 888-212-9180 2010 MINI Cooper S, 62 511 миль на складе 3420, 16 990 долларов на продажу автомобилей в Грин Бэй 888-842-6264 2012 Nissan Altima 2.5 S, 32 761 миля, запас 2623, 16 677 долл. США Автоцентр Де Пере 877-790-5320 2009 Nissan Altima 2.5 SL, 37 903 мили на складе 3385, 15 980 долл. США Продажа автомобилей представительского класса в Грин Бэй 888-842-6264 2003 Nissan Altima 3.5 SE, 77 542 миль M6123, 8 295 долларов США по продажам 888-212-9180 2001 Nissan Altima GXE, 214 209 миль, запас 2582, 3477 долларов США Автоцентр Де Пере 877-790-5320 2009 Nissan Cube 1.8, 42 297 миль запаса 3413, 12 990 долларов США по продажам автомобилей представительского класса в Грин Бэй 888-842 -6264 Nissan Maxima SL 2008 года выпуска, запасы 189000 миль 313755, $ 8 495 Village Auto Inc.888-234-0478 2004 Nissan Maxima SL, 138 905 миль на складе M8872, 6 995 долл. США в продаже 888-212-9180

Фосфопротеомика тройного отрицательного рака молочной железы (TNBC)

, возникающая в результате комбинации 2, 3, 4 или 5 киназ с окрашиванием выше 75-го

перцентиля. Были сгенерированы девять различных переменных (K-тест

1

до K-test

9

), и были выполнены

кривых Каплана – Мейера, лог-ранговые тесты и многомерный анализ Кокса для

каждой тестовой переменной. исправлено эффектом множественных сравнений (Бонферрони).Линейность киназы co-

исследовали попарно с помощью коэффициента Пирсона.

Сравнение опухолевой нагрузки и выживаемость между группами лечения для

эксперименты in vivo проводились с t-тестом (получено среднее бремя

, по крайней мере, из 10 опухолей на момент времени и состояние) и методом Каплана-Мейера

(используется для сравнения времени смерти между группами лечения). Минимальное количество животных в группе

было рассчитано для того, чтобы выявить минимум

, составляющий 30% вариации времени до умерщвления (институциональные руководящие принципы устанавливают обязательное умерщвление

при росте опухоли> 1000 мм3), исходя из времени до умерщвления среды

умерщвление и стандартное отклонение животных, получавших носитель, и установление альфа

и бета ошибок в 5% и 20%, соответственно.Все тесты проводились с помощью программного обеспечения SPSS

Statistics V.19.0.

Доступность данных

Данные протеомики были депонированы в Консорциум ProteomeXchange через партнерский репозиторий

PRIDE с идентификатором набора данных PXD008012. Данные геномики

депонированы в базе данных NCBI Sequence Read Archive под регистрационным кодом

SRP152502. Все другие данные, подтверждающие результаты этого исследования, доступны по телефону

у соответствующего автора по разумному запросу.

Получено: 15 сентября 2017 г. Принято: 19 июля 2018 г.

Список литературы

1. Фоулкс, В. Д., Смит, И. Э., Рейс-Филхо, Дж. С. Тройной отрицательный рак молочной железы.

N. Engl. J. Med. 363, 1938–1948 (2010).

2. Lehmann, B.D. et al. Идентификация тройного отрицательного рака груди человека

подтипов и доклинических моделей для выбора таргетной терапии. J. Clin.

Инвест. 121, 2750–2767 (2011).

3. Curtis, C. et al.Геномная и транскриптомная архитектура 2000 опухолей молочной железы

позволяет выявить новые подгруппы. Nature 486, 346–352 (2012).

4. Shah, S.P. et al. Спектр клональной и мутационной эволюции первичных

тройных отрицательных раковых опухолей молочной железы. Nature 486, 395–399 (2012).

5. Banerji, S. et al. Анализ последовательности мутаций и транслокаций между

и

подтипами рака молочной железы. Природа 486, 405–409 (2012).

6. Kandoth, C. et al. Мутационный ландшафт и значимость для 12 основных типов рака

.Nature 502, 333–339 (2013).

7. Алтелаар, А. Ф., Муньос, Дж. И Хек, А. Дж. Протеомика следующего поколения: к

интегративный взгляд на динамику протеома. Nat. Преподобный Жене. 14,35–48 (2013).

8. Kim, M. S. et al. Черновая карта протеома человека. Nature 509, 575–581

(2014).

9. Райли, Н. М. и Кун, Дж. Дж. Фосфопротеомика в эпоху быстрого и глубокого профилирования протеома

. Анальный. Chem. 88,74–94 (2016).

10. Дерибе, Ю.Л., Поусон, Т. и Дикич, И. Посттрансляционные модификации в интеграции сигналов

. Nat. Struct. Мол. Биол. 17, 666–672 (2010).

11. Nik-Zainal, S. et al. Пейзаж соматических мутаций в 560 раках молочной железы

полногеномных последовательностях. Nature 534,47–54 (2016).

12. Bossi, D. et al. Генетический скрининг in vivo опухолей, полученных от пациентов, выявил

неожиданной хрупкости трансформированного фенотипа. Рак Discov. 6, 650–663

(2016).

13.Speers, C. et al. Идентификация новых киназных мишеней для лечения рака молочной железы, отрицательного по рецепторам эстрогена

. Clin. Cancer Res. 15, 6327–6340

(2009).

14. Midland, A. A. et al. Определение выраженного кинома рака молочной железы. Cell Res. 22,

620–623 (2012).

15. Perez-Gracia, J. L. et al. Выбор крайних фенотипов: роль клинического наблюдения

в трансляционных исследованиях. Clin. Пер. Онкол. 12. С. 174–180 (2010).

16. Zhou, H. et al. Улучшение идентификации фосфопептидов из предполагаемых субстратов базофильных киназ

с использованием обогащения IMAC на основе Ti (IV). Мол. Клетка.

Протеом. 10, M110 006452 (2011).

17. Subramanian, A. et al. Анализ обогащения набора генов: основанный на знаниях подход

для интерпретации полногеномных профилей экспрессии. Proc. Natl Acad.

Sci. USA 102, 15545–15550 (2005).

18. Дин, Дж. Л., МакКлендон, А. К., Кнудсен, Э.S. Модификация ответа на повреждение ДНК

путем терапевтического ингибирования CDK4 / 6. J. Biol. Chem. 287,

29075–29087 (2012).

19. Xia, Q. et al. Ингибитор CDK1 RO3306 улучшает ответ BRCA-

эффективных клеток рака молочной железы на ингибирование PARP. Int. J. Oncol. 44, 735–744

(2014).

20. Dann, S. G. et al. Катенин p120 является ключевым эффектором онкогенной сигнальной оси Ras-PKCvarepsilon

. Онкоген 33, 1385–1394 (2014).

21. Ma, C. X. et al. Нацеливание на Chk1 при тройном отрицательном раке молочной железы с дефицитом p53 является терапевтически эффективным на моделях опухоли человек-мышь. J. Clin. Вкладывать деньги.

122, 1541–1552 (2012).

22. Ellis, M. J. et al. Полногеномный анализ дает информацию о реакции рака груди на ингибирование

ароматазы. Природа 486, 353–360 (2012).

23. Сеть Атласа генома рака. Комплексные молекулярные портреты опухолей груди человека

. Природа 490,61–70 (2012).

24. Barretina, J. et al. Энциклопедия линии раковых клеток позволяет прогнозировать

моделирование чувствительности к противоопухолевым препаратам. Nature 483, 603–607 (2012).

25. Gao, H. et al. Высокопроизводительный скрининг с использованием ксенотрансплантатов

опухолей, полученных от пациента, для прогнозирования реакции на лекарственные препараты в клинических испытаниях. Nat. Med. 21, 1318–1325

(2015).

26. Huang, K. L. et al. Протеогеномная интеграция выявляет терапевтические мишени в

ксенотрансплантатах рака молочной железы.Nat. Commun. 8, 14864 (2017).

27. Jerby-Arnon, L. et al. Прогнозирование уязвимости, связанной с раком, с помощью

обнаружения синтетической летальности на основе данных. Cell 158, 1199–1209 (2014).

28. Fry, D. W. et al. Специфическое ингибирование циклин-зависимой киназы 4/6 с помощью PD

0332991 и связанное с ним противоопухолевое действие в ксенотрансплантатах опухоли человека. Мол.

Cancer Ther. 3, 1427–1438 (2004).

29. Buchdunger, E. et al. Ингибирование протеин-тирозинкиназы Abl in vitro и

in vivo производным 2-фениламинопиримидина.Cancer Res. 56, 100–104

(1996).

30. Blake, J. F. et al. Открытие (S) -1- (1- (4-Хлор-3-фторфенил) -2-

гидроксиэтил) -4- (2 - ((1-метил-1H-пиразол-5-ил) амино) пиримидин -4-ил)

пиридин-2 (1H) -он (GDC-0994), ингибитор киназы 1/2, регулируемой внеклеточными сигналами,

(ERK1 / 2) на ранней стадии клинического развития. J. Med. Chem. 59,

5650–5660 (2016).

31. Freschauf, G. K. et al. Идентификация низкомолекулярного ингибитора полинуклеотидкиназы / фосфатазы фермента репарации ДНК человека

.Cancer Res.

69, 7739–7746 (2009).

32. Caino, MC, Lopez-Haber, C., Kim, J., Mochly-Rosen, D. & Kazanietz, MG

Протеиновая киназа Cvarepsilon необходима для немелкоклеточной карциномы легкого

и регулирует рост экспрессия апоптотических генов. Онкоген 31,

2593–2600 (2012).

33. Tolcher, A. et al. Фаза I испытания тозилата LY2584702, ингибитора киназы p70 S6

, у пациентов с развитыми солидными опухолями. Евро.J. Cancer 50, 867–875

(2014).

34. Heinrich, M.C. et al. Ингибирование активности тирозинкиназы рецептора c-kit с помощью

STI 571, селективного ингибитора тирозинкиназы. Кровь 96, 925–932 (2000).

