8-900-374-94-44
Новые неоновые ночники
Новые неоновые ночники
Мы хорошо потрудились и сделали новую линейку неоновых ночников ручной работы. Если не знаете что подарить — подарите такой ночник. Это будет необычно и в прямом смысле слова — ярко!
Наш неон засветился в клипе!
Наш неон засветился в клипе!
Всегда приятно увидеть результаты своей работы в жизни. В такие минуты понимаешь, что это все «не просто торговля». Ты помогаешь, консультируешь, находишь товарам новые способы применения и благодаря им гости магазина могут реализовать свои фантазии.
Рисуем в черном блокноте!
Рисуем в черном блокноте!
Рисунок в блокноте с черными страницами смотрится совсем иначе, и порой даже самый простой скетч воспринимается как маленький шедевр.
Блокноты из фетра, дерева, с черными страницами и другие новинки
Блокноты из фетра, дерева, с черными страницами и другие новинки
К нам приехал новый завоз блокнотов. Модели из фетра (на ощупь, как валенки), тетради с черными страницами, в деревянной обложке и другие интересности. Встречаем!
Фонари для свечей Часть 2
Фонари для свечей Часть 2
Вторая часть видео-презентации нового завоза фонарей для свечей. Модели из дерева, металла, стекла и витражей.
Фонари для свечей Часть 1
Фонари для свечей Часть 1
К нам приехали фонари для свечей! От разноообразия дизайнов разбегаются глаза, поэтому мы разбили видео-презентацию на две части.
Представляем Вашему вниманию первую часть.
Еще одна композиция во флорариуме
Еще одна композиция во флорариуме
Интернет пока не позволяет пощупать изделие, однако мы стараемся снимать так, чтобы была видна каждая деталь. Перед вами несколько моделей флорариуммов для цветов и небольшой пример использования.
Свеча на аккумуляторах из нашей мастерской
Свеча, в которой не нужно менять батарейки, которая не испортит интерьер своим китайским видом, была разаботана в нашей мастеркой. Подробнее в этом видео.
История одного рюкзака
История одного рюкзака
Жил-был рюкзак.
Он очень любил своего хозяина. И однажды они вместе решили насладиться красивым видом и выпить чашку чая в приятном одиночестве.
Мастер-класс по флорариумам от Тани Вербы
Мастер-класс по флорариумам от Тани Вербы
Как и обещали, выкладываем полный мастер-класс по флорариумам от Тани Вербы. В нем мы расскажем, как сделать красивую композицию из растений, а так же, как использовать флорариум в качестве шкатулки для колец.
Флорариумы для колец и растений
Флорариумы для колец и растений
К нам приехали очаровательные флорариумы для колец и растений. Мы сразу попытались сделать из них нечто интересное. Представляем Вашему вниманию, что у нас уполучилось! p.s. Очень скоро на нашем канале выйдет полноценный видео-урок по флорариумам.
Блокноты из натуральной кожи
Блокноты из натуральной кожи
Коллекция крутых блокнотов из натуральной кожи, дерева, крафтовой бумаги.
Светящаяся буква из гирлянды своими руками
Светящаяся буква из гирлянды своими руками
Сегодня мы расскажем как сделать своими руками красивую светящуюся букву на основе гирлянды. Данный метод идеален, когда вы хотите с минимальными затратами сделать светящуюся объемную конструкцию.
Коллекция подставок для вина
Коллекция подставок для вина
Несколько подставок для вина ручной работы. В ближайшее время обещаем расширение ассортимента:)
Полигональные модели из бумаги
Полигональные модели из бумаги
Новый выпуск lights-market.
Светящиеся камушки! Приветствуем новинку)
Светящиеся камушки! Приветствуем новинку)
Красивые светящиеся камушки, которые можно использовать для дизайна участка, аквариумов, цветочных горшков и т.д.
Неоновые таблички ручной работы
Неоновые таблички ручной работы
Крутые неоновые таблички ручной работы, которые сделали наши друзья. Приветствуем)
Новые вывески из нашей мастерской
За месяц поднобралось несколько новых проектов.
Рады их представить) Делается с помощью обычного неона, который можно приобрести на нашем сайте.
Наша мастерская выпустила новые коробочки
Наша мастерская выпустила новые коробочки
Урррра) Представляем Вашему вниманию новую коллекцию крафтовых деревянных коробок для цветов, бутылок, орехов — чего угодно! Сделано в России!
Маркерные штендеры для кафе
Маркерные штендеры для кафе
На склад поступила новая разновидность досок для кафе — маркерные штендеры. Для рисования на них используются специальные маркеры, такие же как и для LED досок. Изображение получается очень ярким и насыщенным.За последние три десятилетия BMW M5 удалось получить завидное звание «Пятиместный суперкар» и непревзойденную ауру благоговения и мистики.
Конечно, некоторые энтузиасты Audi и Mercedes-Benz могут не согласиться с этим, но …
… последняя версия BMW M5 F90 с двигателем S63B44Tx содержит набор качеств, которые придают названию «Суперкар» больше доверия, чем когда-либо. 600 л.с. и 750 Нм крутящего момента плюс время разгона: 0-100 км/ч за 3,4 секунды; до 200 км/ч за 11,4 секунды и максимальная скорость 250 км/ч, а c пакетом V-Drives до 305 км/ч. Конечно же Суперкар, да еще самый быстрый и мощный!
Но самое главное, это революционная модель, так как первый раз в истории BMW M5 получила полный привод xDrive, который может быть отключен в угоду заднему, что наверняка понравится любителям классических BMW. Об этом можно сказать кратко — много тяги, с возможностью для скольжения.
Трансмиссия BMW M5 шестого поколения позволяет выбрать три режима работы стабилизационной системы распределения потенциала 4WD/MDM, 4WD Sport/DSC и 2WD/DSC off. В последнем режиме автомобиль становится заднеприводным. 4WD Sport/DSC улучшает управляемость авто на повышенных скоростях.
Двигатель BMW M5 F90 — 4.4-литровый Twin-Turbo V8 S63B44Tx, фантастическая отзывчивость и мощность которого сочетается с его способностью реветь. Шум, производимый M5, возможно, немного скромнее, чем крик гиперкара, но он все же достойный — громкий и глубокий. Предыдущая версия двигателя BMW 5M (S63B44T0) выдавала 560 л.с. и 680 Нм, теперь развивает 600 л.с. мощности и 750 Нм крутящего момента, что удалось добиться за счет установки новых турбокомпрессоров, увеличению до 350 бар давлению впрыска, улучшенному интеркулеру и высокопроизводительному маслонасосу.
Автомобиль серьезно напичкан электроникой. Почти все в центральной части консоли чувствительно к прикосновению — от клавиатуры, на которой расположены переключатели режимов движения, до верхней части колеса прокрутки iDrive и органов управления кондиционером. Приборная часть также полностью цифровая.
Даже у ключа есть сенсорный экран, способный сказать вам, сколько топлива у вас осталось, закрыты ли двери и тому подобную информацию.
Совокупность инженерных и технологических решений приводят в восторг. Благодаря переходу на полный привод и более легкое рулевое управление BMW M5 стал невероятно плавным и управляемым. Подвеска не дребезжит, даже в более жестких режимах, но при этом чувствуется ощутимая связь с дорогой.
У компании Morendi на данный момент уже есть ряд решений для увеличения мощности и улучшения динамических характеристик BMW M5 F90 с помощью модификации программного обеспечения данного автомобиля. Программы Morendi Stage 1,Stage 2, Stage 2+ и Stage 3 позволяют повысить мощность до 900 л.с. и 1000 Hm. В них использованы продвинутые алгоритмы контроля крутящего момента для максимальной отдачи при минимально возможной нагрузке на двигатель и АКПП.
Возможны следующие результаты:
🔲 Штатно: 600лс / 750Нм
🔲 MORENDI Stage1: 720Hp / 900Nm
🔲 MORENDI Stage2: 760Hp / 900Nm
🔲 MORENDI Stage2+: 850Hp / 1000Nm
🔲 MORENDI Stage3: 900+Hp /1000Nm
🔌 Прошивка через диагностический разъем
🏁 Без ограничения скорости
⏱️ Улучшенная реакция
🔥 Возможно добавить Отстрелы (Burble, popcorn)
>>> Чип тюнинг BMW M5 4.
4 V8 Bi-Turbo (600 л.с.) — в нашем каталоге.
TopCar Design — международная компания по разработке и производству компонентов тюнинга автомобилей люкс-класса с собственным уникальным дизайном. Компания существует с 2004 года, входит в пятерку ведущих мировых тюнинг-ателье и на данный момент имеет свои представительства в более чем 20 странах мира.
В 2004 году, во времена, когда мир тюнинга люксовых автомобилей только проходил своё становление, российский бизнесмен Олег Егоров основал в Москве компанию TopCar Design. С тех пор команда компании начала доводить серийные фабричные люксовые автомобили до идеала, делая их уникальными и позволяя взыскательным клиентам иметь индивидуальный дизайн автомобиля, а также улучшать его отдельные характеристики.
Читать далее >>Основным направлением работы компании являются разработка уникального дизайна автомобилей, аэродинамических элементов и самостоятельное производство изделий из карбона и кевлара по самым современным технологиям.
Согласно современным трендам в тюнинг-ателье TopCar Design аэродинамические обвесы проектируются таким образом, чтобы каждый клиент мог выбрать и установить только те элементы из общего числа, которые ему нужны. Другими словами: каждый аэродинамический обвес — это набор независимых элементов, каждый из которых сам по себе может быть тем самым акцентом в экстерьере автомобиля, который нужен клиенту без лишних на его личный вкус деталей. В сочетании с разными финишными покрытиями деталей это даёт возможность собрать свою собственную уникальную конфигурацию.
Ателье ориентировано на люксовый сегмент автомобильного рынка — это означает безупречный уровень как в самом дизайне, так и в технологиях производства. Поддерживать такую высокую планку удаётся благодаря слаженной работе лучших профессионалов в своих сферах под руководством владельца компании — Олега Егорова. Компания TopCar Design тратит значительные средства на высокие технологии и процессы разработки будущих проектов и их серийное производство.
Инженеры компании проходят все стадии разработки будущего проекта, как это делают автопроизводители: изготовление модели из макетировочного пластилина в натуральную величину, сканирование, моделирование на компьютере, расчёт аэродинамики в специальных аналитических программах, создание оснастки для серийного производства на 5-координатных станках. Подавляющая часть аэродинамических элементов TopCar Design изготавливается из карбона и кевлара вакуумным формованием — это позволяет добиться идеальной формы, гибкости и прочности, низкого веса деталей. Технология доведена до абсолюта — каждый новый элемент TopCar Design устанавливается на место стандартного фабричного элемента в те же места креплений, процесс установки очень простой, быстрый и надежный. Компания даёт гарантию на всю продукцию.
Более чем за 15 лет работы компания TopCar Design выпустила большое количество тюнинг-проектов на базе таких брендов, как: Mercedes-Benz, Lamborghini, Porsche, McLaren, Bentley, BMW, MINI.
Дизайн каждого проекта в ателье разрабатывается под непосредственным руководством Олега Егорова, поэтому продукт TopCar Design по праву можно назвать авторским.
Отсутствие внешних инвесторов позволяет компании сохранять независимость в дизайнерских решениях — это является основополагающим моментом для работы дизайн-ателье.
Новые времена рождают новые возможности. Компания TopCar Design расширяет не только модельный ряд, но и подход к бизнесу — ателье разрабатывает, производит и поставляет высококачественные карбоновые элементы для ряда зарубежных компаний-партнеров, это выводит бизнес на новый уровень, сохраняя при этом традиционное направление — автомобильный дизайн.
В настоящий момент TopCar Design — это международная компания с дилерами в более чем 20 странах мира. Ежегодное участие в международном автомобильном салоне в Женеве — уже традиция и отличная возможность получить прямую связь между владельцем компании и клиентами со всего мира, многие из которых приезжают на лучшее автомобильное шоу мира.
Большие планы TopCar Design на будущее дисциплинируют и мотивируют доводить все бизнес-процессы до идеала — это гарантирует безупречное качество продукта, подкреплённое накопленным опытом и самим именем бренда TopCar Design.
Как сделать быстрый тюнинг автомобиля? Транспортное средство является неотъемлемой частью каждого современного человека, который живет в достаточно быстром темпе. Но, в состоянии материальных трудностей, в последнее время постоянных, не каждый может позволить себе поменять автомобиль на новый, либо обратиться за дорогостоящим профессиональным тюнингом.
Но не стоит расстраиваться раньше времени, ведь совершенно спокойно можно с малыми вложениями преобразить любой автомобиль и сделать это самостоятельно.
Что же можно сделать быстро для преобразования машины? Попробуем дать исчерпывающий ответ на данный вопрос.
Для того, чтобы определиться с необходимым арсеналом аксессуаров, стоит изначально продумать, что именно нужно поменять в авто. Чаще всего – это автомобильные кресла, а точнее их обивка. В процессе использования любого транспортного средства, обшивка сидений быстро изнашивает и приобретает не очень привлекательный вид.
Это объясняется тем, что на нее может попадать разная жидкость – кофе, чай, газированные сладкие напитки и т.д. Не все пятна могут отстираться. Кроме того, образуются блестящие потертости, которые выглядят не очень привлекательно.
Для того, чтобы преобразовать внешний вид салона авто и придать ему новизны довольно быстро и недорого, стоит приобрести специальные чехлы на кресла. На рынке модно встретить огромный ассортимент таких изделий разный цветов и материалов, а также оригинальных и универсальных, так что каждый сможет подобрать необходимый для себя вариант.
Еще одним вариантом быстрого тюнинга является оплетки на рулевое колесо. Они не только придают рулю большего объема, за счет чего он лучше поддается рукам, но и превращает обычный, порой сильно изношенный руль, в совершенно новый и красивый атрибут и элемент салона транспортного средства. Довольно интересно такие аксессуары для автомобиля смотрятся в комплекте с накладкой на рычаг переключения передач.
Еще одним способом быстро сделать тюнинг в авто – это установить подлокотник для водителя.
Его вид изменит салон авто, а в дополнение водитель получит комфорт и удобство.
Что касается внешних изменений транспортного средства, то здесь можно использовать дефлекторы – оконные и для капота, а также различные молдинги, наклейки для кузова и т.д. Такие средства преображения автомобиля являются довольно быстрыми и не требующими особых познаний в их установки.
Такие, на первый взгляд, мелкие аксессуары для автомобиля сделают его привлекательным и интересным, без особых финансовых вложений, а также с минимальной тратой времени на их самостоятельную установку.
Каждая машина заслуживает на то, чтобы быть эксклюзивной и индивидуальной.
Понравилась статья? Поделись с друзьями в соц.сетях!На сегодняшний день мы прошли на автомобилях Volvo более 25 000 боевых кругов, не считая тренировочных заездов, – гораздо больше, чем кто-либо другой в мире.
Основываясь на нашей философии – давать ещё больше удовольствия от вождения, – мы перенесли полученные на гонках знания на наш новый продукт – тюнинг Polestar Performance.
Ваши настойчивые требования и наша страсть к автоспорту вдохновили нас на создание абсолютно нового продукта, позволяющего ещё больше расширить эксплуатационные характеристики автомобиля, — спорт-пакета Polestar. Он разработан той же командой инженеров и испытателей, которые работают с гоночными автомобилями, и полностью соответствует философии нашей инженерной школы — давать вам ещё больше удовольствия за рулём.
Основные компоненты спорт-пакета — спортивные колёса Polestar, состоящие из необычайно легких 21-дюймовых дисков и спортивных шин Pirelli P Zero; элементы подвески, включающие в себя спортивные амортизаторы и пружины; система забора воздуха с выхлопной системой из нержавеющей стали на двойных трубах большого диаметра, поставляемая со специальным задним диффузором, а вся целиком позволяющая двигателю дышать в полную силу и с особым спортивным басом.
Новые двигатели Volvo Drive-E сочетают в себе низкий уровень потребления топлива и выбросов четырёхцилиндрового агрегата с характеристиками шести- или восьмицилиндрового собрата. В результате потребовался новый подход к тюнингу. Инженеры Polestar оптимизировали настройки не только двигателя, но и трансмиссии, что позволило создать пакет Polestar Performance, гарантирующий улучшенные динамические характеристики в режимах, когда это действительно необходимо.
Чип-тюнинг автомобиля выгодно заказать на сервисе Юду: здесь зарегистрированы специалисты Москвы, которые быстро и качественно справляются с любыми профессиональными задачами. Современное электронное оборудование позволяет мастерам добиваться увеличения мощности любого двигателя при сохранении характеристик расхода топлива.
Зарегистрированные на Юду специалисты качественно выполнят чип-тюнинг двигателя любой сложности.
Они работают с автомобилями разных марок, имеющими различные типы моторов. Перед чип-тюнингом квалифицированные специалисты проводят диагностику системы, что позволяет предотвратить некорректную работу двигателя авто впоследствии.
Сотрудники компаний и частные специалисты Юду предлагают профессиональное программирование двигателя машины. Различают следующие типы услуги:
Также специалисты могут выполнить эко чип-тюнинг любых двигателей – бензиновых, газовых, дизелей. Такой тип усовершенствования двигателей позволяет добиться значительной экономии топлива при сохранении или даже увеличении мощности.
Узнайте у выбранного мастера, есть ли возможность провести такой чип-тюнинг в Москве на вашем авто. Специалист оценит степень износа двигателя и скажет, во сколько обойдется работа и как долго она будет длиться. Все рабочие вопросы вы можете обсудить во внутреннем чате Юду.
Процесс чип-тюнинга любых двигателей четко регламентирован. Зарегистрированные на Юду исполнители выполняют работу по следующему алгоритму:
После предварительного осмотра машины специалист определит перечень необходимых работ и предложит оптимальные варианты chip-тюнинга.
Усовершенствование двигателей занимает разное время — в зависимости от поставленной задачи.
На срок работы влияют следующие детали:
Обычно чип-тюнинг проходит достаточно быстро – опытный специалист сделает его за 1-2 дня. Однако при необходимости изменения конструкции потребуется более долгий срок. Некоторое время может занять заказ нужных деталей. Усовершенствование дизеля длится дольше, чем работа с бензиновым движком — в его конструкции больше различных датчиков, а система сгорания топлива сложнее.
Для выполнения работы можно обратиться к частному специалисту или в компанию. В первом случае вы получите следующие преимущества:
К частным исполнителям всегда можно обратиться за технической поддержкой транспортного средства и получить помощь в сжатые сроки.
Многие автомастера, зарегистрированные на Юду, работают ежедневно, даже в выходные и праздничные дни, и всегда готовы к срочным заказам.
Стоимость усовершенствования работы движка у мастеров Юду различается. На цену влияет совокупность факторов:
Узнайте ориентировочную стоимость работы сотрудников компаний и частных мастеров в прайсах, размещенных на сайте Юду. В них указаны средние цены — они меняются в зависимости от объёма услуг. Окончательную стоимость работы может назвать только нанятый вами специалист после диагностических процедур, проверки изношенности движка и определения ваших задач.
Если вам требуется профессиональное и недорогое улучшение двигателя машины в Москве, наймите опытного специалиста на сервисе Юду.
Оставьте заявку на этой странице, по телефону или через мобильное приложение. Дождитесь откликов проверенных исполнителей, а затем сделайте предложение наиболее понравившемуся специалисту. При выборе мастера ориентируйтесь на опыт работы, отзывы клиентов и рейтинги в системе. Эти данные, размещённые в личных профилях, помогут выбрать самого ответственного и квалифицированного исполнителя.
Все мастера используют качественные инструменты и современное диагностическое оборудование. Это позволяет им с минимальным вмешательством в аппаратную часть делать транспортное средство более мощным и экономичным. Если вам нужен быстрый и качественный чип-тюнинг, не нужно тратить время на поиски надёжных мастеров на официальных сайтах автосервисов или бесплатных досках объявлений — на Юду вы быстро найдёте проверенных и ответственных специалистов.
Закись азота, NOS (от англ. Nitrous Oxide System) или, по-простому, нитрос – это химическое соединение, являющееся дополнительным окислителем топлива.
Из-за высокой температуры в камере сгорания происходит разложении N2O на кислород и азот. Для справки: в состав закиси азота входит 36% кислорода, то есть почти в 2 раза больше, чем в воздухе. Автомобильное топливо сгорает эффективнее, давление в цилиндрах увеличивается, что и приводит в скачку мощности. При этом есть дополнительный плюс – азот препятствует детонации.
Если необходимость форсирования двигателя возникает нечасто, например, при старте или обгоне, хорошей альтернативой механическому тюнингу будет оснащение автомобиля закисью азота. Прирост «лошадиных сил» происходит только при кратковременном впрыске состава во впускной коллектор, а в остальное время машина остается обычным средством передвижения с установленной мощностью и без перерасхода топлива. Система проста в установке и может быть легко демонтирована, имеет демократичную стоимость по сравнению с другими инструментами тюнинга двигателя.
Существует 3 вида систем впрыска: сухая, мокрая, системе прямого впрыска (но это отдельная тема).
Безусловно, при выборе системы нельзя превышать возможности двигателя Субару, в противном случае возникает риск выхода его из строя.
И в заключении хотим еще раз напомнить, что планируя проведение тюнинга, необходимо составить точную схему работ, чтобы не ухудшить имеющиеся технические характеристики.
В представленном цикле статей мы постарались коснуться основных видов тюнинга двигателя Субару. Но даже в таком большом материале невозможно осветить все технические нюансы.
Если у вас появились вопросы, пожалуйста, обращайтесь. Вы всегда сможете проконсультироваться со специалистами сервиса «Субару на Лихоборке» по телефону +7 (925) 041-97-17 или электронной почте: [email protected].
По мере готовности остальных статей вы сможете перейти к нужному разделу по ссылке из Оглавления:
1. Виды тюнинга
2. Диагностика и ремонт двигателя – первый шаг к тюнингу
3. Чип-тюнинг Субару, экономично и эффективно
4.
Установка турбины Субару
5. Тюнинг топливной системы Субару
6. Настройка выхлопной системы Субару как необходимый этап для тюнинга двигателя
7. Мелкий подготовительный тюнинг
8. Тюнинг двигателя: повышение параметров надежности
9. Новый коленвал, поршни и шатуны Субару – новые возможности
10. Строкер-кит и гильзовка
11. Спортивный распредвал для Субару
12. Закись азота – быстрый результат
Последний пакет программного обеспечения включает в себя все следующее:
01.09.17 ВНИМАНИЕ: Это программное обеспечение дает вам полный контроль над определенными событиями, которые ваш двигатель должен правильно настроить для правильной работы. Неправильное использование и / или неправильная установка этого программного обеспечения может привести к снижению производительности вашего двигателя или даже к полной остановке его работы.
Для клиентов, которые не готовы обновить свой ECU до XFI 2.0, следующее обновление прошивки доступно бесплатно. Это обновление включает следующие изменения / исправления:
Смещение 6 В к измерению напряжения батареи для компенсации падения защитного диода в ECU Программное обеспечение для исходной версии ЭБУ FAST Fuel Injection ( Gray box ECU ) ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: Это программное обеспечение дает вам полный контроль над определенными событиями, которые ваш двигатель должен правильно настроить для правильной работы. Неправильное использование и / или неправильная установка этого программного обеспечения может привести к снижению производительности вашего двигателя или даже к полной остановке его работы.
Революция в сборе, анализе и мониторинге данных — только от экспертов efi из FAST.
Этот необычный новый блок работает и как электронная приборная панель, и как регистратор данных для автомобилей с системой впрыска топлива FAST XFI.
Дополнительные аксессуары, такие как акселерометр FAST и модули EGT и измеритель воздуха / топлива с двумя датчиками, могут контролироваться в сочетании с данными двигателя на основе XFI через высокоскоростную шину CAN устройства и простое в использовании программное обеспечение. Благодаря современным возможностям мониторинга и регистрации данных, устройство регистрации данных с сенсорным экраном XFI может собирать в реальном времени исчерпывающую картину того, что происходит под капотом вашего автомобиля, когда он кричит по полосе перетаскивания.
.
Если у вас есть система EZ-EFI, приобретенная в 2010 году или ранее, возможно, у вас нет самой последней базовой настройки. Для проверки выберите ИНФОРМАЦИЯ в разделе ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ОПЦИИ на контроллере. Если номер «ECU» меньше 03, у вас более старая мелодия. Если вы уже видите ECU 03, ваш ECU обновлен, и нет необходимости устанавливать это обновление.
** ОБНОВЛЕНИЕ: исправлены ошибки, при которых пользователь был ограничен более короткими журналами. Теперь пользователь должен иметь возможность воспроизводить практически любую длину назад.**
FAST выпускает FASTView, БЕСПЛАТНУЮ и простую в использовании программу для загрузки, хранения, просмотра и сравнения журналов данных по воздуху / топливу Революционный FAST Air / Fuel Meter предоставил гонщикам повсюду передовую технологию измерения воздуха / топлива.
Расширяя возможности этого измерителя, FAST создала бесплатный, простой в использовании программный пакет для владельцев, которые обновили свой измеритель с помощью модуля FAST RPM. Этот полный пакет программного обеспечения, получивший название FASTView, позволяет загружать, воспроизводить, сохранять и даже отображать данные, чтобы вы могли сравнивать журналы данных по воздуху / топливу на вашем персональном компьютере.Программное обеспечение FASTView не могло быть проще в использовании. Вся загрузка выполняется с помощью кабеля связи, входящего в ваш дополнительный комплект модуля RPM. После загрузки и сохранения вы можете использовать функцию воспроизведения, чтобы открывать журналы данных и воспроизводить их в реальном времени, или использовать функцию построения графиков, чтобы наложить их для сравнения. Воспроизведение также показывает точное истекшее время журнала данных и отображает данные не только в виде необработанного числа, но и с помощью цифровых стрелочных индикаторов, которые помогают вам определять тенденции воздуха / топлива и оборотов во время пробежки.