35. Sorlie, T. et al. Паттерны экспрессии генов карцином молочной железы различают

и

подклассов опухолей с клиническими последствиями. Proc. Natl Acad. Sci. USA 98,

10869–10874 (2001).

36. Stephens, P.J. et al. Пейзаж генов рака и мутационных процессов в

раке груди.Nature 486, 400–404 (2012).

37. Лоуренс, Р. Т. и др. Протеомный ландшафт тройного отрицательного рака груди.

Cell Rep. 11, 630–644 (2015).

38. Пагель, О., Лорох, С., Сикманн, А. и Захеди, Р. П. Текущие стратегии и

находки в клинически значимой посттрансляционной модификации специфической протеомики

. Эксперт. Преподобный Протеом. 12. С. 235–253 (2015).

39. Косако, Х. и Нагано, К. Количественные стратегии фосфопротеомики для

понимания путей передачи сигнала, опосредованных протеинкиназой.Эксперт.

Ред. Протеом. 8,81–94 (2011).

40. Тингхольм Т. Э., Йенсен О. Н. и Ларсен М. Р. Аналитические стратегии для фосфопротеомики

. Протеомика 9, 1451–1468 (2009).

41. Drake, J. M. et al. Интеграция фосфопротеома выявляет специфические для пациента

сетей при раке простаты. Cell 166, 1041–1054 (2016).

42. Zhang, H. et al. Комплексная протеогеномная характеристика серозного рака яичников высокой степени

у человека.Cell 166, 755–765 (2016).

43. Mertins, P. et al. Протеогеномика связывает соматические мутации с передачей сигналов при раке груди

. Nature 534,55–62 (2016).

44. Burstein, M. D. et al. Всесторонний геномный анализ определяет новые

подтипов и мишеней тройного отрицательного рака груди. Clin. Cancer Res. 21,

1688–1698 (2015).

45. Kashiwagi, S. et al. Экспрессия c-Kit как прогностический молекулярный маркер у

пациентов с базальным раком молочной железы.Br. J. Surg. 100, 490–496 (2013).

46. Hsu, Y.H. et al. Определение PKC-альфа, CDK6 и MET как терапевтических мишеней

при тройном отрицательном раке молочной железы. Cancer Res. 74, 4822–4835 (2014).

47. Finn, R. S. et al. PD 0332991, селективный ингибитор циклин D-киназы 4/6,

, предпочтительно ингибирует пролиферацию клеточных линий рака молочной железы человека

, положительных по люминальному рецептору эстрогена, in vitro. Рак молочной железы Res. 11, R77 (2009).

48. Моди, С.и другие. Испытание фазы II монотерапии мезилатом иматиниба у пациентов

с метастатическим раком молочной железы. Рак молочной железы Res. Удовольствие. 90, 157–163 (2005).

49. Cristofanilli, M. et al. Мезилат иматиниба (Gleevec) при распространенном раке молочной железы -

, экспрессирующий C-Kit или PDGFR-бета: клиническая активность и биологические корреляции.

Ann. Онкол. 19, 1713–1719 (2008).

50. Horiuchi, D. et al. Ингибирование киназы PIM1 в качестве таргетной терапии против тройных

отрицательных опухолей молочной железы с повышенной экспрессией MYC.Nat. Med. 22,

1321–1329 (2016).

СТАТЬЯ ПРИРОДА СВЯЗИ | DOI: 10.1038 / s41467-018-05742-z

14 СВЯЗЬ В ПРИРОДЕ | (2018) 9: 3501 | DOI: 10.1038 / s41467-018-05742-z | www.nature.com/naturecommunications

slk keychain - купить slk keychain с бесплатной доставкой на AliExpress

Отличные новости !!! Вы находитесь в нужном месте для брелка slk. К настоящему времени вы уже знаете, что что бы вы ни искали, вы обязательно найдете это на AliExpress.У нас буквально есть тысячи отличных продуктов во всех товарных категориях. Ищете ли вы товары высокого класса или дешевые и недорогие оптовые закупки, мы гарантируем, что он есть на AliExpress.

Вы найдете официальные магазины торговых марок наряду с небольшими независимыми продавцами со скидками, каждый из которых предлагает быструю доставку и надежные, а также удобные и безопасные способы оплаты, независимо от того, сколько вы решите потратить.

AliExpress никогда не уступит по выбору, качеству и цене. Каждый день вы найдете новые онлайн-предложения, скидки в магазинах и возможность сэкономить еще больше, собирая купоны. Но вам, возможно, придется действовать быстро, так как этот лучший брелок slk в кратчайшие сроки станет одним из самых востребованных бестселлеров. Подумайте, как вам будут завидовать друзья, когда вы скажете им, что получили свой брелок slk на AliExpress.С самыми низкими ценами в Интернете, дешевыми тарифами на доставку и возможностью получения на месте вы можете сэкономить еще больше.

Если вы все еще не уверены в брелке для ключей slk и думаете о выборе аналогичного товара, AliExpress - отличное место для сравнения цен и продавцов. Мы поможем вам решить, стоит ли доплачивать за высококлассную версию или вы получаете столь же выгодную сделку, приобретая более дешевую вещь.И, если вы просто хотите побаловать себя и потратиться на самую дорогую версию, AliExpress всегда позаботится о том, чтобы вы могли получить лучшую цену за свои деньги, даже сообщая вам, когда вам будет лучше дождаться начала рекламной акции. и ожидаемая экономия.AliExpress гордится тем, что у вас всегда есть осознанный выбор при покупке в одном из сотен магазинов и продавцов на нашей платформе. Реальные покупатели оценивают качество обслуживания, цену и качество каждого магазина и продавца.Кроме того, вы можете узнать рейтинги магазина или отдельных продавцов, а также сравнить цены, доставку и скидки на один и тот же продукт, прочитав комментарии и отзывы, оставленные пользователями. Каждая покупка имеет звездный рейтинг и часто имеет комментарии, оставленные предыдущими клиентами, описывающими их опыт транзакций, поэтому вы можете покупать с уверенностью каждый раз. Короче говоря, вам не нужно верить нам на слово - просто слушайте миллионы наших довольных клиентов.

И, если вы новичок на AliExpress, мы откроем вам секрет.Непосредственно перед тем, как вы нажмете «купить сейчас» в процессе транзакции, найдите время, чтобы проверить купоны - и вы сэкономите еще больше. Вы можете найти купоны магазина, купоны AliExpress или собирать купоны каждый день, играя в игры в приложении AliExpress. Вместе с бесплатной доставкой, которую предлагают большинство продавцов на нашем сайте, вы сможете приобрести keychain slk по самой выгодной цене.

Мы всегда в курсе последних технологий, новейших тенденций и самых обсуждаемых лейблов.На AliExpress отличное качество, цена и сервис всегда в стандартной комплектации. Начните самый лучший шоппинг прямо здесь.

Суперкары, гиперкары, суперкары, GT, хот-хэтчи, спорткары, роскошные автомобили и трековые обзоры автомобилей, характеристики, статистика, сравнение, соперники, данные, детали, фотографии и информация на SupercarWorld.com

9 0816 Показать еще новинки
Последние обзоры
Aston Martin Victor
Уникальный ретро-суперкар с трансмиссией One-77 от подразделения Q Aston Martin

Ares Panther ProgettoUno
Современная интерпретация De Tomaso Pantera на основе Lambo
18
8
17 Huracan 908
Mercedes AMG GT Black Series
Самым сложным из хардкорных AMG GT является новый рекордсмен Нюрбургринга

Bugatti Bolide
1500-сильный W16 от Bugatti в легком кузове

Porsche 911 Turbo S (997)
530hp Turbo S в сочетании с потрясающим ускорением и повседневной практичностью 2 + 2

Porsche 911 Turbo S (992 ship)
повседневный суперкар


2021 Великобритания покажет суперкар
Вс, 30 мая Supercar Fest (взлетно-посадочная полоса)
Sywell Aerodrome, Northampton
Вт 8 июня -
Чт 10 июня
London Concours
Finsbury Barracks, Лондон
пт 25 июня -
вс 27 июня
Лондонская выставка классических автомобилей
Syon Park, Лондон
Сб, 3 июля Great North Classic Car Show
Beamish, Дарем
Вс, 4 июля Гравитационное шоу
Стоунли, Уорикшир
Чт 8 июля -
Вс 11 июля
Гудвудский фестиваль скорости
Гудвуд, Чичестер
Пт 16 июля -
Вс 18 июля
F1 Гран-при Великобритании
Сильверстоун, Нортгемптон
Пт 16 июля -
Вс 18 июля
Auto Royale
Waddesdon Manor, Эйлсбери
Пт 23 июля -
Сб 24 июля
Событие суперкаров
Гудвуд, Чичестер
Пт 23 июля -
Вс 25 июля
Carfest North
Bolesworth, Чешир
Пт 30 июля -
Вс 1 августа
Silverstone Classic
Silverstone, Нортгемптон
Пт 6 августа -
Вс 8 августа
Ultimate Street Car Show
Santa Pod, Northants
Сб 7 августа -
Вс 8 августа
Beaulieu Supercar Weekend
Beaulieu, Борнмут
Вс, 15 августа Festival Italia
Brands Hatch, Кент
Чт 19 августа -
Вс 22 августа
Британский автосалон
Выставочный центр Фарнборо
Пт 27 августа -
Вс 29 августа
Carfest South
Laverstoke Park Farm, Хэмпшир
Вс, 29 августа Supercar Fest (The Hill)
Shelsley Hill Climb, Вустершир
ср 1 сентября -
сб 4 сентября
Salon Priv
Blenheim Palace, Oxfordshire
Пт 3 сентября -
Вс 5 сентября
Concours of Elegance
Дворец Хэмптон-Корт, Лондон
Пт 17 сентября -
Вс 19 сентября
Гудвуд Возрождение
Гудвуд, Чичестер
Вс, 3 октября TRAX / Japfest Silverstone
Silverstone, Нортгемптон
Пт 12 ноября -
Вс 14 ноября
Classic Motor Show
NEC, Бирмингем

Напишите нам, чтобы добавить свой суперкар в список.


Быстрый обзор

Пожалуйста, проголосуйте только один раз, чтобы мы получили верное представление о том, что думают люди.