Самый эффективный, самый простой в настройке и самый продвинутый самонастраивающийся комплект EFI на рынке. Не требуется опыта, Dyno или ноутбука.
Оригинальный FAST ™ EZ-EFI® навсегда изменил самонастраивающийся впрыск топлива благодаря самому простому в отрасли варианту преобразования карбюратора в EFI. Теперь EZ-EFI 2.0 ® был обновлен с большим количеством функций, чем когда-либо прежде, сохраняя при этом простоту использования, не требующую ноутбука или опыта настройки.Он просто настраивается по мере движения пользователя. Его литой под давлением корпус дроссельной заслонки с восемью инжекторами оснащен датчиками OEM последней модели для обеспечения точности и долговечности, включает в себя регулировку угла опережения зажигания и может работать на этанольном топливе E85, E98 и E15, в то время как конкурирующие версии этого не могут.
Он пропускает больше воздуха, чем корпус дроссельной заслонки EZ-EFI® первого поколения, благодаря улучшенному воздухозаборнику, а новая регулировка упора дроссельной заслонки вторичного вала обеспечивает еще более точную регулировку и балансировку воздушного потока на холостом ходу. Между тем, эксклюзивный и уникальный в отрасли встроенный демпфер топливных импульсов FAST ™ обеспечивает сверхточный контроль топлива.EZ-EFI 2.0 ® также включает валы с игольчатыми подшипниками вместо втулок и интегрированную топливную рампу с переходником для более плотной упаковки. Установка включает в себя наименьшее количество соединительных проводов на рынке, в том числе новый высококачественный жгут проводов и гладкий ткацкий станок с сеткой.
EZ-EFI 2.0 ® также оснащен обновленным портативным устройством с цветным сенсорным экраном и светодиодной диагностической функцией, которая включает встроенную диагностику и световые индикаторы EZ-Test ™.
Имея автономное питание от блока управления двигателем, он имеет те же точки крепления, что и Garmin Nuvi GPS, что означает практически безграничные варианты монтажа. FAST ™ EZ-EFI 2.0 ® работает с корпусом дроссельной заслонки EZ-EFI® любого поколения, многопортовыми системами, системами с двумя квадрокоптерами и корпусами дроссельной заслонки Inglese ™, а также совместим с несколькими вариантами топливных насосов, включая топливные насосы в баке. , рядный, мощный рядный, возвратный и безвозвратный. Электронное измерение давления топлива входит в стандартную комплектацию всех комплектов, и каждый работает с системой мокрой закиси азота.EZ-Ignition ™ имеет опцию EZ-Solution ™, что означает, что он может работать с большинством распространенных систем зажигания, в то время как для точного управления требуется распределитель FAST ™ или пусковой механизм кривошипа. EZ-EFI 2.0 ® полностью разработан и спроектирован FAST ™ и включает ограниченную пожизненную гарантию, поддерживаемую самой обширной группой технической поддержки в отрасли.
Papasimakis, N., Федотов В.А., Желудев Н.И., Просвирнин С.Л. Метаматериальный аналог электромагнитно-индуцированной прозрачности. Phys. Rev. Lett. 101, 253903 (2008).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Лю Н. и др. Плазмонный аналог электромагнитно-индуцированной прозрачности на пределе затухания Друде. Nature Mater. 8, 758–762 (2009).
ADS CAS Google Scholar
Лю, С., Янг, З., Лю, Р. и Ли, X. Высокочувствительное измерение локализованного поверхностного плазмонного резонанса с использованием резонатора NanoRing с двойным разделением. J. Phys. Chem. С. 115, 24469–24477 (2011).
CAS Google Scholar
О’Хара, Дж.
Ф. и др. Тонкопленочное зондирование плоскими метаматериалами терагерцового диапазона: чувствительность и ограничения. Опт. Express 16, 1786–1795 (2008).
ADS PubMed Google Scholar
Ломбарди, Дж.Р. и Бирке, Р. Л. Единый взгляд на поверхностно-усиленное комбинационное рассеяние. В соотв. Chem. Res. 42, 734–742 (2009).
CAS PubMed Google Scholar
Chang, W. S. et al. Плазмонный переключатель Фано. Nano Lett. 12. С. 4977–4982 (2012).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Ву К., Ханикаев А. Б. и Швец Г. Широкополосный медленный световой метаматериал на основе резонанса двойного континуума Фано.Phys. Rev. Lett. 106, 107403 (2011).
ADS PubMed Google Scholar
Чжу Ю., Ху Х., Хуанг Й., Янг Х. и Гонг К. Быстрый и маломощный полностью оптический перестраиваемый резонанс Фано в плазмонных микроструктурах.
Adv. Опт. Матер. 2013. Т. 1. С. 61–67.
Google Scholar
Чжан, Ю. Б., Ху, Х. Ю., Фу, Ю. Л., Ян, Х. и Гонг, К. Х. Сверхбыстрый полностью оптический перестраиваемый резонанс Фано в нелинейных сегнетоэлектрических фотонных кристаллах.Прил. Phys. Lett. 100, 031106 (2012).
ADS Google Scholar
Хо, Дж. Ф., Лукьянчук, Б. и Чжан, Дж. Б. Настраиваемые резонансы Фано в многослойных нанооболочках серебро – кремнезем – серебро. Прил. Phys. А 107, 133–137 (2012).
ADS CAS Google Scholar
Fan, W. J., Zhang, S., Minhas, B., Malloy, K. J. & Brueck, S. R. J. Улучшенная передача инфракрасного излучения через субволновые коаксиальные металлические решетки.Phys. Rev. Lett. 94, 033902 (2005).
ADS PubMed Google Scholar
Christ, A. et al.
Управление интерференцией Фано в плазмонной решетке. Phys. Ред. B 76, 201405 (R) (2007).
ADS Google Scholar
Артар А., Яник А. и Алтуг Х. Направленные двойные резонансы Фано в плазмонных гетеро-олигомерах. Nano Lett. 11. С. 3694–3700 (2011).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Fan, J. A. et al. Самосборные кластеры плазмонных наночастиц. Science 328, 1135–1138 (2010).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Федотов В. А., Роуз М., Просвирнин С. Л., Папасимакис Н., Желудев Н. И. Резонансы острых захваченных мод в плоских метаматериалах с нарушенной структурной симметрией.Phys. Rev. Lett. 99, 147401 (2007).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Singh, R. et al. Наблюдение индуцированной метаматериалом прозрачности в отдельных резонаторах Фано с нарушенной симметрией.
Прил. Phys. Lett. 99, 201107 (2011).
ADS Google Scholar
Cao, W. et al. Плазмонные метаматериалы Фано с низкими потерями и сверхвысокой добротностью в темной моде. Опт. Lett.37, 3366–3368 (2012).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Gu, J. et al. Активный контроль аналога электромагнитно-индуцированной прозрачности в метаматериалах терагерцового диапазона. Nat. Commun. 3, 1151 (2012).
ADS PubMed Google Scholar
Пенья-Родригес О., Ривера А., Кампой-Куилесб М. и Палк У. Настраиваемый резонанс Фано в симметричных многослойных золотых нанооболочках.Наноразмер. 5. С. 209–216 (2013).
ADS PubMed Google Scholar
Wu, C. et al. Фанорезонансные асимметричные метаматериалы для сверхчувствительной спектроскопии и идентификации молекулярных монослоев.
Nat. Матер. 11. С. 69–75 (2012).
ADS CAS Google Scholar
Ву К., Ханикаев А. Б. и Швец Г. Широкополосный медленный световой метаматериал на основе резонанса двойного континуума Фано.Phys. Rev. Lett. 106, 107403 (2011).
ADS PubMed Google Scholar
Ву Д., Цзян С. М. и Лю Х. Дж. Настраиваемые резонансы Фано в трехслойных биметаллических наночастицах золота и серебра. J. Phys. Chem. С 115, 23797–23801 (2011).
CAS Google Scholar
Lassiter, J. B. et al. Проектирование и деконструкция формы линии Фано в плазмонных нанокластерах.Nano Lett. 12. С. 1058–1062 (2012).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Verellen, N. et al. Резонансы Фано в индивидуальных когерентных плазмонных нанополостах. Nano Lett. 9. С. 1663–1667 (2009).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Hao, F. et al. Нарушение симметрии плазмонных нанополостей: субрадиантное LSPR зондирование и настраиваемый резонанс Фано.Nano Lett. 8, 3983–3988 (2008).
ADS CAS Google Scholar
Фен, С. Ф., Чжан, Х. П. и Клар, П. Дж. Волноводные решетки микрополостей Фабри-Перо. Прил. Phys. Lett. 99, 053119 (2011).
ADS Google Scholar
Singh, R. et al. Оптическая настройка и сверхбыстрая динамика высокотемпературных сверхпроводящих метаматериалов терагерцового диапазона. Нанофотоника 2012. № 1. С. 117–123.
ADS CAS Google Scholar
Gu, J. et al. Активный гибридный плазмонный метаматериал. Опт. Матер. Экспресс 2, 31–37 (2012).
ADS CAS Google Scholar
Прайс И.
М., Айдин К., Келайта Ю. А., Бриггс Р. М. и Этуотер Х. А. Сильно деформированные податливые оптические метаматериалы с большой перестраиваемой частотой. Nano Lett. 10, 4222–4227 (2010).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Белотелов В.И. и др. Усиленные магнитооптические эффекты в магнитоплазмонных кристаллах. Nat. Nanotechnol. 6. С. 370–376 (2011).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Kurter, C. et al. Классический аналог электромагнитно-индуцированной прозрачности с гибридным метаматериалом металл-сверхпроводник.Phys. Rev. Lett. 107 043901 (2011).
ADS PubMed Google Scholar
Sámson, Z. L. et al. Электрооптический переключатель из метаматериала наноразмерной толщины. Прил. Phys. Lett. 96, 143105 (2010).
ADS Google Scholar
Mousavi, S.
H. et al. Индуктивная настройка фано-резонансных метаповерхностей с использованием плазмонного отклика графена в среднем инфракрасном диапазоне. Nano Lett.13, 1111–1117 (2013).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Ху, X. Y., Zhang, Y. B., Fu, Y. L., Yang, H. & Gong, Q.H. Быстрый и маломощный полностью оптический перестраиваемый резонанс Фано в плазмонных микроструктурах. Adv. Матер. 23. С. 4295–4300 (2011).
CAS PubMed Google Scholar
Zhang, S. et al. Оптические объемные метаматериалы с отрицательным показателем преломления, состоящие из двумерных перфорированных пакетов металл-диэлектрик.Опт. Express 14, 6778–6787 (2006).
ADS PubMed Google Scholar
Valentine, J. et al. Трехмерный оптический метаматериал с отрицательным показателем преломления. Nature 455, 376–379 (2008).
ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar
Лю Н. и др. Трехмерные фотонные метаматериалы на оптических частотах. Nat.Матер. 7. С. 31–37 (2008).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Li, T. et al. Эффект связи магнитного поляритона в перфорированных слоистых метаматериалах металл / диэлектрик и его влияние на передачу отрицательного преломления. Опт. Express 14, 11155–11163 (2006).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Цао, Т., Симпсон, Р. Э. и Крайан, М.J. Исследование перестраиваемых метаматериалов с отрицательным показателем преломления на основе материалов с фазовым переходом. J. Opt. Soc. Являюсь. B 30,439–444 (2013).
ADS CAS Google Scholar
Цао, Т., Чжан, Л., Симпсон, Р. Э. и Крайан, М. Дж. Настраиваемый, независимый от поляризации совершенный поглотитель среднего инфракрасного диапазона, использующий метаматериал с фазовым переходом. J. Opt. Soc. Являюсь. B 30,1580–1585 (2013).
ADS CAS Google Scholar
Ван Дж.Q. et al. Двойные резонансы Фано из-за взаимодействия электрических и магнитных плазмонных мод в плоской плазмонной структуре с высокой чувствительностью. Opt.Express 21, 2236–2244 (2013).
ADS PubMed Google Scholar
Шпортко К. и др. Резонансное связывание в материалах с кристаллическим фазовым переходом. Nature 7, 653–658 (2008).
CAS Google Scholar
Мишель А.U. et al. Использование материалов с малыми потерями фазового перехода для настройки резонанса антенн в среднем инфракрасном диапазоне. Нано. Lett. 13, 3470–3475 (2013).
ADS CAS PubMed Google Scholar
Orava, J. et al. Методом спектроскопической эллипсометрии, зависящей от температуры, исследованы оптические свойства и фазовый переход в тонких пленках, подвергшихся мгновенному напылению Ge2Sb2Te5. J.Appl.Phys. 104, 043523 (2008).
ADS Google Scholar
Гуннар, Д., Кристиан, Э., Мартин, В., Костас, М. С. и Стефан, Л. Метаматериал с низкими потерями и отрицательным показателем преломления на длинах волн электросвязи. Opt.Lett. 31,1800–1802 (2006).
Google Scholar
Джонсон П. Б. и Кристи Р. В. Оптические константы благородных металлов. Phys. Ред. B 6, 4370–4379 (1972).
ADS CAS Google Scholar
Чен, Х., Чен, Ю., Янь, М.& Цю М. Наносекундные фототермические эффекты в плазмонных наноструктурах. АСУ Нано 6. 2012. С. 2550–2557.
CAS PubMed Google Scholar
Айдин, К., Ферри, В. Э., Бриггс, Р. М. и Этуотер, Х. А. Широкополосное поляризационно-независимое резонансное поглощение света с использованием ультратонких плазмонных суперпоглотителей. Nat. Commun. 2, 517 (2011).
ADS Google Scholar
Симпсон, Р.E. et al. Межфазная память изменения фазы. Nat. Нанотехнологии. 6. С. 501–505 (2011).
ADS CAS Google Scholar
Лю Н., Меш М., Вайс Т., Хентшель М. и Гиссен Х. Совершенный поглотитель инфракрасного излучения и его применение в качестве плазмонного датчика. Nano Lett. 10, 2342–2348 (2010).
ADS CAS Google Scholar
млн лет назад, Y. et al. Плазмонная прозрачность в скрученных метаматериалах Фано терагерцового диапазона.Опт. Матер. Express 1. С. 391–399 (2011).
ADS CAS Google Scholar
Мирошниченко А. Э., Флах С., Кившар Ю. С. Резонансы Фано в наноразмерных структурах. Ред. Мод. Phys. 82, 2257–2298 (2010).
ADS CAS Google Scholar
Фано У. Влияние взаимодействия конфигурации на интенсивности и фазовые сдвиги. Phys. Ред. 124, 1866–1878 (1961).
ADS CAS МАТЕМАТИКА Google Scholar
Лагутин Б.М. и др. Фотоионизация Kr вблизи 4-секундного порога. IV. Фотоионизация за счет автоионизации двояковозбужденных состояний. J. Phys. Летучая мышь. Мол. Опт. Phys. 27, 5221–5239 (1994).
ADS CAS Google Scholar
Kuwahara, M. et al. Измерение теплопроводности тонких пленок нанометрового размера с помощью явления термоотражения.Микроэлектрон. Англ. 84, 1792–1796 (2007).
CAS Google Scholar
Chen, G. & Hui, P. Теплопроводность напыленных пленок золота на кремнии и стекле. Прил. Phys. Lett. 74, 2942 (1999).
ADS CAS Google Scholar
Рецензент № 1:
Этот обзор подготовлен с точки зрения «широкой аудитории», которая неформально интересуется мутаторами.Эта статья показала, что, когда E. coli подвергалась летальному воздействию этанола, мутаторы развивались в нескольких линиях. Эти мутаторные линии (но не линии с нормальным уровнем мутаций) могут переносить летальные уровни этанола. На более поздних стадиях эволюции частота мутаций в этих линиях мутаторов была снижена.
Авторы утверждают, что «скорость мутации организма часто считается медленно меняющимся параметром». Я не уверен, верно ли это утверждение, поскольку Wielgoss et al., 2013 показали, что гипер-мутатор развился в одной из 12 линий Ленски и что позже он был заменен более мягкими мутаторами.Разница в том, что в этом исследовании снижение частоты мутаций происходит за счет компенсаторных мутаций вместо замены одного типа мутатора другим типом. Hammerstrom et al. (2015) (не цитируется) показали, что гипермутаторы могут многократно развиваться в ответ на тигециклин (через вставку транспозона). Таким образом, повторная эволюция гипермутатора (в отличие от случайного появления мутатора в одной из линий Ленского) также не нова. Однако в этой статье есть интересные эксперименты, и динамика частоты мутаций также отслеживается с прекрасным разрешением.
Мы благодарим рецензента за высокую оценку нашей работы, а также за подробные исправления и предложения, которые были сделаны для дальнейшего улучшения рукописи.
Wielgoss et al. , 2013 действительно сообщили о появлении гипермутатора и более позднем снижении частоты мутаций в одной из линий Ленски. Однако в свете их работы мы по-прежнему считаем, что наше утверждение о том, что частота мутаций является медленно развивающимся параметром, верно, поскольку это увеличение и последующее снижение происходило в течение длительного периода времени (± 40 000 поколений или 20 лет) и наблюдалось в только одна репликация населения.Кроме того, как также было указано рецензентом 3, считается, что гораздо более низкие коэффициенты отбора стимулируют отбор генотипов с более низкой частотой мутаций и наблюдались в исследованиях без стресса или в условиях умеренного стресса (Wielgoss et al. , 2013; Sniegowski, Герриш и Ленски, 1997; Баррик и др. , 2009; Сандберг и др. , 2014). В целом, мы считаем, что можно утверждать, что скорость мутации организма часто считается медленно меняющимся параметром.
Спасибо, что указали на Hammerstrom et al. Исследование , которое показывает повторяющуюся эволюцию гипермутаторов A. baumannii в ответ на лечение тигециклином (Hammerstrom et al. , 2015). Это демонстрирует, что наши наблюдения гипермутации во всех линиях с высокой толерантностью к этанолу не ограничиваются почти летальным этанольным стрессом, но лежат в основе более широкого феномена, когда клетки, подвергшиеся экстремальному стрессу (включая этанол или антибиотики), предпочитают более высокие уровни мутаций, чтобы избежать исчезновения.Поскольку эта превосходная работа подтверждает клиническую значимость нашего исследования, мы процитировали ссылку 36 и обсудили ее как в разделах «Введение», так и в раздел «Обсуждение» исправленной рукописи.
Однако мы считаем, что наши результаты выходят далеко за рамки исследования Hammerstrom et al. Мы не только описываем быструю, повторяющуюся эволюцию гипермутации в каждой линии с высокой толерантностью к этанолу, но также и эволюцию множественных, последовательных повышений и понижений частоты мутаций в пределах одной и той же эволюционной линии.Насколько нам известно, такого динамичного изменения частоты мутаций с течением времени еще не наблюдалось. Чтобы подчеркнуть разницу между повторяющейся эволюцией гипермутации во всех линиях с высокой толерантностью к этанолу и повторяющимся увеличением и уменьшением, наблюдаемым внутри линии, мы изменили реферат, чтобы подчеркнуть основные результаты нашего исследования.
«[…] Напротив, мы демонстрируем неожиданную гибкость в скорости клеточных мутаций в ответ на изменения давления отбора. Мы показываем, что гипермутация независимо развивается, когда разные культуры Escherichia coli адаптируются к высокому этанольному стрессу.Кроме того, состояния гипермутации преходящи и часто чередуются с уменьшением частоты мутаций. В частности, частота мутаций увеличивается, когда клетки испытывают более высокий стресс, и снова снижается, когда клетки адаптируются. […] »
Основные моменты:
Подраздел «Долгосрочная адаптация к высокой концентрации этанола у E. coli зависит от гипермутации»: «эволюционные тупики» — откуда вы это знаете? Вы вводили мутации-мутаторы в тупиковые линии и наблюдали отсутствие улучшенной выживаемости этанола? Если так, то будет интересно узнать, почему «тупиковые» линии не смогли развить мутаторные фенотипы.
Мы не вводили мутацию-мутатор обратно в эти тупиковые линии. Поэтому мы удалили и перефразировали термин «эволюционные тупики», чтобы описать эти линии с низкой толерантностью к этанолу в рукописи.
«[…] Хотя толерантность к этанолу увеличилась во всех популяциях, только восемь из 20 линий развили толерантность к очень высоким (7% и более) концентрациям этанола (рис. 2B), в то время как другие 12 линий периодически вымирают и развивают толерантность только к относительно низкие концентрации этанола (6% или ниже).[…] »
«[…] Если для роста штамму требовалось более 14 дней, мы предполагали, что эта популяция вымерла. […]»
«[…] Если штамм не показал роста в течение 14 дней, мы предположили, что линия вымерла, и мы восстановили предыдущую сохраненную промежуточную точку, чтобы возобновить эволюцию. […]»
Хотя у нас нет прямых доказательств, введение мутации-мутатора могло бы позволить этим линиям еще больше адаптироваться к более высоким уровням стресса. Чтобы лучше понять, почему эти линии не развили мутаторный фенотип, мы секвенировали 2 линии с низкой толерантностью (E4 и E17).Обе эти линии накопили мутацию в fabA , гене, участвующем в биосинтезе жирных кислот, который уже был связан с более высокой толерантностью к этанолу (Dombek and Ingram, 1984; Luo, et al. , 2009). Однако линия E4 дополнительно содержала мутацию в rpoZ , а линия E17 накапливала дополнительную делецию infB . rpoZ кодирует субъединицу РНК-полимеразы и играет роль в транскрипции, тогда как infB кодирует фактор инициации белковой цепи и играет роль в трансляции.Недавно было показано, что этанол влияет как на транскрипцию, так и на трансляцию в клетке (Haft, et al. , 2014). Хотя это и является предположением, влияние этих специфических мутаций может серьезно ухудшить рост этих низкотолерантных линий при более высоком процентном содержании этанола, предотвращая возникновение мутаторных мутаций или других и тем самым дальнейшее эволюционное улучшение. Мы включили это в раздел «Обсуждение»:
«[…] Несмотря на то, что мы в основном сосредоточились на увеличении частоты мутаций в этом исследовании, 12 медленно мутирующих линий с низкой толерантностью к этанолу могут быть интересной отправной точкой для дальнейших исследований.Отсутствие гипермутации в этих линиях, по-видимому, препятствует дальнейшей адаптации к высоким концентрациям этанола. Анализ последовательности двух из этих линий выявил наличие мутаций в rpoZ (субъединица РНК-полимеразы) и infB (фактор инициации белковой цепи) в линиях E4 и E17 соответственно. Поскольку этанол токсичен из-за своего действия на транскрипцию и трансляцию (Haft, et al. , 2014), нарушение транскрипции или трансляции из-за этих мутаций может вызвать повышенную чувствительность к более высоким уровням этанола.Это предотвратит дальнейший рост и возможность приобретения мутаторного аллеля или любой другой мутации. Хотя у нас нет доказательств того, что мутации rpoZ и infB являются причиной снижения частоты мутаций, эти мутации интересны и могут объяснить отсутствие дальнейшего улучшения адаптации в линиях E4 и E17 (Рисунок 3A). […] ”
Необходимо описать метод количественной оценки толерантности к этанолу. Рисунок 5B: Единицы? На самом деле я не уверен в сути рисунка 5B, учитывая, что высокая толерантность к этанолу может быть достигнута с низкой частотой мутаций на более поздних стадиях эволюции.
Толерантность к этанолу у популяции измерялась как способность расти в жидкой среде в присутствии определенного процента этанола. Когда популяция росла и достигла оптической плотности 0,2 или более в присутствии определенного процента этанола, она считалась толерантной к этому проценту. Чтобы гарантировать правильное процентное содержание этанола в среде, мы использовали систему анализа пива Alcolyser (Anton Paar GmbH, Австрия). Теперь мы уточнили количественную оценку толерантности к этанолу и измерение концентрации этанола в разделе «Материалы и методы».
«[…] Для обеспечения правильного процентного содержания этанола, добавляемого в среду, мы использовали систему анализа пива Alcolyser (Anton Paar GmbH, Австрия). […]»
«[…] Устойчивость популяции к этанолу измерялась как способность расти в жидкой среде в присутствии определенного процента этанола до оптической плотности не менее 0,2. […]»
Мы также добавили единицы измерения на рис. 5B.
Данные, представленные на рисунке 5B, доказывают, что динамика скорости мутаций лежит в основе эволюции толерантности к этанолу.Нет корреляции между абсолютной частотой мутаций в каждой точке и абсолютной толерантностью к этанолу в каждой точке. Вместо этого этот рисунок показывает, что увеличение частоты мутаций между двумя последовательными точками в значительной степени коррелирует с повышением толерантности к этанолу между этими двумя временными точками, указывая на то, что мутация-мутатор (которая вызывает увеличение скорости мутаций) автостопом с полезной мутацией (которая вызывает повышенная толерантность к этанолу) и что эти полезные мутации имеют более высокую вероятность возникновения на фоне мутатора.Более того, снижение частоты мутаций (отрицательная Δ частота мутаций) коррелирует с периодами постоянного давления этанола (Δ толерантность к этанолу равна нулю), показывая, что частота мутаций снова уменьшается, когда популяция способна расти в присутствии определенного процента этанола. Эта корреляционная информация отсутствует на рисунке 5A, что показывает актуальность дополнительной панели.
Я не нахожу повышенный уровень смертности, связанный с мутаторами, особенно интересным, если бы авторы не объяснили мне фундаментальную разницу между более медленным рождением, повышенной смертностью или их комбинацией.В конце концов, можно рассматривать рождение и смерть как «чистый рост».
Мы согласны с тем, что рост популяции зависит как от рождения, так и от смерти клеток в популяции. Поэтому мы добавили несколько строк в раздел «Результаты», чтобы уточнить, что наши наблюдения связаны с увеличением смертности, а не с более медленным рождением.