Фанхио
Сенна
Шумахер
Гамильтон
Прост
Феттель

для продажи Список использованных запасов

Марка SelectTOYOTANISSANHONDAMITSUBISHISUBARUMAZDASUZUKIISUZUDAIHATSUHINOLEXUSMERCEDES-BENZBMWLAND ROVERROVERJEEPVOLKSWAGENAUDICHEVROLETVOLVOFORDJAGUAROPELHYUNDAIKIADAEWOOSAABGMCHRYSLERPorschePEUGEOTLincolnAMGCADILLACFERRARIBENTLEYCITROENALFA ROMEOCATFURUKAWAHIACE WAGONHUMMERZilZastavaZagatoYugoYES! YANMARWolseleyWinnebagoWiesmannWestfieldWeekenderVshutralVenturiVectorVauxhallVangoolVan AmericanUralUazU.SA. Другое OthersTVRTT AutoTrollerTriumphTMCTiara Royal StarTerexTemsaTeilholTCMTatraTataTAKEUCHISweden OthersSumitomoSterlingStarcraftSsangyongSpyker CarsSpain OthersSoueast MotorSmartSkodaShanghai AutomotiveSetraSEATScaniaSaturnSAMILSAMAGSaleenRUFRolls-RoyceRMARileyRenault TrucksRenault SamsungRenaultReliantRainbowstarPUTZMEISTERProtonPOTAINPontiacPiaggioPeroduaPantherPaganiOther AllOldsmobileOettingerNobleNichiyuNanjing SoyatNanjing FiatMVSMorrisMorganMokeMitsuokaMitsubishi FusoMiniMG RoverMGMERLOMercuryMCCMaybachMaseratiMaruti UdyogMartinMarcosMANMahindra & MahindraLotusLorenz & lancleLiebherrLeyand TrucksLanciaLamborghiniLadaKorea OthersKomatsuKoenigseggKoenigKobelcoKawasaki IndustryKatoKarlssonKamazJonckheereJindoJinbei AutomotiveJensenJCBIvecoItaly OthersIsoIrmscherInvictaInnocentiInfinitiIHIHonda ChinaHolland OthersHoldenHitachiHindustanHealeyHaulotteHafei AutomobileHafei AutoGuangzhou ToyotaGuangzhou AutomobileGreat Стена MotorGPGMCGinettaGermany OthersGemballaGeely Шанхай JeepGeely Autom obileGeelyGazFrance OthersFord ChinaFodenFiatFaw CarFAW (First Automobile Works) Европа FordEdonisEagleDonkervoortDongfeng Peugeot Citroen AutomobileDodgeDFM (Dongfeng Motor) DetomasoDEMAGDeloreanDe TomazoDafDaciaCi ZETAChery AutomobileChanghe SuzukiChanghe AutomobileChangan SuzukiChangAn AutomobileCaterpillarCaterhamCarbodiesCAMI AutomotiveByd AutomobileBuickBugatti_oldBugattiBristolBrilliance BmwBOMAGBogdanBMW AlpinaBirkinBertoneBejing BenzBeiqi Фотон MotorBeijing HyundaiBeijing автомобильный завод (BAW) AvtoVAZAvantiAutobiancheAustinAston MartinAscariArielArdenApalAMCAm GeneralAgraleAcuraAC SchnitzerAC CobraABTABARTHDoosanSamsungAIRMANHONDA OF AMERICANODASAKAIISEKIHINOMOTOMITSUBISHIKUMIAISUZUETOYOTAATEXDENYOTADANOTANAKATOKOLIUGONGSHIBAURAMassey FergusonBAIC YinxiangMOROOKARAMFORD JAPANNUMMITMUKNISSAN MIISUZUCHEVROLETHONDANISSAN UKTOYOTATMMKSUZUKINISSAN MTHONDA CANADAKUBOTADAIMLERMCCTOYOTAFORDSUBARUHONDA OF U.KTOAFUJIHONDAKAWASAKISUZUKIYAMAHATOYOTAHARLEY-DAVIDSONBMWDUCATIMV AGUSTABUELLHusqvarnaKTMYAMAHAO другие Модель