«[…] Удивительно, но все протестированные промежуточные точки показали очень быстрое уменьшение количества жизнеспособных клеток при переходе в стационарную фазу (Рисунок 6 — рисунок в приложении 1).Это уменьшение количества жизнеспособных клеток объясняется действительно повышенной смертностью в популяции, поскольку клетки находятся в стационарной фазе. […] »
Кроме того, высевая растущие популяции в разные моменты времени, мы смогли наблюдать уменьшение жизнеспособных клеток (то есть отрицательный чистый рост), начиная с ранней стационарной фазы. Поскольку рождение клеток уже отсутствует или низкое в стационарной фазе, уменьшение количества жизнеспособных клеток объясняется повышенной гибелью клеток. Более того, мы смогли подтвердить повышенную смертность из-за окрашивания мертвых животных (Рисунок 6; Рисунок 6 — приложение к рисунку 1; Рисунок 6 — приложение к рисунку 2).
Мне непонятен смысл таблицы 1. Почему бы не пересчитать расчетное количество мутаций на основе динамики скорости мутаций и посмотреть, соответствует ли оно наблюдаемому количеству мутаций?
Таблица 1 должна была показать несоответствие между ожидаемым количеством мутаций, основанным на частоте мутаций конечной точки, и фактическим количеством фиксированных мутаций, эффективно наблюдаемых в геномной последовательности конечных точек. Интересное предложение пересчитать количество мутаций на основе динамики скорости мутаций.Мы попытались рассчитать площадь под кривой (AUC) на рисунке 5A, чтобы получить приблизительное количество мутаций за период времени, принимая во внимание колебания скорости мутаций в каждый момент времени. Однако этот расчет слишком упрощен. Скорость геномных мутаций, измеренная с помощью анализов флуктуаций, не подходит для расчета оценок, которые будут сравниваться с истинным количеством фиксированных мутаций. Скорость геномных мутаций отражает только количество мутаций, встречающихся в популяции, но не дает оценки количества мутаций, которые в конечном итоге закрепятся в популяции.Создание надлежащего приближения ожидаемого количества мутаций потребует оценки частоты полезных мутаций и вероятности фиксации мутации в данной среде. Было бы чрезвычайно сложно сделать это в нашей конкретной установке, поскольку мы, например, не использовали постоянную среду, а вместо этого постоянно увеличивали процентное содержание этанола. Кроме того, расчеты необходимых параметров для получения достоверной оценки будут различаться для каждого момента времени, что делает его чрезвычайно сложным.Поэтому мы решили удалить столбец с расчетным количеством мутаций и заменить таблицу дополнительным показателем, показывающим как общее количество вариантов в популяции, так и количество фиксированных мутаций (Рисунок 2 — Рисунок 2). Этот дополнительный рисунок хорошо показывает, что мутационный профиль популяций мутаторов сложен с несколькими низкочастотными мутациями, которые принадлежат разным субпопуляциям, возможно, с более высокой или более низкой частотой мутаций, чем средняя частота мутаций в популяции.
Было бы интересно узнать, какие мутации напрямую способствуют толерантности к этанолу (если у вас уже есть данные).
Идентификация мутаций, которые напрямую способствуют толерантности к этанолу, является чрезвычайно сложной задачей в нашем наборе данных, учитывая вероятное большое количество пассажирских мутаций среди немногих водительских мутаций. Однако в настоящее время мы разрабатываем метод анализа таких очень сложных наборов данных о мутациях, часто возникающих в результате эволюции гипермутаторов. Глядя на параллелизм между эволюционировавшими линиями, мы уже смогли идентифицировать путь биосинтеза жирных кислот, кодируемый генами fab, как главную мишень в начальной адаптации к высокому этанольному стрессу.Идентификация этого пути служит истинным положительным моментом для нашего анализа, поскольку изменение состава жирных кислот мембраны ранее сообщалось как основной механизм, способствующий толерантности к этанолу (Dombek and Ingram, 1984; Luo, et al. , 2009). .
Рецензент № 2:
В своей рукописи, озаглавленной «Адаптивная настройка скорости мутаций позволяет быстро реагировать на летальный стресс у E. coli», Toon Swings и сотрудники изучают эволюцию скорости мутаций при адаптации к этанолу.Они показывают, что на ранних стадиях адаптации быстро выбирается повышенная частота мутаций, и, что более удивительно, они обнаруживают быстрое снижение частоты мутаций, которое, по-видимому, напрямую связано с некоторым увеличением смертности. Данные надежные, количественные и очень интересные, особенно связь между смертностью и уровнем мутаций. Мои комментарии в основном касаются некоторых интерпретаций результатов и некоторых экспериментальных деталей
Во Введении не совсем ясно, является ли 5% этанол настоящим смертельным стрессом: мутации необходимы, чтобы выжить в первом цикле роста.Судя по времени задержки, кажется, что это так. Если это так, то в статье будет полезно сослаться на область экспериментов по спасению. Это модные эксперименты, изучающие адаптацию в условиях, в которых она необходима для выживания. Параграф (или даже заголовок) о связи между экспериментом и этим полем увеличит читательскую аудиторию статьи.
Мы согласны с рецензентом и включили концепцию эволюционного спасения и связь с гипермутацией в разделы «Введение» и «Обсуждение».
«[…] Это особенно очевидно в суровых условиях, где почти смертельный стресс требует быстрой адаптации по крайней мере некоторых особей, чтобы избежать полного исчезновения популяции (Bell and Gonzalez, 2011). Достаточно быстрая адаптация, позволяющая спасти популяцию от вымирания, ведет к так называемому эволюционному спасению. Это явление широко изучается в свете изменения климата и адаптации сокращающихся популяций к новым, меняющимся условиям окружающей среды (Lindsey, et al. , 2013).Это происходит, когда популяция, находящаяся в состоянии стресса, не обладает достаточной фенотипической пластичностью и может избежать исчезновения только благодаря генетическим изменениям (Gonzalez, et al. , 2013). Эволюционное спасение зависит от различных факторов, таких как размер популяции, размер генома, частота мутаций, степень изменения окружающей среды и история стресса (Gonzalez, et al. , 2013; Gonzalez and Bell, 2012). Увеличивая количество мутаций, гипермутации также могут иметь решающее значение для эволюционного спасения популяций, находящихся в условиях смертельного стресса.[…] »
«[…] Несмотря на бремя дополнительных, возможно, летальных мутаций, увеличение количества мутаций обеспечивает быструю адаптацию по крайней мере некоторых людей и спасает популяцию от вымирания (Bell and Gonzalez, 2011; Lindsey et al. , 2013; Gonzalez и др. , 2013; Гонсалес и Белл, 2013). […] ”
Эволюционное спасение — действительно интересный феномен, который очень важен для адаптации к летальному стрессу. 5% этанол почти полностью подавляет рост дикого типа и резко снижает несущую способность (рисунок 1 — приложение к рисунку 2).Различное время задержки, наблюдаемое как у мутантов дикого типа, так и у мутантных мутантов, действительно предполагает, что мутации необходимы для обеспечения роста в присутствии 5% этанола, что, следовательно, может означать, что это настоящий летальный стресс. Однако, чтобы подтвердить это утверждение, нам потребуется секвенировать штамм после выращивания на 5% этаноле, чтобы увидеть, действительно ли мы можем определить адаптивные мутации, которые способствовали росту и спасли популяцию от вымирания.
Следует отметить, что предыдущие исследования показали, что повышение толерантности к этанолу является сложным процессом, включает взаимодействие между множеством генов и путей и требует множественных мутаций (Goodarzi, et al., 2010; Николау, и др. , 2012; Voordeckers, et al. , 2015). Необходимость множественных мутаций для достижения более высокой толерантности к этанолу в сочетании с серьезным нарушением роста при 5% этаноле резко ограничивает возможность приобретения адаптивных мутаций. Таким образом, мы считаем, что увеличение частоты мутаций — единственная возможность сгенерировать достаточное количество генетических вариаций во времени, чтобы обеспечить адаптацию и избежать исчезновения. Хотя эволюционное спасение во многом зависит от частоты мутаций (Gonzalez, et al., 2013; Gonzalez and Bell, 2012), возникновение гипермутации в связи с эволюционным спасением подробно не обсуждалось. Возможно, потому что для эволюционного спасения с помощью гипермутации требуются два мутационных события: возникновение мутации-мутатора и возникновение адаптивной мутации, спасающей популяцию. Возникновение гипермутации во всех наших линиях с высокой толерантностью к этанолу и повторяющиеся увеличения и уменьшения частоты мутаций, которые соответствуют изменениям давления этанола во время эволюции, демонстрируют, что гипермутация имеет решающее значение для быстрой адаптации по крайней мере некоторых особей и спасения популяции от вымирания в условиях стрессовые состояния, близкие к летальному исходу.
В статье четко показан новый фактор, который может объяснить изменения в частоте мутаций: смертность. Однако вся интерпретация явления все еще связана с идеей отбора и нагрузки второго порядка. Это действительно соответствует первым теоретическим данным о мутаторах и отборе второго порядка, в котором не учитывались все возможные прямые эффекты. В более поздних работах больше внимания уделяется потенциальным прямым эффектам, и я думаю, что обсуждение должно представить некоторые из этих идей и, в конечном итоге, оспорить их.Некоторые результаты здесь показывают, что в конечном итоге некоторое прямое влияние мутаторов может сказаться не на раннем отборе мутаторов, а в конечном итоге на их стоимости.
Сначала на рисунке 4 даже при очень низких частотах отбираются мутаторные аллели. Это довольно удивительно, поскольку в какой-то момент субпопуляция мутаторов должна быть слишком низкой, чтобы генерировать какие-либо полезные мутации. Действительно, если мы предположим 1000-кратный эффект на переходы, мутатор должен уступить место дикому типу в соотношении 1/10000 или около того.Итак, рисунок 4 предполагает прямой эффект. Также в тексте упоминается тот факт, что в mutS были обнаружены только точечные мутации и отсутствие инактивации, также является аргументом в пользу более сложного эффекта, чем просто увеличение скорости мутаций. (инактивация должна иметь гораздо больше шансов произойти (хотя некоторые делеции могут не обнаруживаться на уровне популяции с использованием используемого конвейера), и, поскольку они имеют впечатляющее преимущество в конкуренции, они должны немедленно вторгнуться…
Даже в очень хороших экспериментах, связывающих смертность и частоту мутаций, 10-кратное снижение частоты мутаций от IM2 к IM3 приводит к двукратному или меньшему снижению смертности мертвых клеток.Так что скорость мутации — не единственный игрок. Накопление мутации могло привести к незначительным различиям между IM2 и IM3, но на рисунке 7 автор обнаружил, что трехкратное изменение частоты мутаций на этот раз оказывает сильное влияние на выживаемость (более чем в 10 раз). совершенно разные.
Может быть чрезвычайно трудно следовать механистическим эффектам, но обсуждение того, что в игре могут иметь место как первичный отбор, так и отбор второго порядка, принесет пользу статье.
MMR оказались полезными, потому что они позволяют быстрое переключение экспрессии жгутиков, хотя и повышенная рекомбинация, оказались токсичными, когда в клетке присутствует слишком много несовпадений, так что они приводят к двухцепочечному разрыву … и несколько других недавних в работах было высказано предположение, что эволюция скорости мутаций также может быть связана с прямым эффектом. Это никоим образом не снижает ценности проведенных экспериментов, но стоит упомянуть в обсуждении.
Мы благодарим рецензента за такую интерпретацию данных и за его очень интересное предложение о роли возможных прямых эффектов MMR на селекцию гипермутации при высоком этанольном стрессе. Мы включили в рукопись подробное обсуждение возможных эффектов директ.
«[…] Эти данные показывают, что преимущество гипермутации при этанольном стрессе можно отнести, главным образом, к отбору второго порядка, вслед за благоприятными эффектами новых мутаций по сравнению с возможными прямыми эффектами самой мутации-мутатора.[…] »
«[…] Однако следующие элементы в наших результатах могут также указывать на потенциальные прямые эффекты мутаторных мутаций. Во-первых, в генах репарации ошибочного спаривания были идентифицированы в основном точечные мутации (рисунок 2 — рисунок в приложении 3), хотя инактивация гена более вероятна, учитывая высокую конкурентоспособность штамма Δ mutS по сравнению со штаммом mutS Штамм G100A в присутствии 5% этанола (Рисунок 4 — рисунок в приложении 1). Это дало бы предположить выбор конкретных изменений в механизме пути репарации несовпадений.Во-вторых, штаммы Δ mutS и mutS G100A по-прежнему увеличивают частоту при конкуренции с диким типом в соотношении 1: 1000 или ниже (рис. 4). Учитывая 10-50-кратное увеличение частоты мутаций, субпопуляция мутаторов с соотношением 1: 1000 или ниже должна быть слишком маленькой, чтобы иметь повышенный шанс приобретения полезной мутации по сравнению с субпопуляцией дикого типа. Эти данные свидетельствуют о прямом положительном влиянии мутаций MMR (Cooper, et al., 2012; Торрес-Барсело, и др. , 2013; Nowosielska and Marinus, 2007), которые в сочетании с отбором второго порядка могут объяснить наши наблюдения. Кроме того, мы подтвердили, что любое увеличение частоты мутаций, независимо от нарушенной клеточной системы, может дать селективный эффект. Следовательно, эти прямые эффекты, которые обычно являются результатом сбоев в одной конкретной системе или даже в одном гене, могут не напрямую влиять на ранний отбор гипермутации, но могут быть очевидны по стоимости на более поздних стадиях.[…] »
«[…] Некоторые прямые эффекты уже накопленных мутаций могут объяснить несоответствие между 2-кратной разницей в смертности между IM2 и IM3 с 10-кратной разницей в частоте мутаций (Рисунок 6) и более чем 10-кратной разницей в смертность между END и END Δ mutS только с 2,5-кратной разницей в частоте мутаций (фигура 7). […] »
Следует отметить, что в отношении потенциального роста мутаторов, эксперименты с подмножеством мутаторов, участвующих в различных механизмах, несомненно, являются доказательством того, что выбрана повышенная частота мутаций.Тогда тот факт, что обнаружены только клоны MMR, а нокаут не обнаружен, предполагает, что в конечном итоге происходит выбор более умеренных эффектов или некоторых конкретных механизмов.
Помимо возможных прямых эффектов, описанных выше, которые могут привести к прямому отбору в основном мутаторов MMR, точечные мутации в генах MMR также могут быть выбраны, потому что они лишь умеренно увеличивают скорость мутаций по сравнению со скоростью мутаций, вызванных полным нокаутом. out (рисунок 4). Это позволяет предположить, что умеренно повышенная частота мутаций более полезна, поскольку они имеют более низкую стоимость на более поздних стадиях по сравнению с вариантами с более высокой частотой мутации.Чтобы уточнить этот момент, мы добавили параграф по этому поводу в наш раздел «Обсуждение»:
«[…] Оба этих наблюдения подтверждают идею о том, что умеренные мутаторы будет легче отбирать, потому что их польза выше, чем у вариантов с низкой скоростью мутации, а их долгосрочная стоимость ниже, чем у вариантов с высокой скоростью мутаций. Идентификация в основном точечных мутаций, приводящих к аминокислотным изменениям, а не к бессмысленным мутациям в генах MMR во время эволюции, аналогичным образом предполагает отбор на умеренное увеличение скорости мутаций (например, как показано для мутанта mutS G100A ).[…] »
Рецензент № 3:
[…]
У нас есть три основных комментария:
Существенная информация отсутствует в нескольких местах, что мешает как базовому пониманию динамики популяции во время эксперимента, так и сравнению текущих результатов с результатами предыдущей работы по эволюции частоты мутаций. Во-первых, не дается никакой информации об эффективном размере популяции развивающихся популяций: какие объемы культур, какие разведения, какие конечные плотности клеток были получены и каков был эффективный размер популяции (~ размер посевного материала x количество поколений за цикл роста)?
Мы включили в рукопись всю запрошенную информацию.
«[…] Объем культуры во время эксперимента по эволюции составлял 50 мл, а разведение было 100-кратным при каждом переносе […]».
«[…] Минимальная оптическая плотность 0,2 соответствует минимальной конечной плотности клеток 5,4х10 8 КОЕ / мл в объеме 50 мл. Соответственно, для каждого пассажа мы переносили 500 мкл или не менее 2,73х10 8 КОЕ. Среднее количество поколений для каждого цикла роста, рассчитанное на основе оптической плотности, достигнутой при переносе, составляет 6,67.Это значение соответствует теоретическому значению, полученному из log 2 (коэффициент разбавления (100)) = 6,67. Взяв эти значения вместе, мы можем рассчитать предполагаемый эффективный размер популяции: 1,82×10 9 КОЕ. […] »
Во-вторых, как рассчитывали количество поколений, учитывая высокую смертность клеток? Были также получены мертвые клетки, и их следует принимать во внимание при оценке общего числа поколений.
Число поколений было рассчитано на основе оптической плотности, измеренной в каждый промежуточный момент времени.Сначала мы рассчитали соответствующее количество КОЕ / мл для измеренной оптической плотности, используя уравнение, полученное из стандартной кривой OD 595 -КОЕ / мл. Используя это значение КОЕ / мл, мы рассчитали общее количество КОЕ, присутствующих в объеме культуры 50 мл. Поскольку мы разбавляли 100x при каждом переносе, мы могли использовать общее количество КОЕ с предыдущей временной точки для расчета размера инокулята. Наконец, увеличение количества КОЕ рассчитывали путем деления окончательного количества КОЕ на засеянное количество КОЕ.База логарифма 2 этого значения дает количество поколений (см. Подраздел «Экспериментальная эволюция и уравнение 3, Материалы и методы»).
Хотя это значение является хорошим приближением количества поколений, поскольку измерения OD также регистрируют мертвые клетки, мы знаем, что это вычисленное значение не учитывает конкретно образование мертвых клеток. Поэтому мы добавили к рукописи параграф, объясняющий, как мы оценивали количество поколений, упоминая при этом проблему неизвестной смертности населения.
«[…] Количество жизнеспособных клеток оценивали с использованием значений оптической плотности (A 595 нм ). Этот расчет специально не учитывает уровень смертности клеток. Однако, поскольку оптическая плотность отражает как живые, так и погибшие клетки в культуре, расчет количества поколений с использованием значений OD является более точным по сравнению с расчетами, основанными на подсчете КОЕ. Действительно, при использовании данных подсчета жизнеспособных клеток IM1, IM2 и IM3 (рисунок 5) мы обнаружили 1,27-кратное (± 0.29) занижение количества поколений при использовании количества жизнеспособных клеток по сравнению с использованием значений OD. […] »
Рисунок 6 — приложение к рисунку 1B показывает, что OD уменьшается только в поздней стационарной фазе, когда большая часть популяции уже мертва. Учитывая тот факт, что мы переносили культуры во время эксперимента по эволюции в экспоненциальной фазе при OD не менее 0,2, эта плотность, вероятно, отражает все клетки, как живые, так и погибшие в культуре. Следовательно, поколения, рассчитанные на основе этих значений плотности, будут точно соответствовать истинному количеству поколений.Тем не менее, чтобы рассчитать точное количество поколений, нам нужно будет измерить уровень смертности для каждой временной точки отдельно и дополнить модель роста компонентом уровня смертности. Учитывая детальный характер таких экспериментов, это было бы практически невозможно в разумные сроки.
В-третьих, и это, возможно, наиболее важно, было неясно, проводились ли тесты флуктуации и анализ геномной последовательности на индивидуальных клонах или смешанных популяционных образцах. В результате мы не знаем, как интерпретировать рисунок 5 и таблицу 1: отражают ли показатели мутаций на рисунке 5 скорость мутаций фиксированных генотипов или это сочетание скорости мутаций мутаторов и мутаций дикого типа в полиморфной популяции? Сходны по частоте наблюдаемых мутаций в таблице 1: основаны ли они на последовательностях случайных клонов, выбранных из этих популяций, или на ДНК смешанной популяции? Различия в скорости мутаций, показанные на рисунке 5A, предполагают, что они отражают скорость популяционных мутаций, поскольку изменения слишком малы, чтобы отражать чисто генотипические эффекты, если они включают мутантные мутанты, такие как mutS (см. Рисунок 4).Это различие имеет решающее значение для возможных механизмов, которые следует учитывать для объяснения динамики скорости мутаций: если в популяции фиксируются генотипы с высокой частотой мутаций, то наблюдаемые позже генотипы с низкой частотой мутаций должны происходить от прежних генотипов, тогда как если они * не * фиксированный, позже наблюдаемые генотипы с низкой частотой мутаций могут происходить от предковых генотипов, которые все еще присутствовали в популяции, когда измерялось увеличение частоты мутаций.
Все анализы флуктуаций были выполнены на выборках из смешанных популяций.Следовательно, одним из возможных способов объяснения быстрого снижения частоты мутаций является сдвиг в структуре популяции, когда субпопуляция с еще присутствующей частотой мутаций дикого типа снова фиксируется в популяции. Однако анализ секвенирования в смешанных пулах с использованием низкочастотного вызывающего варианта (CLC Genomics Workbench) показал, что все обнаруженные мутации мутатора восстановления несоответствия (показаны на рисунке 2 — рисунок в приложении 2) стали на 100% фиксированными в популяции и оставались фиксированными даже после уменьшения в скорости мутации не наблюдалось.Следовательно, генотипы с низкой частотой мутаций должны были возникнуть из генотипов с высокой частотой мутаций. Следовательно, отбор генотипов с низкой частотой мутаций должен приводить к быстрому снижению частоты мутаций, наблюдаемому в периоды, когда концентрации этанола оставались постоянными. Скорость фиксации мутанта с более низкой частотой мутаций и более низкой смертностью может быть увеличена за счет более низкой продукции мертвых клеток и, следовательно, более быстрого увеличения доли в популяции по сравнению с популяцией с высокой частотой мутаций и высокой смертностью.
Кроме того, мы секвенировали смешанный пул и один выбранный клон из каждого пула. Таблица 1 теперь заменена рис. 2 — дополнением к рисунку 2, на котором представлены мутации, обнаруженные в образце смешанного пула. Показано как общее количество вариантов (частота> 10%) в каждом пуле, так и количество «фиксированных» (частота> 75%) мутаций. Теперь мы специально добавили упоминание о частоте популяционных мутаций в рукопись, чтобы прояснить происхождение данных о частоте мутаций. Кроме того, мы добавили параграф, объясняющий важность интерпретации данных.
«[…] Следовательно, частота мутаций в популяции будет отражать среднюю скорость геномных мутаций для всей популяции, содержащей различные субпопуляции, которые, возможно, демонстрируют частоту мутаций выше или ниже среднего. Это может объяснить несоответствие между 20-кратным увеличением частоты мутаций конечной точки линии E1 (рис. 3A) и 10-кратным увеличением частоты клональных мутаций, вызванных мутацией mutS G100A , идентифицированной в той же линии (рис. 4A). Более того, эти данные предполагают, что частота мутаций может изменяться вместе со структурой популяции на протяжении эволюции, а не быть фиксированной скоростью после возникновения и распространения одной мутации-мутатора.[…] »
Наш второй комментарий касается удивительно быстрого отбора генотипов с более низкой частотой мутаций в несколько раз в течение эволюции (рис. 5). Как показано выше, чтобы понять, вызвал ли естественный отбор эти изменения (и если предположить, что они отражают скорость мутаций популяции, а не отдельных клонов!), Необходимы две части информации. Во-первых, последствия этих изменений для приспособленности должны быть количественно определены в экспериментах по прямой конкуренции между генотипами с высокой и низкой частотой мутаций в условиях, преобладающих в ходе эволюции.Теперь сравнивается только производство мертвых клеток (рис. 6), но не предпринимается никаких попыток перевести оценки смертности в значения пригодности ни эмпирически (путем проведения этих соревнований), ни теоретически (с использованием моделей роста для прогнозирования этих эффектов). Снижение частоты мутаций в течение 150 поколений продолжающейся эволюции популяции E9 (рис. 7) и его корреляция с более низким образованием мертвых клеток наводят на размышления, но не решают загадки, как показатели смертности трансформируются в приспособленность в условиях отбора.Во-вторых, оценки пригодности генотипов с высокой и низкой частотой мутаций затем следует использовать для прогнозирования динамики снижения частоты мутаций, чтобы увидеть, действительно ли этот механизм может объяснить динамику, показанную на рисунке 5.
В процессе эволюции мы постоянно увеличивали процентное содержание этанола. Поскольку IM2 и IM3 могли расти при одинаковом процентном содержании этанола (7,5%), было бы разумно сравнивать эти промежуточные временные точки друг с другом для определения значений пригодности, связанных со смертностью.Однако разница в количестве поколений между IM2 и IM3 превышает 70, и вполне вероятно, что за это время накопились другие адаптивные мутации, антимутаторные мутации и дополнительная генетическая нагрузка. По этой причине мы считаем крайне маловероятным, что мы можем напрямую связать значение пригодности в результате конкуренции между IM2 и IM3 со смертностью. Поэтому, чтобы ответить на этот комментарий, мы решили рассчитать теоретические последствия для фитнеса, а не проводить прямые соревнования.
Точное прогнозирование влияния смертности на приспособленность потребует создания новой модели роста, включающей параметр для учета влияния уровня смертности. Это потребует проведения новых экспериментов для сбора достаточного количества данных для построения и обоснования новой модели и, возможно, даже нового сотрудничества с более теоретически ориентированной лабораторией. Поэтому здесь мы использовали доступные данные и существующие модели роста для моделирования упрощенного соревновательного эксперимента и расчета значения пригодности и количества раундов отбора, необходимых для исправления генотипа с более низкой частотой мутаций в популяции.