SelectAllexAllionAlphardAlphard HybridAltezzaAltezza GitaAristoAurisAvalonAvensisbBBeltaBladeBrevisCaldinaCaldina VanCamiCamryCamry GraciaCarinaCarina EDCavalierCelicaCelica XXCelsiorCenturyChaserClassicCoasterCoaster Большой VanComfortCorolla AxioCorolla CeresCorolla FielderCorolla FXCorolla IICorolla LevinCorolla RumionCorolla RunxCorolla SedanCorolla SpacioCorolla Touring WagonCorolla VanCorolla WagonCoronaCorona ExivCorona PremioCorona SfCorsaCrestaCrownCrown спортсмен SeriesCrown ComfortCrown EstateCrown HardtopCrown HybridCrown MajestaCrown Royal SeriesCrown SedanCrown станция WagonCrown VanCurrenCynosDeliboyDuetDyna Route VanDyna TruckDyna Urban SupporterDyna VanEstimaEstima EminaEstima HybridEstima LEstima LucidaEstima TFun CargoGaiaGracia WagonGrand HiaceGranviaHarrierHiace WagonHiace CommuterHiace TruckHiace VanHiace WagonHiluxHilux Sports PickupHilux SurfHilux Surf VanHilux TruckIpsumIsisISTKluger HybridKlugerLand CruiserLand Cruiser No CygniteLandLiteLite TruckLiteace VanLiteace WagonMark IIMark II BlitMark II QualisMark II VanMark II WagonMark XMark X ZioMasterace SurfMegacruiserMR2MR-SNadiaNoahOPAPassoPlatzPortePremioPriusProboxProbox VanProbox WagonProgresPronardPublicaQuick DeliveryRactisRaumRAV4Regius VanRegius WagonRegiusace VanRushScepterScepter WagonSeraSientaSoarerSparkySprinter CaribSprinter CieloSprinter MarinoSprinter SedanSprinter TruenoSprinter VanSprinter WagonStarletSucceedSucceed VanSucceed WagonSupraTercelTouring HiaceTownace NoahTownace TruckTownace VanTownace WagonToyoaceToyoace Route VanToyoace Urban SupporterToyota OthersVanguardVellfireVerossaVista ArdeoVista SedanVitzVoltzVoxyWill CyphaWill ViWill VSWindomWishTOYOTA OthersAccordAccord КупеAccord WagonActyActy TruckAirwaveAscotAvancierBeatCapaCityCivicCivic CoupeCivic FerioCivic HybridCivic ShuttleCivic Type RCivic VanCrossroadCR-VCR-XCR-X DelsolDomaniEdixElementElytegransHreteizJelysionFitFit Amera oupeLifeLife DunkLogoMDXMobilioMobilio SpikeNSXOdysseyOrthiaPartnerPreludeRafagaS2000SaberS-MXStep VanStep WGNStreamStreetThatsTodayTorneoVamosVamos HobioVigarZZestHONDA Others180SXAd Макс WagonAd Vanad WagonAtlasAtlas LocoAvenirAvenir SalutAvenircargoBassaraBe-1BluebirdBluebird SylphyCaraban SilkroadCaravan BusCaravan CoachCaravan ElgrandCaravan VanCedric HardtopCedric SedanCedric VanCedric WagonCefiroCefiro WagonCimaCivilian BusClipperClipper RioClipper TruckClipper VanCondorCrewCubeCube CubicDatsun PickupDatsun VanDualisDatsun TruckElgrandEscargoEXAExpertFairlady ZFigaroFugaGloria CimaGloria HardtopGloria VanGloria WagonGloria (седан) HomerHomy CoachHomy ElgrandHomy VanHyper MiniLafestaLargoLaurelLeopardLeopard JfereeLibertyLucinoLucino S-RVMarchMarch BoxMaximaMicrac C + CMistralMocoMuranoNissan GT-RNissan OthersПримечаниеOttiPAOPinoPrairiePrairie LibertyPrairiejoyPresagePreseaPresidentPresident JSPrimeraPrimera CaminoPrimera Camino WagonPrimera WagonPrimera-UKPrimera Camino WagonPrimera Wagon Pulsar SerieQuestRasheenRnessaSafariSafari VanSerenaSerena VanSilviaSkylineSkyline CoupeSkyline GT-RSkyline VanSkyline WagonStageaSunnySunny CaliforniaSunny TruckTeanaTerranoTerrano RegulusTiidaTiida LatioTinoVanette SerenaVanette TruckVanette VanVenette Largo CoachWingroadX-TrailNISSAN OthersAtenzaAxelaAZ-1AZ-3AZ-OffroadAZ-WagonBongo Мускулистый TruckBongo Мускулистый VanBongo FriendeeBongo TruckBongo VanBongo WagonCapellaCapella WagonCapera Cargo VanCarolCronosCX-7DemioEnfini MS-8Enfini MS-9Enfini RX -7Eunos 500Eunos 800Eunos CosmoEunos PrresoEunos RoadsterFamiliaFamilia S-WagonFamilia VanFamilia WagonLantisLaputaLevanteLuceMazda OthersMilleniaMPVMX-6Porter CabPremacyProceedProceed MarvieReviewRoadsterRX-7RX-8Savanna RX-7ScrumScrum VanScrum WagonSentiaSpianoTitanTitan DashTributeVerisaMAZDA OthersAirtrekAspireBraboCanterCarismaChallengerChariotChariot GrandisColtColt Раллиарт версия RColtplusDebonairDelica CargoDelica D5Delica SpacegearDelica StarwagonDelica TruckDelica VanDiamante SedanDiaman VanMagna станция тэ WagonDingoDionEclipseEclipsespydereK ActiveeK ClassyeK Спортэк WagonEternaFighterFTOGalantGalant FortisGalant LambdaGrandisGTOiJeepLancerLancer CargoLancer CediaLancer Cedia WagonLancer EvolutionLancer Evolution IX MRLancer Evolution VIILancer Evolution VIIILancer Evolution VIII MRLancer Evolution WagonLancer Evolution Wagon MRLancer Evolution XLancer ExLancer VanLancer WagonLegnumLiberoLibero WagonMinicaMinica TopoMinicab TruckMirageMirage AstiMirage HatchbackMirage SedanMitsubishi OthersOutlanderPajeroPajero iOPajero JrPajero MiniPajero VanProudiaRVRStarionStradaToppo BjToppo Bj WideTown BoxTown Box WideTritonMITSUBISHI OthersAerioAltoAlto WorksCappuccinoCaraCarry TruckCarry VanCervoCervo ModeCultusCultus CrescentCultus Crescent WagonCultus WagonEscudoEveryEvery LandyEvery PlusEvery WagonGrand EscudoJimnyJimny LJimny SierraJimny WideKeiLandyLapinMigty BoyMR WagonPaletteSuzuki OthersSwiftSX4SX4 SedanTwinWagon RWagon R PlusWagon R SolioWagon R WIDEX-90SUZUKI другие1 17 CoupeAskaBelletBighornBighorn VanComoComo MicrobusComo WagonElf TruckElf UtElf VanFargo BusFargo FillyFargo TruckFargo VanFargo WagonFasterFillyGeminiIsuzu OthersJourney BusMUPiazzaRodeoVehicrossWizardISUZU OthersAltisAtraiAtrai 7Atrai WagonBe-GoBoonCharadeCooCopenDaihatsu OthersDelta TruckDelta WagonEsseEsse CustomHicab TruckHijet CargoHijet GrancargoHijet TruckHijet VanMAXMidgetiiMiraMira AvyMira CustomMira Gino1000MiraginoMoveMove ConteMove CustomMove LatteNakedOptiPyzarRockyRuggerSonicaStoriaTantoTanto CustomTeriosTerios KidYRVDAIHATSU Others9-2X9-3 Series9-5 Series9-7X00SAAB OthersAccentAzeraEntourageGenesisSanta FeSonataTucsonVeracruzTiburonHYUNDAI OthersCadillacShevy VANGM Others10080A3A4A6A6 Allroad QuattroA8Allroad QuattroAudi OthersCabrioletCoupeQ7R8RS4RS6S3S4S6S8TTV6BeetleBoraCorradoCross PoloEOSGolfGolf PlusGolf TouranGolf VariantGolf WagonJettaLupoNew BeetlePassatPassat VariantPoloPolo CoupeSciroccoSharanTouaregVanagonVentoVOLKSWAGEN Others300C300MChargerCrossfireG рэнд VoyagerNeonPT CruiserPT Cruiser CabrioStratosVisionVoyagerCHRYSLER OthersBroncoEscapeExpeditionExplorerF150FestivaFestiva Mini WagonFiestaFocusFredaGalaxyGrand MarquisIxionKaLaserMondeoMustangProbeTaurusTelstarTelstar WagonThunderbirdFORD Others114200 Series216400 Series600 Series7575 Saloon800 SeriesCabrioletDefenderDiscoveryMGFMG-RV8MiniRange RoverROVER OthersDefenderDiscoveryDiscovery 3FreelanderFreelander 2Range RoverRange Rover SPORTLAND ROVER OthersAstraAstra WagonCalibraOmegaTigraVectraVectra WagonVitaZafiraOPEL Others911928944968BoxsterCayenneCaymanPORSCHE Others240740 760850940C30C70Cross CountryS40S60S70S80S90V40V50V70V90XC70XC90VOLVO OthersGX 470LEXUS OthersAstroAvalancheAveoBerettaBlazerCamaroCapriceCavalierCelebrityCitationClassicCobaltColoradoCorsicaCorvetteEl CaminoEquinoxHHRImpalaLuminaLuvMalibuMetroMonte CarloNovaPickupPrizmS-10SilveradoSpectrumSprintSSRSuburbanTahoeTrackerTrailBlazerVanVentureCHEVROLET Others1007106205206207306307405406407605607AviatorBlackwoodCo ntinentalLSMark LTMark VIIMark VIIIMKXMKZNavigatorTown CarZephyrLINCOLN OthersAMG OthersS-TypeVanden PlasX-TypeXFXK SeriesJAGUAR OthersAllanteCateraCimarronCTSDEVilleDTSEldoradoSevilleSRXSTSXLRCADILLAC другие1 Series3 Series3 Серия Cabrioret5 Series6 Series7 Series8 SeriesHartgeM ModelMINIMINI ClubmanMINI Парк LaneX3X5Z3Z4Z8BMW OthersAlcyoneAlcyone SVXBighornDias WagonDomingoExigaForesterImprezaImpreza Hardtop SedanImpreza SportswagonImpreza WrxImpreza Wrx StiLegacyLegacy B4Legacy Touring WagonLeoneLeone