Во-первых, мы определили различные параметры роста, такие как скорость роста (GR) и пропускная способность (y0). С этой целью мы использовали время для роста в присутствии 7,5% EtOH и окончательные измерения плотности клеток, полученные в ходе нашего эволюционного эксперимента. Это приводит к следующим параметрам как для IM2, так и для IM3 (таблицы данных доступны по запросу).
| IM2 | IM3 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| SGR (h -1 ) | 0.0973 | 0,392 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Y 0 | 0,005 | 0,00363 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Y M | 0,292 | 0,392 909 Затем мы использовали эти значения для проведения теоретического эксперимента по конкуренции между IM2 и IM3. Поэтому мы использовали модель роста Гомперца (показанную ниже) для расчета теоретического количества КОЕ / мл для обоих штаммов после 24-часового цикла роста (y (24)).Здесь мы сделали два предположения. Во-первых, мы не смогли получить значение времени запаздывания (LT) из данных нашего эволюционного эксперимента. Поэтому мы разумно предположили, что для IM2 и IM3 время запаздывания одинаково, о чем также свидетельствуют кривые роста, построенные для определения уровня смертности (Рисунок 6 — приложение к рисунку 1). Во-вторых, мы предположили, что индивидуальная динамика роста каждого штамма равна их соответствующей динамике роста в условиях прямой конкуренции друг с другом. y (x) = y0 + yM ∗ e [−e ((2.718 ∗ SGRyM) ∗ (LT − x) +1)]
Затем мы использовали эти значения КОЕ / мл для расчета относительной приспособленности IM3 (низкая частота мутаций) по сравнению с IM2 (высокая частота мутаций), используя дискретное уравнение повторяемости во времени, которое описывает распространение мутанта в гаплоидной популяции ( Изображение ответа автора 1).Для A start и A end мы использовали доли IM2 и IM3 в популяции, определяемые количеством КОЕ / мл для обоих штаммов через 24 часа, как рассчитано на предыдущем этапе. Этот расчет привел к среднему относительному улучшению приспособляемости 3,61 для штамма IM3 с низкой частотой мутаций по сравнению со штаммом IM2 с высокой частотой мутаций. Наконец, мы использовали эту относительную пригодность для оценки количества раундов отбора, необходимых для фиксации IM2 в популяции генотипов IM3.Эффективный размер популяции в нашем эволюционном эксперименте составлял порядка 10 9 КОЕ. Если мы предположим, что мутант, встречающийся в популяции, присутствует в соотношении 1 к 10 9 , то мы можем рассчитать количество раундов отбора, необходимых для увеличения частоты до 99% популяции, при условии, что эта мутация не потеряна. из-за случайного дрейфа. Поэтому мы решили уравнение относительной пригодности для n, как показано на изображении ответа автора 1, используя как относительную приспособленность (3.61) и начальное (10 -9 ) и конечное (0,99) соотношения конкурирующего штамма. Используя эту формулу, мы вычислили n, необходимое IM3 для фиксации в популяции IM2. Это привело к примерно 20 (19,74) раундам отбора, необходимым для фиксации IM3 в популяции с первоначально только генотипами IM2. Если предположить, что за один раунд отбора будет 6,67 поколения, то получится в среднем примерно 132 поколения. Следовательно, теоретическое время, необходимое для фиксации на основе вычисленных параметров приспособленности, превышает фактическое время 10 раундов отбора или 70 поколений, наблюдаемых между промежуточными точками IM2 и IM3.Мы добавили новый дополнительный график, чтобы показать сравнение между рассчитанным и наблюдаемым количеством раундов отбора, необходимых для исправления IM3 (Рисунок 6 — приложение к рисунку 3 и подраздел «Клеточная смертность является основной движущей силой эволюции частоты мутаций»). Несоответствие между этими двумя значениями предполагает возможный прямой эффект дальнейших адаптивных мутаций или самих мутаторных мутаций, накопленных во время последовательных этапов роста между IM2 и IM3, как также предположил рецензент № 2.Эти два штамма различаются не только по смертности и частоте мутаций, но и по дальнейшему накоплению генетической нагрузки и возможным мутациям, которые позволили дальнейшую адаптацию к стрессу 7,5% этанола. Следовательно, трудно связать теоретические расчеты пригодности напрямую с эффектом антимутаторов или только с смертностью, поскольку присутствуют другие факторы, которые могут повлиять на эти значения. Данные, представленные на рис. 7, рис. 7 — дополнение к рисунку 1 и рис. 7 — дополнение к рисунку 2, решают эту проблему в дальнейшем.Здесь мы непрерывно развивали образец гипермутатора из промежуточного момента времени, чтобы снизить частоту мутаций. Снижение частоты мутаций сопровождалось уменьшением образования мертвых клеток. Благодаря введению аллеля Δ mutS мы теперь получили как вариант с низкой частотой мутаций (END), так и вариант с высокой частотой мутаций (END Δ mutS ), которые отличались только своим аллелем mutS (и частотой их мутаций). , но в остальном изогенные. Это позволило рассчитать те же параметры, что и для IM2 и IM3, но теперь результаты должны отражать только влияние изменений частоты мутаций и их последствий на образование мертвых клеток.Чтобы теоретически смоделировать наш конкурентный эксперимент, мы рассчитали количество раундов отбора, необходимое для штамма END Δ mutS , чтобы снизить частоту с 50% до менее 1%. В результате этого расчета среднее количество раундов отбора составило 2,5. Действительно, прямая конкуренция между END и END Δ mutS , начиная с отношения 1: 1, демонстрирует, что после 2 раундов отбора частота штаммов END Δ mutS снизилась до менее чем 10% (Рисунок 7 — приложение к рисунку 1 ).Поскольку оба конкурирующих штамма различаются только скоростью мутаций и смертностью, эти данные подтверждают, что скорость мутаций и смертность являются решающими факторами, объясняющими быстрое увеличение генотипов с низкой частотой мутаций и смертностью, когда штамм уже адаптирован. Чтобы прояснить эту часть в рукописи, мы включили дополнительный график, показывающий, что нет существенной разницы между теоретическим расчетом раундов отбора на основе параметра приспособленности штаммов и наблюдаемым количеством раундов отбора, необходимых для фиксации END (низкая мутация скорости) в эксперименте с прямой конкуренцией (рис. 7 — дополнение к рисунку 2 и подраздел «Клеточная смертность является основной движущей силой эволюции скорости мутаций»). Наш третий комментарий относится к рисунку 1. Во-первых, почему небольшой посевной материал может приводить к гораздо более высоким урожаям, чем крупный посевной материал? Это удивительно, но остается необъяснимым. Во-вторых, следует лучше объяснить идентичность кривых роста. Что отражают серые линии, отдельные повторы или средние кривые для каждого штамма-мутатора? Количество линий указывает на первое, но текст относится к «кривой» роста dnaQ, предполагая, что они отражают средние кривые. Возможно, лучше всего показать кривые среднего роста или подогнанные модели роста для каждого штамма с разными цветами для каждого штамма.Как создаются разные популяции (разного размера)? Они происходят из одной и той же «партии», но в меньшей или в большей степени разбавлены? Или разведение 10 7 происходит из более поздней временной точки меньших разведений? Известно, что физиологическое состояние клеток (например, ранняя экспоненциальная фаза, более поздняя экспоненциальная фаза) в момент их инокулирования влияет на построенные впоследствии кривые роста. Или, возможно, более крупная популяция может «впитать» этанол и, таким образом, эффективно снизить его концентрацию в окружающей среде? (см. e.грамм. DOI: 10.1098 / RSBL.2012.0569) Все инокуляты происходили из одной партии: мутанты дикого типа и тестируемые мутанты выращивали в течение ночи и затем разбавляли для инициации роста, начиная с инокулята разного размера. Таким образом, мы можем исключить возможное влияние физиологического состояния клетки на динамику роста. Однако у нас есть две гипотезы о разнице в урожайности между высоким и низким исходным посевом. Во-первых, ось времени различается для двух размеров посевного материала.Мы отслеживали кривые роста, начиная с большого исходного размера посевного материала в течение 24 часов, по сравнению со 120 часами, когда начинали с небольшого исходного размера посевного материала. Вопрос здесь в том, требует ли начальный рост на 5% этаноле адаптивных мутаций. Мы предположили, что эффект адаптивных мутаций будет смягчен большим начальным размером популяции, о чем свидетельствуют результаты эксперимента и что означает, что большая часть популяции способна расти без адаптивных мутаций.Однако мы не секвенировали какие-либо штаммы после первого цикла роста на 5% этаноле, чтобы подтвердить, необходимы ли адаптивные мутации или нет. Кроме того, мы ожидаем большего количества поколений в случае небольшого исходного размера посевного материала (log 2 (коэффициент разбавления: 100000) = 16,61 поколения) по сравнению со случаем большого исходного размера посевного материала (log 2 (100) = 6,67 поколения). Следовательно, мутант, возникающий в случае небольшого исходного размера инокулята, будет иметь больше времени для проявления, что, возможно, приведет к наблюдаемому более высокому выходу. Во-вторых, рост популяции в условиях сильного стресса может быть облегчен путем замачивания этанола, как было предложено рецензентом. Замачивание было описано для P. aeruginosa , которые продуцируют бактериоцин для устранения возможных конкурентов. Клетки-продуценты часто имеют рецепторы для транслокации и нейтрализации собственного бактериоцина, тем самым снижая общий эффект токсина (Inglis, et al. , 2012). Замачивание этанола может происходить и у больших групп населения, что снижает эффективную концентрацию.Поглощение этанолом и его разложение может происходить из-за мутаций в гене алкогольдегидрогеназы adhE и ранее было связано с более высокой толерантностью к этанолу (Goodarzi, et al. , 2010). Мы изменили текст, чтобы отразить удивительное наблюдение более высоких урожаев мелких посевных культур по сравнению с более низкими урожаями крупных посевных культур. «[…] Удивительно, но большие начальные популяции приводят к более низкому урожаю по сравнению с небольшими начальными размерами популяции. Рост от небольшого посевного материала, вероятно, вызван адаптивными мутациями, в то время как эффект полезной мутации может быть смягчен, если начать с большого посевного материала.Более того, мы ожидаем, что мутант, возникающий в случае небольшого исходного размера инокулята, будет иметь больше времени для проявления (log 2 (коэффициент разведения 100 000) = ± 16,61 поколения) по сравнению с мутантом, встречающимся в случае большой начальный размер популяции (log 2 (100) = ± 6,67 поколений), что, возможно, приведет к наблюдаемому более высокому урожаю […] ». Мы изменили заголовок рисунка, чтобы уточнить идентичность серых линий в исправленной рукописи. Серые линии представляют собой отдельные реплики мутаторных штаммов. «[…] Синяя линия и штриховка представляют сигмоидальную подгонку кривых роста дикого типа (n = 3, подгонка с использованием уравнения Гомперца с 95% CI (затенение), см. Уравнение 1 в разделе методов), а серые линии представляют кривую роста отдельных реплик для каждого мутантного мутанта. […] » Выбранная визуализация была вдохновлена недавней статьей (Peters, et al. , 2016). Отображение всех реплик очень подробно подчеркивает сходство или разнообразие кривых роста для больших и малых посевных культур, соответственно.Мы попытались визуализировать средние кривые роста, как показано на изображении ответа автора 2, но эти графики не полностью отражают дисперсионный характер кривых роста, хотя все еще ясно, что mutS , mutL , uvrD , mutH , mutT и mutM мутанты растут намного быстрее, чем мутанты дикого типа, если исходить из небольшого исходного размера инокулята. [Примечание редакции: до принятия были запрошены дополнительные исправления, как описано ниже.] Рецензенты № 4 и 5: Это кабинет со сложной конструкцией и большим объемом работы. Авторы рассмотрели (или, по крайней мере, попытались) большинство проблем, возникших в последнем раунде исправлений. Однако, как новые рецензенты, у нас есть некоторые дополнительные моменты, которые требуют пояснений авторов. Работа может быть принята с удовлетворительными отзывами. 1) «Более высокая частота мутаций связана с более высокой смертностью, вероятно, из-за длительного накопления генетической нагрузки и повышенной вероятности приобретения летальной мутации».Могло быть более прямое объяснение: Krasovec et al. (2014 Nature Communications) показали, что частота мутаций по результатам анализа флуктуаций обратно коррелирует с плотностью популяции из-за межклеточных взаимодействий. Для одной и той же экспериментальной линии эволюции в разные промежуточные моменты времени более высокая смертность может снизить плотность популяции при том же размере инокулята для анализа флуктуаций, что, в свою очередь, увеличивает скорость мутаций. Эту альтернативную интерпретацию необходимо рассмотреть в существующей экспериментальной системе. Это интересное предложение для объяснения наблюдаемых различий в частоте мутаций. Однако мы считаем, что это не совсем применимо к нашим результатам. У нас есть убедительные данные, показывающие, что мутации-мутаторы произошли до изменения смертности и вызвали увеличение частоты мутаций, а не наоборот (рис. 4). Мы не только смогли идентифицировать эти мутации (рисунок 2 — рисунок в приложении 3), но также показали, что повышенная частота мутаций, вызванная этими мутациями, необходима для обеспечения адаптации в условиях почти летального этанолового стресса.Это было продемонстрировано как с помощью сконструированного набора вариантов частоты мутаций (Рисунок 1), так и в экспериментальном эволюционном эксперименте (Рисунки 2 и 3). Таким образом, мы считаем, что увеличение частоты мутаций было вызвано подлинными мутационными изменениями в генах репарации ДНК, а не следствием повышенной смертности и последующего снижения плотности населения. Кроме того, мы тщательно измерили плотность популяции при выполнении анализа флуктуаций. Это было сделано, чтобы избежать возможного влияния плотности популяции на частоту мутаций, что было элегантно продемонстрировано Krašovec et al. этюд. Мы уточнили это в разделе «Материалы и методы». «[…] Чтобы обеспечить правильное сравнение частоты мутаций, мы проверили, что плотности популяции во время посева на рифампицин существенно не различались. В противном случае испытание повторяли. Статистическая разница между плотностями населения измерялась с использованием однофакторного дисперсионного анализа с апостериорной поправкой Тьюки. Мы не обнаружили существенной разницы для какой-либо промежуточной точки по сравнению со средней плотностью и плотностью других временных точек.Таким образом, мы избегаем возможных эффектов плотности населения (Krašovec, et al. , 2014, Nat. Commun.). […] » Окончательные средние плотности для каждой временной точки E5 (рис. 5A) теперь приведены на панели A изображения ответа автора 3. Расчет коэффициента корреляции Пирсона между абсолютной плотностью популяции и соответствующей частотой мутаций для каждой временной точки (панель B изображения ответа автора 3) продемонстрировали, что плотность популяции не оказала существенного влияния на частоту мутаций в нашем исследовании.Это также показано пунктирной линией, представляющей линейную аппроксимацию по точкам данных, наклон которой незначительно отличается от нуля (P = 0,2318). Далее, в случае, если плотность популяции повлияла бы на частоту мутаций в нашем исследовании, увеличение плотности популяции должно коррелировать с уменьшением частоты мутаций. Однако коэффициент корреляции Пирсона между относительной разницей в плотности популяции между двумя последовательными временными точками и соответствующей разницей в частоте мутаций между этими двумя точками (панель C изображения ответа автора 3) не был значимым (P = 0.511). В заключение, тщательно выполняя тесты флуктуации, когда плотности популяций штаммов существенно не различались, мы четко исключаем возможное влияние плотности клеток на частоту мутаций .2) Хотя авторы интерпретируют данные как доказательства, подтверждающие идею о том, что клетки развивают гипермутации, чтобы избежать вымирания при почти смертельном стрессе, мы также должны рассмотреть более прямую альтернативу. В популяции постоянно генерируются мутанты с различной частотой мутаций.Когда окружающая среда становится стрессовой, распределение эффектов приспособляемости от мутаций соответственно становится шире и менее смещено в сторону вредных мутаций из-за снижения средней приспособленности популяции (например, Hietpas et al., 2013). В результате нагрузка мутаций гипермутаторов по сравнению с WT становится меньше, и гипермутаторы с большей вероятностью выживут или даже преуспеют (если их совершить автостопом с полезными мутациями). Аргумент может быть изменен, когда организмы станут более приспособленными к новой среде, чтобы объяснить снижение количества гипермутаторов.Таким образом, динамический образец частоты мутаций можно понимать как пассивный баланс между притоком (за счет случайных мутаций) и оттоком (из-за накопленной генетической нагрузки) мутаторов, не вызывая какой-либо активной реакции. Было бы полезно, если бы авторы могли прояснить, соответствуют ли их данные их утверждениям и почему они лучше, чем приведенная выше альтернативная интерпретация. Мы благодарим рецензентов за указание на эту альтернативную интерпретацию данных. Однако мы полагаем, что эта интерпретация, по крайней мере, частично перекликается с нашей текущей интерпретацией данных. Наши результаты подтверждают идею о том, что только клетки с повышенной частотой мутаций могут генерировать достаточное генетическое разнообразие за короткий период времени, чтобы избежать вымирания и обеспечить адаптацию в условиях почти летального этанолового стресса (потенциально чему способствует более широкое и менее опасное распределение, обусловленное мутациями фитнес-эффектов). Однако мы не утверждаем, что возникновение гипермутации само по себе является активным процессом. Таким образом, наша интерпретация во многом соответствует интерпретации, предложенной рецензентами.Действительно, в популяции постоянно появляются мутанты с вариациями скорости мутаций. Более того, в изменяющихся средах возникновение гипермутируемых вариантов может быть облегчено, поскольку больше мутаций являются полезными из-за снижения средней приспособленности популяции (Hietpas, et al., 2013, Evolution). Как предположили составители обзора, это может означать, что в условиях такого близкого к летальному исходу генетическая нагрузка гипермутируемых вариантов менее подвержена влиянию вредных мутаций, что, возможно, способствует появлению мутаторов.Более того, мы считаем, что эти мутаторы имеют решающее значение для адаптации и предотвращения исчезновения. Поскольку мы наблюдали гипермутацию во всех эволюционировавших линиях с высокой толерантностью к этанолу, но не в линиях с низкой толерантностью к этанолу. У нас есть убедительные данные, подтверждающие идею о том, что только клетки с более высокой частотой мутаций могут быстро приобретать адаптивные мутации, чтобы избежать исчезновения. Кроме того, наши результаты также подтверждают, что уровень смертности и уровень мутаций в популяции взаимосвязаны. Эти данные предполагают, что более высокая смертность становится ценой гипермутации, когда популяция уже адаптирована (возможно, в результате распределения эффектов приспособленности, которые снова стали более узкими и смещенными в сторону вредных мутаций).Следовательно, мутанты с более низкой частотой мутаций и более низкой смертностью будут иметь большее преимущество и захватят популяцию, тем самым снизив общую скорость мутаций. В заключение мы констатируем, что наша интерпретация во многом перекликается с той, что была предложена рецензентами. Чтобы прояснить это в рукописи, мы соответствующим образом скорректировали текст. «[…] В заключение, хотя мутантные мутанты возникают в популяции спонтанно, эти данные предполагают, что гипермутация является предпосылкой, как движущей силой, для адаптации к высоким уровням этанола таким образом, что только линии с более высокой частотой мутаций чем частота мутаций дикого типа способна развить высокую толерантность к этанолу (рис. 3В).[…] » «[…] Рост гипермутации во время адаптации к почти летальному этанольному стрессу связан с идеей отбора второго порядка, о чем свидетельствует скорость роста и время задержки, измеренные для коллекции мутантных мутантов при 5% этанольном стрессе (рис. 1; рисунок 1 — приложение к рисунку 3), и этому может способствовать более широкое и менее зависимое от вредных мутаций распределение эффектов приспособленности в стрессовой среде (Hietpas, et al. , 2013 Evolution). […] » Обратите внимание, что приведенный выше аргумент предполагает, что эффекты приспособленности обусловлены вторичными мутациями, поэтому открытие авторами потенциальных прямых эффектов мутаций, генерирующих мутаторы (например,грамм. mutS на рисунке 1 — рисунок в приложении 4) не изменяется. Однако в нынешней формулировке потенциальная прямая выгода от этих мутаций не кажется основным посланием, которое они пытаются оказать. Также неясно, почему авторы заявляют, что «… эти прямые эффекты… могут не напрямую влиять на ранний выбор гипермутации, но могут стать решающими в плане ее более низкой стоимости на более поздних стадиях». Мы признаем, что возможные прямые эффекты мутаций-мутаторов могут играть роль, даже несмотря на то, что наши данные (рис. 1) решительно подтверждают идею о том, что частота мутаторов увеличивается за счет отбора второго порядка связанных полезных мутаций.Прямые эффекты могут повлиять на то, какая конкретная мутация-мутатор в конечном итоге будет распространяться, но для начальной адаптации эффект гипермутации (с его косвенными эффектами связанных полезных мутаций) явно намного важнее, чем (различные) небольшие прямые эффекты конкретных мутаций-мутаторов . Чтобы прояснить эту часть, мы соответствующим образом изменили раздел «Обсуждение» рукописи: «[…] Следовательно, эти прямые эффекты, которые обычно являются результатом нарушения работы одной конкретной системы или даже одного конкретного гена, могут повлиять на то, какие конкретные мутации-мутаторы в конечном итоге распространятся, но будут иметь лишь ограниченное влияние на первоначальный выбор гипермутация по сравнению с прямым эффектом связанных полезных мутаций.Однако на более поздних стадиях эти прямые эффекты, возможно, повлияют на судьбу гипермутаторов, снизив стоимость длительного накопления генетической нагрузки. […] » https://doi.org/10.7554/eLife.22939.031Tuner School — научитесь делать быстрые машины быстрее!Слушайте подкаст Apple Слушайте на Spotify Хеннесси празднует 30-летие создания быстрых автомобилей быстрее Джон Хеннесси вспоминает о том, что он был пионером скорости и поддерживает семью, прекрасных клиентов и быстрые автомобили, которые сформировали…
Отзыв от школы тюнеров Хеннесси: Дэвид Дэвид из Далласа, штат Техас, обсуждает свое решение выбрать школу тюнеров! Хотите узнать, как сделать быстрые машины быстрее? Посетите школу тюнеров, где в нашем классе есть…
Отзыв от школы тюнеров Хеннесси: Зигги Зигги из Бельгии рассказывает о своем решении выбрать школу тюнеров! Хотите узнать, как сделать быстрые машины быстрее? Посетите школу тюнеров, где в нашем классе есть шасси…
Видеоблог школы тюнеров Эпизод 1, сезон 1 Добро пожаловать в видеоблог школы тюнеров.Скоро будет больше! Хотите узнать, как сделать быстрые машины быстрее? Посетите школу тюнера, где в нашем классе есть…
Отзыв от школы тюнеров Хеннесси: Джейсон Джейсон из Нью-Йорка обсуждает свое решение выбрать школу тюнеров! Хотите узнать, как сделать быстрые машины быстрее? Посетите школу тюнера, где в нашем классе есть… Выпускной класс школы тюнеров лета 2019
Хеннесси из школы тюнеров Отзыв: Родриго Родриго, уроженец Техаса, рассказывает о своем пребывании в школе тюнеров и о том, что заставило его увлечься быстрыми автомобилями! Хотите узнать, как сделать быстрые машины быстрее? Проверьте тюнер…
Выпускник школы тюнера и сотрудник Hennessey Performance рассказывают о своем опыте в классе и о том, что заставило его подать заявление.
Тайлер из Арканзаса расширяет свои знания о высокопроизводительных модификациях, записавшись в школу тюнера, путешествуя со своим отцом. Выпускники школы тюнеров Spring Class 2019 празднуют свое достижение в изучении того, как делать быстрые автомобили быстрее! Послание всем выпускникам Hennessey Performance: «Вы всегда будете помнить этот день, как и все… КамертонFAST — TF TunedМодернизация подвески FAST TF Tuned FAST Suspension Обновления и тюнинг являются дополнением к стандартной услуге. Это означает, что ваша вилка получит все, что обычно нравится TFT — новые уплотнения дворников, пена, уплотнительные кольца, масла, изменение размера втулки при необходимости и все остальное, что может потребоваться. Затем мы работаем над улучшением вашей подвески, устанавливая внутренние компоненты FAST upgrade. * Обратите внимание, что некоторые обновления FAST для вилок FOX могут иметь короткое время выполнения, поэтому звоните перед бронированием, если у вас есть крайний срок! *
Настройка цвета флуорогенов для белка, активирующего флуороген FAST.2021, 24 февраля; 27 (12): 3986-3990. DOI: 10.1002 / chem.202004760. Epub 2021 2 февраля.Принадлежности Расширять Принадлежности
Элемент в буфере обмена Иван Н Мяснянко и др. Химия. . Показать детали Показать вариантыПоказать варианты Формат АннотацияPubMedPMID . 2021, 24 февраля; 27 (12): 3986-3990. DOI: 10.1002 / chem.202004760. Epub 2021 2 февраля.Принадлежности
Элемент в буфере обмена Полнотекстовые ссылки Опции CiteDisplayПоказать варианты Формат АннотацияPubMedPMID АбстрактныйИспользуя ядро из бензилиденимидазолона, мы создали панель флуорогенных лигандов со смещенным цветом для белка FAST без ущерба для эффективности связывания и полезности для мечения белков живых клеток.Это исследование подчеркивает потенциал производных бензилиденимидазолонов для быстрого расширения ассортимента флюорогенных инструментов для маркировки живых клеток. Ключевые слова: хромофор; флуоресценция; флуоресцентная маркировка; белки, активирующие флуороген; зеленый флуоресцентный белок. © 2020 Wiley-VCH GmbH. Похожие статьи
| 78.
Int J Mol Sci.2018.
PMID: 30486502
Бесплатная статья PMC.|||||||||||||||||||||||||||||||||||