Touring WagonLeone VanOutbackPleoR1R2REXStellaSubaru OthersSambarTraviqVivioSUBARU Others348355360 Modena456GT456M512512TR550 Maranello575M Maranello599612 ScagliettiF355F40F430Ferrari OthersMondialMondial TTestarossaFERRARI OthersHINO Others190 ClassA-ClassB-ClassC-ClassCL-ClassCLK-ClassCls-ClassE-ClassG-ClassGL-ClassM-ClassMercedes-Benz OthersMidium ClassR-ClassS-ClassSL-ClassSLKSLR McLarenSmart ForFourVaneoV-ClassYianoArnageAulsan Другой 155156156 Sportwagon159164166Alfa Romeo OthersBreraGTGTVSpiderSpider VeloceSportwagonALFA ROMEO Othersh2h3h4HUMMER OthersCherokeeCJComancheCommanderCompassGrand CherokeeLibertyPatriotScramblerWagoneerWranglerJEEP OthersAlpineAvantimeCinqExpressKangooLagunaLuteciaMeganeScenicSport SpiderTwingoRENAULT Others3200GTCoupeGhibliGranturismoQuattroporteSpider500BarchettaBravissimoCoupeFiat OthersGrande PuntoMultiplaPuntoCountachDiabloGallardoMurcielagoLAMBORGHINI OthersAygoBlizzardCarina SurfCarina VanCoaster RCorolla AltisCorolla VersoCorona CoupeCorona VanCressidaEchoFJ CruiserFortunerHighlanderHilux SW4IQKijangMatrixOriginPicnicPreviaScion 4RunnerScion TCScion XAScion XBScion XDSequoiaSiennaStarlet VanT100TacomaTundraViosYarisZace200SX240SX280ZX300ZX350ZAd Макс VanAlmeraAltimaArmadaAusterBig ThumbBluebird VanBluebird WagonCedric CimaChasis LargoDoble CabinaEstacas LargoFairladyFrontierGazelleHomy Busking-CabKuonLangleyLargo VanLaurel SpiritLiberta VillaMicraNavaraNX CoupePathfinderPatrol GRP rairie VanRogueSentraStanzaSunny VanTsubameTsuruUdUrvanVersaVioletViolet LibertaXterraAccord TourerActy VanAscot InovaBalladeCity ProCivic CountryCivic GxCivic ProConcertFR-VPassportPilotQuintRidgelineVamos Hobio Pro3000GTAero MidiCanter GutsCelesteCordiaDebonair VDelicaDignityEmeroadEndeavorEterna SavaEterna VanExpo LRVFighter MignonForteFreecaGalant SportsGreatGrunderL200L300Lancer FioreMagicMinica EconoMinicab VanMirage VanMirage WagonMonteroNativaPajero PininPajero TR4PistachioPrecisRaiderRosaSavingShogunShogun PininShogun SportSigmaSigma VanSpace GeerSpace StarSpace WagonSuper GreatTrediaVaricaVerycaZinger323626929BianteBongo Brawny WagonB-SeriesCapella CargoClefCosmoCX-9Enfini MS-6EtudeEunos CagowagonEunos Cargo TruckEunos Грузовой фургон auseCharade VanCharmantCuoreDelta VanDelta Широкий VanDeltawide-WagonHicab VanMira CuoreMove Conte CustomResaSirionTerios LuciaTrevisAmigoAscenderAska CXAxiomD-MaxFlorianForwardGeminettGeminett IIGigaHipackHombreI-280i-290I-350i-370i-MarkImpulseJustonOasisPa NeroRodeo SportStylusTrooperGalueGalue 204Galue-IGalue-IILe SeydeMicrocarMitsuoka OthersNoueraOrochiRAYRyogaViewtYugaZero 1GEO MetroGEO PrizmGEO SpectrumGEO StormGEO TrackerOldsmobil CutlassOldsmobileOldsmobile AleroOldsmobile BravadaOldsmobile Silhouette300AcclaimAspenAvengerBerlingoC1C8CaravanCirrusConcordeConquestCordobaCruiserDaytonaE ClassEagle OthersExecutiveFifth AvenueGrand CaravanIntrepidJumperLebaronLHSNew YorkerPacificaPlymouth CaravellePlymouth ColtPlymouth ConquestPlymouth Gran FuryPlymouth HorizonPlymouth LaserPlymouth NeonPlymouth OthersPlymouth ProwlerPlymouth Reliant ookRelaySSaturn OthersSkyVueStarcraft OthersTiara Royal Star OthersAerostarCargoClub WagonContourCourierCrown VictoriaEconolineEcosportsEdgeEndaevourEscortExcursionExplorer Спорт TracF12000F14000F16000F250F350F4000FairmontFive HundredFocus C MaxFreestarFreestyleFusionIkonLaser LideaLoboMaverickPumaRangerSableS-MaxStreetKaTelstar SedanTempoTourrneoTransitTransit ConnectWindstarZX2CerberaChimaeraGriffithSagarisT350CTamoraTuscanTVR OthersAston Martin OthersDB7DB9DBSLagondaV12 VanquishV8V8 VantageVantageVirageDaimlerE-TypeSovereignXJ SeriesXJ-SXK SeriesCamargueCornichePhantomPhantom CoupePhantom Drophead CoupeRolls-Royce LineupRolls-Royce OthersSilver SeraphSilver SpiritSilver SpurBentley LineupBrooklandsContinental Летучий SpurContinental GTContinental GTC254575 TourerCityRoverGSI EstateMG TFMG ZRMG ZTR75StreetwiseTourerMINI CheckmateMINI SevenX6B10B11B12B3B3 BiTurboB3 SB5 SB5 Super ChargeB6B6 SB6 Super ChargeB7B7 Super ChargeBMW Alpina ДругоеVshutral OthersA2A5ВсюдуQuattroS5TTSWeekender OthersAgilaArenaComboFronteraInsigniaKadettMerivaMovanoSenatorSignumSintraSpeedsterSwingVectra GtsVivaroCabrioCaddyCaliforniaCaravelleCombiCrossfoxDelivery VanDerbyEurovanFoxGolGolf GTIKombiKombi FurgaoMultivanPanelParatiPhaetonPointerPolo ClassicPolo SedanQuantumRabbitSantanaSaveiroSedanSpacefoxSport vanTiguanTouranTransporterVW Van924Carrera GTCab ChasisCargo VanML ClassSmart BrabusSprinterSprinter 412 WindlaufVitoWagonCLKSL2CVAXBXC2C3C3 PlurielC4C4 PicassoC5C6ChansonEvasionJumper FurgaoJumper MinibusPicassoSaxoSynergieXantiaXMXsaraXsara PicassoZX107308309505806807BoxerGrand RaidPeugoet OthersRanch2821ClioEspaceFuegoGrand EspaceGrand ScenicKangoo ExpressMasterMaster MinibusMegane Туринг WagonModusSafraneTraficVel SatisVenturi OthersAutovianche OthersY10146159 Sportwagon8CCrosswagonBravaBravoCinquecentroCromaDobloDucato CargoDucato FurgaoDucato MaxiDucato VanFiat-Hitachi OthersFiorinoIdeaMareaPalioPininfarinaRegataRitmoScudoSediciSeicentoSienaStiloTempraTipoUlysseUNOUno FurgaoX1 / 932 8430 Scuderia456Enzo222228430BiturboGransportGransport SpyderKarifMaserati OthersRoyalShamalSpider ZagatoBetaDedraDeltaGammaKLancia OthersLybraMusaPhedraPrismaThemaThesisYpsilonJalpa140260340360440460480780D8D8 SportDonkervoort OthersAmantiAvellaBestaBongoBorregoBrisaCapitalCarensCarnivalCarstarCee'dCeratoClarusConcordCredosElanEnterpriseGrand CarnivalKia Моторс OthersKia RoadsterLotzeMagentisMentorMohaveMorning (Picanto) OpirusOptimaPicantoPotentiaprecioPregioPRESIOPride (Рио) RetonaRioRocstaRondoSedonaSephiaShumaSorentoSpectraSportageTopicTownerVigatoVistoX-TrekBirkin OthersMG OthersMontegoTFZRZSZTZT-TMobirieWinnebago OthersAustin Others4-AprMorgan OthersPlus4Plus8340REliseEspritEuropa 225Europa SExigeLotus OthersMcc OthersSmartArcadiaDaewoo OthersDamasEsperoGentraKalosLABOLacettiLanosLasettiLeganzaMagnusMatizNew MatizNubiraNubira-2RezzoStatesmanTacumaToscaWinstormAmicaAtosAtozAvante (Элантра) CentennialChorusClickCountyDynastyEF sonataElantraEquusExcelGalloperGetzGraceGrandeurGrandeur TGGrandeur XGh200HDHyundai CoupeJMLavitaMARCIAMightyNF SonataPorterSantamoScoupeStarexTBTerracanTrajetTuscaniVernaXGHummer h2AllianceAMC OthersEagleEncorePremierSpiritAcadiaCaballeroCanyonEnvoyEnvoy XLEnvoy XUVGMC OthersJimmyRallySavanaSierraSonomaVanduraYukonRainbowstar OthersDolphinDutroLiesseLiesse IIMelphaProfiaRainbowS'elega RLR2LR3Range Rover VoguePanther Others5762Maybach OthersAm Общие OthersBugatti_OthersESLXNoble OthersOther AllRXSaleen OthersFestiva 5Festiva CargoFord Япония OthersJ100 TruckJ100 VanJ80 TruckJ80 VanLaser Лидея WagonLaser VanTelstar IiEurope Форд OthersRUF OthersLorenz & lancle OthersRma OthersGermany OthersCarbodies OthersLimousine Большой BenWestfield OthersCaterham OthersReliant OthersMoke OthersMorris OthersHealey OthersWolseley ДругиеРайли ДругиеМаркос ДругиеДоломитСпитфайрTR7TR8Триумф ДругиеГП ДругиеТакси ЛондонаU.K. OthersInnocenti OthersBertone OthersDetmaso OthersBugatti OthersItaly OthersMVSMvs OthersMartin OthersTeilhol OthersFrance OthersSweden OthersHolland OthersAvanti OthersVector OthersAcura OthersCLCSXELRDXRLRSXS20VigSLX45SFINCXLX45.FINXFX3FXVI35L OthersActyonChairmanIstanaKorandoKyronMussoRextonRodiusSsangyong OthersStavicKorea OthersLada OthersNivaAlhambraAltanaAlteaArosaCordoba VarioIbizaIncaLeonSeat OthersToledoSpain OthersApal OthersCAT OthersIHI OthersKato OthersKobelco OthersKomatsu OthersKawasakiindustry OthersSumitomo OthersHitachi OthersTcm OthersNichiyu OthersGSGS HybridISIS FSCM400VeyronS281S7Fuso OthersRosa BusTruckAllureBuick OthersElectraEnclaveEstateLaCrosseLe SabreLucernePark AvenueRainierReattaRegalRendezvousRivieraRoadmasterSkyhawkSkylarkSomersetTerrazaBLSBroughame SedanConcoursEscaladeFleetwoodLimgineC20CaptivaCeltaChevyClassic SedanCruzeEpicaGrand AMGrand BlazerGrand PrixIpanemaMontanaMonza ChevyMWOptraP-30S BlazerSonotaSpace VanSunfireTaveraTornadoUplander2000GT Convertible6000STEAztekBonnevilleFieroFirebirdG3G4G5G6G8Le MansParisiennePhoenixPontiac OthersPursitSolsticeSunbirdTorrentTrans SportTransamVibeWave400600AriesAttitudeCaliberDakotaDiplomatDodge OthersDurangoMagnumMega CabMiradaMonacoNitroOmniQuad Са bRAMRamchargerRampageShadowSRT8StealthStratusSXViperGrand WagoniaCougarMarinerMilanCapriLynxMarauderMarquisMercury OthersMontereyMountaineerMystiqueTopazTracerVillagerDelorean OthersDMC-12MedallionSummitTalonCooperMini OthersAchievaAleroAuroraBravadaCalaisCieraCutlassEighty EightFirenzaIntrigueNinety EightOldsmobile OthersRegencySilhouetteToronadoForFourForTwoSmart Others825827Sterling Others556065CiaoGVGVLGVSKoralYugo OthersABT OthersAC Кобра OthersAC Шнитцер OthersArden OthersAriel OthersAscari OthersAvtoVAZ OthersBogdan OthersBristol OthersDaf OthersDe Томазо OthersEdonis OthersFoden OthersGaz OthersGemballa OthersGinetta OthersInvicta Othersirmscher OthersIso OthersDailyIveco OthersJensen OthersJonckheere OthersKamaz OthersKarlsson OthersKoenig OthersKoenigsegg OthersLeyand Грузовики OthersMan OthersTGLTGMTGSTGXOettinger OthersPagani OthersKelisaKembaraKenariMyViPerodua OthersRusaVivaPiaggio OthersRenault Грузовики ДругиеScania ПрочееSetra OthersSpyker Cars ПрочееAceIndicaIndigoNovusSu moTata OthersWingerTatra OthersTemsa OthersTroller OthersUaz OthersUral OthersVangool OthersWiesmann Others ДА! OthersZastava OthersZil OthersCAMI Automotive OthersDacia OthersLoganHolden Others100200800City RoverMG ОГФ Rover OthersMG SVRV8Gen-2JuaraPerdanaProton OthersSagaSatria NeoSavvyWiraFabiaFericiaLauraOctaviaPraktikRoomsterSkoda OthersSuperbAstra vanVauxhall OthersAmbassadorContessaBoleroMahindra & Mahindra OthersMaXXPick-UpScorpioGypsyMaruti Удиог OthersAgrale OthersMarruaJindo OthersSPVQM5Renault Samsung OthersSM3SM5SM7Beijing автомобильный завод OthersHafei Авто OthersGuangzhou Автомобили OthersGreat Wall Motor OthersCheryChery Automobile OthersEasterFengyunQiyunQQV5Buick RegalBuick RoyaumExcelleLovaSailShanghai Automotive OthersSparkFAW OthersBenbenChangAn Автомобильные OthersCM8CaratoDFM OthersGenissSpace ШестеренкаСильфиBeauty LeopardBiaofengFreedom ShipGeely Automobile OthersHaoqingLG-1MarindoMerrieUlionAudi A4Audi A6CorollaFreewindHighland TrooperДругиеSagitarunkownVelaXingfu ShizheCitroen Elysee7Citroen Picibot 30Citroen Picibot 20Citroen Picibot 30 HERSMAX 1max 2-3-4PICK ПЭ-PFSAMAG OTHERSCaterpillar OthersJCB OTHERSYANMAR OTHERSTAKEUCHI OTHERSTB016TB108TB1140TB125TB135TB138FRTB145TB153FRTB175TB180FRTB228TB235TB250TL120TL130TL140TL150TL220TL230TL240TL250TW50TW60TW65TW80BOMAG OTHERSMERLO OTHERSPOTAIN OTHERSLiebherr OTHERSTerex OTHERSDEMAG OTHERSHaulotte OTHERSTMC OTHERSPUTZMEISTER OTHERSABARTH OTHERSLSPradoPickupTitanCorsaAspireGTSpectronRoadsterV8CorsaGTVanCabrioSprinter VANC-ClassCL-Classe-ClassG-ClassM-ClassS-ClassSLKBerlingoC1C8JumperExpertPartnerAlpineAvantimeCinqExpressKangooLagunaLuteciaMeganeRenault OthersScenicSport SpiderTwingo75Strada3083200GTCoupeGhibliGranturismoQuattroporteSpiderY10ZCountachDiabloGallardoLamborghini OthersMurcielago164MGFMiniMontegoElanCoupeh2MatrixConcordJeepForwardPickupSafariSuburbanRangerGX 470Lexus OthersMiniAcclaimIntegraLegendMDXNSXCordobaESLSLXRXNoble OthersAero MidiCanterCanter GutsFighter MignonGreatSuper GreatCenturyCorsaExpressKadettKalosLacettiMatizMerivaNubiraOmegaPrismaRezzoTacumaTrafic VectraZafiraGrand AMGrand PrixGTOHHRMontanaSafariSunfireAtosAvengerCaravanChallengerChargerColtConquestDaytonaDynastyGrand Caravanh200IntrepidLancerNeonRaiderSpiritSprinterVernaMontegoCougarGrand MarquisMarinerMilanMontegoSableZephyrEagle OthersPremierVisionOmegaCityRoadster45CabrioTempoMagicSafari254004560075MG TFMiniArenaPersonaAgilaAstraComboCorsaFronteraMerivaSignumTigraVectraVivaroZafiraJeepOmniVersaVitaraA5AveoBlazerCadillacEpicaGolGolf TouranLaCrosseMontanaPassatPoloSantanaAccentBluebirdCarnivalCivicCR-VOptimaPrideSunnyTeanaTiidaVisionBoraCaddyCharadeCrownEchoFamiliaGolfJettaLand CruiserMark XPlatzPradoPremacyPriusTeriosViosVitzC2OthersOthersOthersOthersOthersOthersOthersOthersOthersOthersDingoLoboOthersOthersOthersOthersOthersOthersOthersOthersOthersOthers100Grande PuntoOtherOtherProceed LevanteCombi BusTransporterCherokeePandaZagato OthersAtenza SportAxela SportAtenza Спорт WagonVoltzJ80AllexAllionAlphard GAlphard HybridAlphard VAltezzaAltezza GitaAristoAurisAvalonAvensisbBBel taBladeBrevisCaldinaCaldina VanCamiCamryCamry GraciaCarinaCarina EDCavalierCelicaCelica XXCelsiorCenturyChaserClassicCoasterCoaster Большой VanComfortCorolla AxioCorolla CeresCorolla FielderCorolla FXCorolla IICorolla LevinCorolla RumionCorolla RunxCorolla SedanCorolla SpacioCorolla Touring WagonCorolla VanCorolla WagonCoronaCorona ExivCorona PremioCorona SfCorsaCrestaCrownCrown спортсмен SeriesCrown ComfortCrown EstateCrown HardtopCrown HybridCrown MajestaCrown Royal SeriesCrown SedanCrown станция WagonCrown VanCurrenCynosDeliboyDuetDyna Route VanDyna TruckDyna Urban SupporterDyna VanEstimaEstima EminaEstima HybridEstima LEstima LucidaEstima TFun CargoGaiaGracia WagonGrand HiaceGranviaHarrierHarrier HybridHiace CommuterHiace TruckHiace VanHiace WagonHiluxHilux Sports PickupHilux SurfHilux Surf VanHilux TruckIpsumIsisISTKluger HybridKluger LKluger VLand CruiserLand Cruiser CygnusLand Cruiser PradoLandcruiser 80Landcruiser PradoLandcruiser 80Landcruiser 70 Mark II QualisMark II VanMark II WagonMark XMark X ZioMasterace SurfMegacruiserMR2MR-SNadiaNoahOPAPassoPlatzPortePremioPriusProboxProbox VanProbox WagonProgresPronardPublicaQuick DeliveryRactisRaumRAV4RAV4 JRAV4 LRegius VanRegius WagonRegiusace VanRushScepterScepter WagonSeraSientaSoarerSparkySprinter CaribSprinter CieloSprinter MarinoSprinter SedanSprinter TruenoSprinter VanSprinter WagonStarletSucceedSucceed VanSucceed WagonSupraTercelTouring HiaceTownace NoahTownace TruckTownace VanTownace WagonToyoaceToyoace Route VanToyoace Urban SupporterToyota OthersVanguardvellfireVerossaVista ArdeoVista SedanVitzVoltzVoxyWill CyphaWill ViWill VSWindomWishTOYOTA OthersAygoBlizzardCarina SurfCarina VanCoaster RCorolla AltisCorolla VersoCorona CoupeCorona VanCressidaEchoFJ CruiserFortunerHighlanderHilux SW4IQKijangMatrixOriginPicnicPreviaScion 4RunnerScion TCScion XAScion XBScion XDSequoiaSiennaSiennaStarlet VanTacensSPYRISVE200 egiusace CommuterAquaSambar TruckPasso SetteMU WIZARDAD EXPERTJUKENew PandaWizardBACKHOEMINI BACKHOEAerio SedanFit AriaCruzeErgaLegacy LancasterN BOXDualisFestivaFestiva Mini WagonSequoiaPronardCaballCoupeV70XCMULaser LideaSplashImpreza AnesisHSC-1500LINCOLNRyogaGrand StarexNew Супер Aero CityAero TownVelosterI30M3M5M6Inspire960CabstarSplashAero BusMarchFredaBoon LuminasPrius AlphaRainbow Star4RunnerTT RoadsterX1MDXTreziaMS030Freed SpikeKubota OthersCR-ZJ100 TruckSmart KDEXMITOSAIDelica D2DOUBLE SIXFit Shuttle HybridPassat CCImpreza G4Fit HybridImpreza SportsRexton WLatioSPARKRayXC60ELEMENTLancer Evolution IXQ5Ranger2COSMOS BUSSpace Runner RMCabrioMWSmartRangerCross GolfTraviqFreed Hybrid_Auto Детали_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Автозапчасти_Авто Parts_Auto PartsSkyline CrossoverMonkey850 EstateMondeo WagonLet в 2KSR-2Live DioSuper DioJog AprioAlpinaGLK-ClassCX-5Leaf86BRZVulcanComsGraceCBR1000RRT-MAX500TW200KDX125SRTOA OthersNV200Vanette WagonCX-3Fuji OthersTOURINGFit ShuttleSEROW 225TDR250250TRTundraNoda OthersSolioA1Camry HybridSoulInsight Exclusivei-MiEVOutlander PHEVSakai OthersSpadeEscape940 EstateSUPER CUB 50 FiQ3250SBVERDEZOOMERXL250 DegreeLittle CubD-TRACKERCREA SCOOPYDioAX-1FTR223Let-х 4 PaletteDJEBEL125VinoSEROW 225WETrickerDragStar400CTTL2100TS2210TX1510L2000GL21L1-20DYM2001YM2010D1500IIM1502DE15Passat AlltrackIseki OthersLEAD100SUPER КУБ 50TodayGIORNOGIORNO CreaXLR250RXTZ125DragStar ClassicLet в 4B6000ZL2002L1-185DL1802DTB1502DTB1902DT1500YM2210BYC70D1600D1500V700CFTA357TX1000TU130FTU150FYM1300DYM1100DYM1500B1502MB7100L1500DTL1501ZB600E14E16C144ST1420M1803DL2002DTNF110-LHB148K5 (Optima) KixPC75UU-1TL1-26DFD18TFD30T5FBC15B27VI015YA95CivicAero SpaceAtex OthersKugaAero BusE14DTX1000FB7000TU150FZL1501DTB7000Virago250SERO W 225CellDR250 SHDJEBEL200GB250 CLUBMANMAGNA250STEEDELIMINATOR250 SEESTRELLA RSDenyo OthersGalamioINTRUDER 400 CLASSICSHADOW400Virago400Airman OthersSuper Дельфин ProfiaMinicab BravoImpreza XVTS1610T250E23YM2000BFX26L2601MGBZL1802DT-MNoah HybridYM1300YM2210DTS2500TL2100FTU217FTX155FGT-5L1-205K850-LL1-245L1-265MT27C174N249SprinterUH04-7FG14C-20WA10-1L3202DTFD15FD18DFD20TFG35ADFG20N5I30CWNXVezelCeresVRSCDX1250 SPDragStar 250SQ54 SeriesRS72 SeriesB4D5CR250RFAZEXR250 MotardXL250R Париж DAKARSHADOW400 SLASHERF800STR1100RGSR 400VX 800DR-Z400 SMMAJESTY 400XJ6 DiversionDragStar 1100 CLASSICFZS 1000SR400-3XJR1200KLX250-2Vulcan 400 DRIFTERW800OrlandoTurbo16feet18feetG650XMOTOCBR600F-3CBR1100XXER-6FRF900RINAZUMA1200TDM850-2XT250XCLA-ClassX-Trail HybridK7XR400RCB1000SFPS250K1200RSSKYWAVE250S-2K3AFRICATWIN750-2CB400SSVFR800-2D-ОТСЛЕЖЫВАТЕЛЯ XSKYWAVE250MMAJESTY 400-2V-MAXAR1000M-1ToppoThe BeetleZ250L1-235DSS80-CGETS3910FMT205GF400GF4WDCamry SolaraCamry SolaraR ДЕВЯТЬ TR1200GS1199panigale SFLHR1800CVOFLHRSE1 800CVOFLHTCU1580FLHTCU1690FLHTCUSE1800CVOFLSTC1450FLSTC1580FLSTC-I1450FLSTF1450FLSTF1580FLSTFB1580FLSTN1580FLSTNSE1800CVOFLSTSB1580FLTR-I1450FXDB1580FXDL1580FXDWG1450FXDWG1580FXLR1340FXSB1580FXST1450FXST1580FXSTB1450FXSTB1580FXSTC1580FXSTD1580FXSTSB1340XL1200CAXL1200R-IXL1200VXL1200XXL883LXL883L-IXL883NXL883RCB1100CB1300SFCB1300SF-2CB400SFV-4CBR600RR-3FORZA SIFREEWAY-2GL1800HORNET250NC700XNM4-0PCX125PCX150Valkyrie RuneVFR800VTX1800KSR110NINJA250NINJA250RNINJA400NINJA400RVULCAN 900 CLASSICZ1000-3ZX-10RZX-12RZX-6RF3F4RRGSX1400GSX-R1000GSX-R750HAYABUSASKYWAVE250S-3SKYWAVE400-3SKYWAVE400-3SSKYWAVE650SKYWAVE650LXFZ-1 FAZERT-MAX530V-MAX-2WR250RXV1900CU RAIDERYZF-R1RS5L1-215GL220MT160AF-30TL2301FL2002SF-GB160Discovery 4GranbirdFXD1580VFR1200F1400GTRNINJA1000ZZ-R1400BANDIT1250SMT-09DIAVEL CARBONT-MAX500-3C650GTCBR250R-3DL650Z1000-5NINJA h3CB1300 SUPER BOL D'ORSHADOW750-2XJR1300GEMMA250STREETFIGHTER SXB12R FIREBOLTZX-14RAMAJESTY250-4GRASSTRACKERMS2R DN-01VTR250-2ST250CRF250LCB400SFV-3CL400GLADI US650ACRF150FXR250-2XR250-3XR250-4XR250-5WR250XTMZ303SLSylphyCB400SS-EDragStar 400 ClassicINAZUMA 400ESTRELLACB1000SF T2FORZA ZGSX-R600KLE250FZ400STEED 400SHADOW750-3FXSTC1340ValkyrieDragStar 1100Z1000-4FLSTC1340NINJA1000AFZ6-SGL1500F650GSXT660XTR650 TerraXL250SMAJESTY250CDT200WR-2KLX250XR250RXLR250R-4Virago1100R1100RSCB750-2VT1300CXGRASS ОТСЛЕЖЫВАТЕЛЯ BIGBOYTivoliEX35L1-33L1-255GL35GL40GL43GL46GL53GT-3GT-8SIAL23F-180F4600F6000F6600F8000F8700K1100LTFZ8-SACBR900RR-3FJR1300AZZ- R1100-2X4XR600RVULCAN 1500 CLASSICW650SR400-4ER-6NINTRUDER 750EC-03VT400SFLSTF1340HORNET900Hyper Motard 1100SVTR1000FX11VULCAN 1500STEED 400VLSTW225SEROW 225-2BANDIT1200SFrontierLiberoAccord HybridFuga HybridUniverseMira ESVSTORM1000GSR750CBR600RRNC700SSpacia690DUKE701 ENDUROMONSTER 696Diaveldark 1200CRF1000 AFRICATWINBRUTALE 800Velsys 650ForteNC750Xup! 208KoleosMegane EstatePamaxJ100 VanCorollaRhinoC-HRL400Avensis VersoVarioRooxOthers5008N-WGNE2200Hi-DeckerAtenza Wagon75CFTaroToko OthersEcolinerMobile PhoneBlue RibbonZes т SparkCLG508Subaru 360HimedicMinicab MiEVMAXCRUZPixis EpochS'elegaRange Rover EvoqueI3Buick TerrazaPunto EvoQASHQAITRAXI40XENONK-15002008K9h300ALPHEONZagatoSM6QM3Aero StarNiroTraverseSpace ArrowASLANAsteropeSTONICLevorgWireless Паровой ironPixis TruckLatioUrban Cruiser3008StingerVellfire HybridYpsilonDelica D3CubicSPORTRIDERWindHustlerYF SonataPixis VanAxela HybridYaris VersoCCSuper CruiserB5000SB5000DB5001SB5001DB6000SB6000DB6001SB6001DB7000SB7000DB7001SB7001DB1200SB1200DB1400SB1400DB1402SB1402DB1500SB1500DB1502SB1502DB1600SB1600DB1702SB1702DB1902SB1902DB-10DB-40dB-52DB1-14DB1-15DB1-16DB1-17DXB-1DX20DX24DA-13DA-14DA-15DA-17DA -19DA-155DA-175DA-195DL1500SL1500DL1501SL1501DL1511SL1511DL1801SL1801DL1802SL1802DL2000SL2000DL2002SL2002DL2200SL2200DL2201SL2201DL2202SL2202DL240SL240DL2402SL2402DL2600SL2600DL2601SL2601DL2602SL2602DL280SL280DL2802SL2802DL3001SL3001DL3202SL3202DL3500SL3500DL3600SL3600DL3602SL3602DL4202SL4202DL1-18SL1-18DL1-20SL1-22SL1-22DL1-24SL1-24DL1-26SL1-26DL1-28SL1-28DL1-33SL 1-33DL1-43SL1-43DL1-45SL1-45DL1-195DL1-205DL1-215DL1-225DL1-245DL1-255DL1-265DL1-275DL1-285DL1-295DL1-315DL1-325DL1-345DL-R18-435DL-R1-325DL1-345DL-R18DL1-325DL1-345DL-R185DL1-325DL1-345DL-R185DL1 R26DL1-R28DL1-R33DL1-R43DL1-R45DL1-R185DL1-R195DL1-R205DL1-R215DL1-R225DL1-R235DL1-R245DL1-R255DL1-R265DL1-R245DL1-R255DL1-R265DL1-R275DLDL1-R285DLDL1-R285DLD1-R285DLD1-R285DLD1-R285DLD1-R285DLD1-R285DLDL1 DYM2810SYM2810DYM2820SYM2820DYM3000SYM3000DYM3010YM3010DYM3110SYM3110DYM3220SYM3220DYM3810SYM3810DYM4220SYM4220DYM4500DF13SF13DF14SF14DF15SF15DF16SF16DF17SF17DF18SF18DF20SF20DF22SF22DF24SF24DF5DF6DF7DFX13SFX13DFX14SFX14DFX15SFX15DFX16SFX16DFX17SFX17DFX18SFX18DFX20SFX20DFX22SFX22DFX24SFX24DFX26SFX26DFX28SFX28DFX30SFX30DFX32SFX32DFX42SFX42DF145SF145DF155SF155DF165SF165DF175SF175DF185SF185DF195SF195DF215SF215DF235SF235DF255SF255DF265SF265DF395DF605DF180SF180DF190SF190DF200SF200DF210SF210DF220SF220DF230SF230DF250SF250DFX165SFX165DFX175SFX175DFX195SFX195DFX215SFX215DFX235SFX235DFX255SFX255DFX265SFX265DFX285SFX285DFX305SFX305DFX335SFX335DFX435SFX435DKe-2DKe-3DKe-4DFF145SFF145DFF155SFF155DFF165SFF165DFF205SFF205DFF225SFF225DFF245SFF245DAF15SAF15DAF16SAF16DAF17SAF17DAF18SAF18DAF22SAF22DAF24SAF24DAF26SAF26DAF28SAF28DAF30SAF30DAF33SAF33DFV200SFV200DFV220SFV220DFV230SFV230DFV250SFV250DFV270SFV270DFV280SFV280DFV310SFV310DFV330SFV330DFV430SFV430DRS24SRS24DRS27SRS27DRS30SRS30DRS33SRS33DTX1000STX1210 STX1210FTX1300STX1300FTX1400STX1400FTX1410STX1410FTX145FTX1500STX1500FTX1510STX1510FTS1610STS1610FTS1700STS1700FTS1910STS1910FTS2200STS2200FTS2220TS2220FTS2202STS2202FTS2205STS2205FTS2210STS2210FTS2400STS2400FTS2500STS2500FTS2510STS2510FTS2800STS2800FTS2810STS2810FTS3110STS3110FTS3510STS3510FTS3910STU1400STU1400FTU1401STU1401FTU1500STU1500FTU1501STU1501FTU1600STU1600FTU1601STU1601FTU1700STU1700FTU1701STU1701FTU1900STU1900FTU1901STU1901FTU2100STU2100FTU2101STU2101FTL1900STL1900FTL1901STL1901FTL2100STL2300STL2300FTL2301STL2500STL2500FTL2501STL2501FTL2700STL2700FTL2701STL2701FTL2800STL2800FTL2900STL2900FTL2901STL2901FTL2905STL2905FTL3200STL3200FTL3201STL3201FTL3205STL3205FTL3700STL3700FTL4205FTU120STU120FTU125STU125FTU127STU127FTU130STU135STU135FTU137STU137FTU140STU140FTU145STU145FTU147STU147FTU150STU155STU155FTU157STU157FTU160STU160FTU165STU165FTU167STU167FTU170STU170FTU175STU175FTU177STU177FTU180STU180FTU185STU185FTU197STU197FTU200STU200FTU205STU205FTU217STU220STU220FTU225STU225FTU237ST U237FTU240STU240FTU245STU245FTU257STU257FTA207FTA210FTA215FTA227FTA230FTA235FTA247FTA250FTA255FTA260FTA263FTA267FTA270FTA275FTA285FTA287FTA290FTA295FTA310FTA317FTA320FTA325FTA337FTA340FTA345FTA370FTA375FTA410FTA435FTA437FTA450FTA455FTF3FTF5FTF15FTF17FTF19FTF21FTF23FTF26FTF193FTF223FTF227FTG21FTG23FTG25FTG27FTG29FTG31FTG33FTG253DTM15TM17FT5000FT5010FT6010FT7010FT8010FT9510FT10510FD1100SD1100DD1300SD1300FDD1350SD1350FDD1450SD1450FDD1500SD1500DD1550SD1550DD1600SD1600DD1650SD1650DD1800SD1800DD1850SD1850DD2000SD2000DD2050SD2050DD2300SD2300DD2350SD2350DD2500SD2500DD2600SD2600DD2650SD2650DD3000SD3000DD3200SD3200DD3250SD3250DD3850SD3850DD4000SD4000DMT13SMT13DMTX13SMTX13DMT14SMT14DMT15SMT15DMTX15SMTX15DMT16SMT16DMT17SMT17DMT18SMT18DMT20SMT20DMT21SMT21DMT22SMT22DMT23SMT23DMT24SMT24DMTX24SMTX24DMT25SMT25DMT26SMT26DMT27SMT27DMT28SMT28DMTX28SMTX28DMT30SMT30DMT32SMT32DMT33SMT33DMT42DMT46DMT1001SMT1001DMT1301MT1301DMT1401MT1401DMT1601SMT1601DMTE1800SMTE1800DMT1801SMT1801DMTE2000SMTE2000DMT2001SMT2001 DMTE2200SMTE2200DMT2201SMT2201DMT2501SMT2501DMT2801SMT2801DMT3201SMT3201DMT4020SMT4020DMT135SMT135DMT155SMT155DMT165SMT165DMT160SMT160DMT170SMT170DMT185SMT185DMT190SMT190DMT205SMT205DMT200SMT200DMTX225SMTX225DMT220SMT220DMT225SMT225DMTX245SMTX245DMT240SMT240DMT241SMT241DMT245SMT245DMT265SMT265DMT271SMT271DMT285SMT285DMT305SMT305DMT335SMT335DMT360DMT460DMT246DMT306DMT201E14SE15SE15DE16SE16DE18SE18DE21SE21DE22SE22DE23SE23DE25SE25DE28SE28DE152SE154DE182SE184DE202SE204DE222SE224DE232SE234DE262SE264DE322SE324DE392SE394DE1802SE1804DE2002SE2004DE2302SE2304DE2602SE2604DE2802SE2804DC142SC144DC172SC174DCX13SCX13DCX14SCX14DCX16SCX16DCX18SCX18DCX19SCX19DN179SN179DN189SN189DN200SN200DN209SN209DN229SN229DN239SN239DN249SN249DN279SN279DN329SN329DNX19SNX19DNX21SNX21DNX23SNX23DNX25SNX25DNX27SNX27DNX29SNX29DNX35SNX35DNX43SNX43DNX200SNX200DNX220SNX220DNX240SNX240DNX260SNX260DNX280SNX280DNX300SNX300DNX320SNX320DJF1SU1100SSU1100DSU1140SSU1140DSU1300SSU1300DSU1301SSU1301DSU1340SSU1340DSU1341SSU1341DSU1500SSU 1500DSU1540SSU1540DSD1400SSD1400DSD1500SSD1500DSD1603SSD1603DSD1643SSD1643DSD1800SSD1800DSD1803SSD1803DSD1840SSD1840DSD1843SSD1843DSD2000SSD2000DSD2003SSD2003DSD2043SSD2043DSD2205SSD2205DSD2200SSD2200DSD2203SSD2203DSD2240SSD2240DSD2243SSD2243DSD2403SSD2403DSD2600SSD2600DSD2603SSD2603DSD2604SSD2604DSD2640SSD2640DSD2643SSD2643DSD2803SSD2803DSD2843SSD2843DSD3000SSD3000DSD3203SSD3203DSD3243SSD3243DSD3040SSD3040DSD3903SSD3903DSD4000SSD4000DSD4003SSD4003DSD4643DSL1303SSL1303DSL1503SSL1503DSL1543SSL1543DSL1603SSL1603DSL1643SSL1643DSL1703SSL1703DP145SP145DP15SP15FP155SP155DP165SP165DP17SP17DP175SP175DP185SP185DP19SP19DP21SP21DS313SS313DS315SS315DS700SS700DS1000SS1000DS325ASS325ADS1500SS1500DS330ASS330ADSP1500SSP1500DSP1540SP1540DSP1700SSP1700DSP1740DAF15SAF15DAF16SAF16DAF17SAF17DAF18SAF18DD195SD195DD208SD208DD215SD215DD228SD228DD23SD23DD235SD235DD238SD238DD258SD258DD26SD26DD265SD265DD23MSD23MDD275SD275DD278SD278DD28SD28DD288SD288DD295SD295DD318SD318DD32SD32DD335SD335DD338SD338DD34SD34DD43SD43D D435SD435DD438SD438DSP1540SGhostKJ11ShuttleV60Impreza XV Hybridek CustomSonicFlair WagonRCZJCPixis JoyMira CocoaCaravan Wagon3930SDS3i45Super V8Pleo PlusEsquireS7 SportbackDayzDayz RooxGLA-ClassFB15DKonaCastS1200SPixis SpaceGB16EX-8RoomyKe-40NZ235MMT16MF135SFlairN BOX PLUSNV150 ADTankThorComsek SpaceGLE-ClassVitz HybridCima Hybrid7inch Android TabletRanger ProScaniaRainbow IIBlue Лента IIBlue Лента CityAero QueenPonchoAero AceAero KingForward JustonForward MaxGiga MaxErga JErga MioJourney JGalaScrum TruckFM TractorFM CargoFH TractorFH CargoX4A7Q2SolatiSANDEROGrand ModusE280YM177SE324X24F70DMebiusKizashiAtlas MaxSLCKraftCD193R55SOLAR55Tanto ExeSpace Runner AGT19GT21GT23GT26GT30Eclipse CrossS-CROSSU-008U-010U-017U-020U-030U-035U-055KX-57EC55BEC55BPROEC55CEW55BECR58ECR58DEC60EEW60CECR88ECR88DEC140EC140BEC140CEC140ELEW140EEW145BEW145BPEC160ELEW205EEC210BEC220DEC250ELECR145CECR235CLEC290BEC290BLCEC290BPEC290LCEC300DEC300DLEC300ELEC360BEC360BLCEC360BPEC360CEC360CLEC380DLEC380ELEC460BEC460B LCEC460BPEC480DEC480ELEC750ELEC700BLCN-ONEType1Move CanbusD43CXZ58RCS130140h420D345CL533C533E962GII980FCS531CS533CCS533DCS533ECS563CD10ND7FD9NM313DSR250D50SDCP32DCP36-3DCP36DLD50MEGA300IIIS180WS300LCS300LC VS450LC VS50S55S55 VS55 В GOLDS55 В SuperS55 VSDX300LCDX500LCDX140WDX140W ACEDX140LCDX300LCADX55WDX55DX55MT ACEDX210WDX420LCDX55ADX60RT550252DCA250DCA551DECP45CXECP55CSECP60CSRT530EFD30BFG85AFR15BHG85B80DHSL650HW145HW210HX140LCHX300HX60HX60WR1300WR1400LCR140LCR140WR16R210WR2200LCR3000LCR300LCR5000LCR520LCR555R60CRR80CRLX15LX30LX352MA3MX255LSMX292MX292LCMX3AMX55MX55ASG15SL10SL207020ATA4640JJH-M36JJ-M5015JP-5M4315JX-h4717JX-M3315JX-M3615RT250SK20SR 3GD661A1PC450LC 8KX57U008U17U20U30U55HTC835L85TR-250M-510TONA30CA40CD460BLCEC140BLCEC140CLEC290EC300CEC360EC55EC66ECR58PLUSEW140CEW140DEW145BPROEW205DEW60EMX292LCVCEL180HVIO35VIO558240T3930AF310AF350AF400EF475F505DT5310GT3GT5MT1301SMT1401SKENBO-600MST-2200Furukawa OthersX BeeMT156DKL270DA4 Allroad QuattroSD1540DGL221DPrius СА-10DCYGNUS Х СРВ TR250Flair CrossoverFullbackF510Liteace TruckLiteace VanTownace TruckTownace Van15002500DusterLineaPatrolLKZ / NS65C-GPFS / F6ESS80 / YC80SSA50 / YKD800YA5 / FA55-EYA60 / NFAD6YA80 / NFAD8YC5 / F5EYC5 / S75YC50 / SS50YC6 / F6EYC60 / SS60YC650 / HS6-KYC70 / SS70YC70 / SS70CYC750 / HS75-LYC80 / SS80YC80 / SS80C -GYC850 / HS8-KEYC90 / SS90YC90 / SS90CYC90 / SS90C-GYC950 / HS9-KYG50G / SS50YH70 / NF80-LAYH800 / SS80YHC700 / NF80-LAYHC800 / NF80YHS800 / SS780LYS80T / SS80YHS800 / HS80LYS80G / SS80YCY50 / SS760S80 / SS80YHS800 / HS80LYS80G / SS80YCY50 / SS760YS80 / SS80YC50 / SS780YS80 / SS80YC50 / SS780 / SS80YC50 / SS780 / SS80YX50 / SS700 / SS780 / SS80YX50 / SS700 / SS7000 / SS80Y50 / H70CT533 / NK7CT534 / NM7CT552 / SD6CT553 / M85K-900 / GA100K1-70 / EA8-KK1-8 / EA10-2-KK1-85 / EA11K550 / GA65K600 / GA75K62 / E60-KK7 / E7K700 / ER65K7008 / GA85K8 / ER75KRA75 / EA8-K2KRA85 / EA10-KZKU72 / NFA70M80 / ER75TD502 / Е50-T2ZK1-75 / EA10-KZK6 / ER550KA700 / ER65KA80 / NFAD8-LKL901 / SS90CKS650 / SS50CGKX750 / H70-LHA / F7CEM2DS4AVANZA AUTOS650SM1101DM1200SM1501SM1503DM1600SM1803DM2001DMS23DMSX13DSpace бегунка ENGB14GB18TF173FVenzaPleo NestaATTRAGEN360Micrac С + CLucraMT2300DS660L2202Prius PHVAddressV50XVGM73GiuliettaGLC -КлассEF326VEF328VEF330VEF334VE F338VEF342VSolio BanditJadePALISADESKYWAVE250SS-2A3 СЕДАН

Год Мин. Год197919801981198219831984198519861987198819891911992199319941995199619971998199920002001200220032004200520062007200820092010201120122013201420152016201720182019to Максимальный год197919801981198219831984198519861987198819891911992199319941995199619971998199920002001200220032004200520062007200820092010201120122013201420152016201720182019 Цена Минимальная цена 500 долларов США 750 долларов 1000 долларов США 1500 долларов США 2000 долларов США 2500 долларов США 3000 долларов США 3500 долларов США 4000 долларов США 4500 долларов США 5000 долларов США 6000 долларов США 7000 долларов США 8000 долларов США 9000 долларов США 10 000 долларов США 15000 долларов США Максимальная цена 500 долларов США 750 долларов 1000 долларов США 1500 долларов США 2000 долларов США 2500 долларов США 3000 долларов США 3500 долларов США 4000 долларов США 4500 долларов США 5000 долларов США 6000 долларов США 7000 долларов США 8000 долларов США 9000 долларов США 10000 долларов США 15000 долларов США 20 000 долларов США
.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *